MHV-3诱导小鼠暴发性肝炎模型中γδT细胞的抑制性受体表达

《中国医学创新》第１０卷第９期（总第２５５期）２０１３年３月　基础研究Ｊｉｃｈｕｙａｎｊｉｕ　ＭＨＶ一３诱导小鼠暴发性肝炎模型中　Ｔ细胞的　抑制性受体表达术　杨潇瑾①　严伟明①　吴迪①　陈韬①　罗小平②　宁琴①　【摘要】目的：通过分析在ＭＨＶ一３诱导的小鼠暴发性肝炎模型中，小鼠感染病毒前后　８Ｔ细胞其抑制性受体ＮＫＧ２Ａ表达情况，以　此探讨爆发性肝炎初期疾病急速恶化的机制。方法：建立ＭＨＶ一３诱导小鼠暴发性肝炎模型，观察小鼠的死亡率；并检测在不同感染时间点　０　ｈ、１２　ｈ、２４　ｈ、４８　ｈ时对小鼠肝组织行伊红一苏木精染色（ＨＥ染色），观察肝脏病理学改变，ＡＩＪＴ和ＡＳＴ水平。流式细胞学方法，标记　Ｊｙ　８Ｔ细胞，并标记其ＮＫＧ２Ａ的表达。结果：ＭＨＶ一３诱导小鼠暴发性肝炎模型中，　８Ｔ表面所表达活化性受体ＮＫＧ２Ａ表达维持低水平。　结论：小鼠爆发性肝炎初期，肝脏重要的天然免疫效应细胞＾ｙ　８　Ｔ细胞细胞表面抑制性受体ＮＫＧ２Ａ维持低水平表达，提示机体负调控机制　缺失，导致＾ｙ　８　Ｔ细胞可抑制性低下，最终引起免疫失衡。　【关键词】暴发性肝炎；　３型鼠肝炎病毒；　８Ｔ细胞；　８Ｔ细胞抑制；　ＮＫＧ２Ａ　８　Ｔ　Ｃｅｌｌ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ＭＩ－ＩＶ－３　Ｉｎｄｕｃｅｄ　Ｍｏｕｓｅ　Ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　Ｆｕｌｍｉｎａｎｔ　Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ／ＹＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｊｉｎ，ＹＡＮ　Ｗｅｉ－ｍｉｎｇ，　ＷＵ　Ｄｉ，ｅｔ　ａｌＪ／Ｍｅｄｉｃａｌ　ｎＩｎｏｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ。２０１３。１０（９）：０１７—０１９　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ａｎａｌｙｚｅ　ｍｉｃｅ　ＭＨＶ一３一ｉｎｄｕｃｅｄ　ｆｕｌｍｉｎａｎｔ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｍｏｄｅｌ，ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｖｉｒｕｓ　ｂｅｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　８　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｉｔｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ＮＫＧ２Ａ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒａｐｉｄ　ｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｕｌｍｉｎａｎｔ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｅａｒｌｙ　ｄｉｓｅａｓｅ．　Ｍｅｔｈｏｄ：ＭＨＶ－３　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｆｕｌｍｉｎａｎｔ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｍｏｄｅｌ，ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔ　ｏｆ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　０　ｈ，１　２ｈ，　２４ｈ，４８ｈ　ｌｉｎｅ　ｏｆ　ｍｏｕｓｅ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅ　Ｙｉｈｏｎｇ—ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ　ｓｔａｉｎｉｎｇ（ＨＥ　ｓｔａｉｎｉｎｇ）ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ＡＬＴ　ａｎｄ　ＡＳＴ　ｌｅｖｅｌｓ．Ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｙｒ　ｍｅｔｈｏｄ，ｌａｂｅｌｅｄ　８　Ｔ　ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ　ｍａｒｋｅｄ　ＮＫＧ２Ａ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＭＨＶ一３　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｆｕｌｍｉｎａｎｔ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ，　８　Ｔ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｂｙ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ＮＫＧ２Ａ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｒｅｍａｉｎｅｄ　ｌｏｗ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｍｉｃｅ　ｅａｒｌｙ　ｆｕｌｍｉｎａｎｔ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ，ｌｉｖｅｒ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｃｅｉｌｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｎａｔｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｅｆｆｅｃｔｏｒ　ｃｅｌｌｓ　８　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ＮＫＧ２Ａ　ｍａｉｎｔａｉｎ　ｌｏｗ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｓｕｂｊｅｃｔ　ｔｏ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｏｄｙ　ｍｉｓｓｉｎｇ，ｌｅａｄｉｎｇ　８　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｄｅｃｒｅａｓｅ，ｅｖｅｎｔｕａｌｌｙ　ｃａｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｉｍｂａｌａｎｃｅ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】Ａｃｕｔｅ　ｆｕｌｍｉｎａｔｅ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ；　ＭＨＶ一３；　８　Ｔ　ｃｅｌｌ；　８　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ；　ＮＫＧ２Ａ　Ｆｉｒｓｔ－ａｕｔｈｏｒ’ｓ　ａｄｄｒｅｓｓ：Ｔｏｎｇｊｉ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　Ａｆｆｉｌｉｌａｔｅｄ　ｔｏ　Ｔｏｎｇｊｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｕａｚｈｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ｔｏｎ　ｉ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　Ａｆｉｆｌｉａｔｅｄ　ｔｏ　Ｔｏｎｇｊｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＨｕａｚｈｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆＳｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅ。Ｗｕｈａｎ　４３００３０，Ｃｈｉｎａ　ｄｏｉ：１０．３９６９０．ｉｓｓｎ．１６７４—４９８５．２０１３．０９．００８　重型肝炎依发病基础分为急性重型肝炎（暴发性肝衰　中发挥重要作用；而　８　Ｔ细胞由于其分布特点和应答的非　竭）、亚急性重型肝炎（亚暴发性肝衰竭）及慢性重型肝炎。　ＭＨＣ限制性，在固有性免疫中发挥着独特的作用【２］。－ｙ　８　Ｔ　国内普遍认为暴发性肝衰竭、亚暴发性肝衰竭的时限分别为　细胞的功能调控（如ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ａ等相关分子），在天　１４　ｄ内、１５　ｄ～２４周（半年）。其中急性重型肝炎（暴发性肝　然免疫阶段具有相当的意义［３】。ＮＫＧ２Ａ作为　８　Ｔ细胞的　衰竭）死亡率高达７０％以上。有研究证实，３型鼠肝炎病　抑制性受体，其表达的改变，对疾病的进展有一定的意义。　毒（ｍｕｒｉｎｅ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ　ｓｔｒａｉｎ　３，ＭＨＶ一３）诱导的小鼠暴发　本试验利用ＭＨＶ一３感染ＢＡＬＢ／ｃＪ小鼠，建立小鼠爆发性肝　性肝炎，其病程转归及疾病预后和急性肝衰竭相似，因此该　炎模型，通过检测小鼠肝脏中　８　Ｔ细胞表面抑制性受体　模型是研究急性重型肝炎良好的动物模型之一。肝脏是不仅　ＮＫＧ２Ａ分子表达，探求爆发性肝炎可能的干预途径。　是机体重要的消化器官也是重要的免疫器官，其中含有大量　１材料与方法　参与特异性免疫以及非特异性免疫的免疫细胞。Ｔ细胞免疫　１．１材料ＢＬＡＢ／ｃｊ小鼠（雌性，６－８周龄）购于北京利华（实　应答在感染性疾病中发挥着抗感染和清除外来病原微生物的　验动物）有限公司。饲养于华中科技大学同济医学院附属同　重要作用。根据ＴＣＲ两条肽链构成的不同，可将Ｔ细胞分　济医院感染性疾病研究所（感染免疫实验室），ＳＰＦ级，温　为ｏｔ　ＢＴ细胞和　８Ｔ细胞，ｏｔ　ｐＴ细胞在获得性免疫应答　度２５℃，湿度７０％。　１．２试剂与仪器ＭＨＶ一３原种来自美国育种保育中心　基金项目：国家自然基金重点项目（编号：８１０３０００７）；国家青年　（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ），　在本实验室以Ｌ２型单层种细胞进　科学基金项目（编号：８１１００３０８）　行扩增。可以以无菌ＰＢＳ或生理盐水配置成合适浓度，用于　①华中科技大学同济医学院附属同济医院；华中科技大学同济医学　模型建立。流式细胞仪分析不同荧光标记的抗小鼠单克隆抗　院附属同济医院感染性疾病研究所湖北武汉４３００３０　体。ＣＤ３ｅ，＾，８ＴＣＲ，ＮＫＧ２Ａ，ＮＫＧ２Ａｉｓｏ（分另０以ＰＥＣｙ一　②华中科技大学同济医学院附属同济医院　５．５，ＡＰＣ，ＰＥ进行标识）抗体均购于ｅＢ　ｉｏｓｃｉｅｎｃｅ公司；无　通讯作者：宁琴　菌生理盐水购于上海百特医药公司；无菌ＰＢＳ为自行配制；　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ　Ｖｏ１．１０。Ｎｏ．９　Ｍａｒ。２０１３　一１７—　基础研究Ｊｉｃｈｕｙａｎｊｉｕ　《中国医学创新》第１０卷第９期（总第２５５期）２０１３年３ｆｌ　Ｐｅｒｃｏｌｌ购自Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司。流式细胞仪购于ＢＤ公司，为　本实验室固定财产。　１．３方法　１．５统计学处理使用ＳＰＳＳ　２．０统计学软件分析，并用　ＧｒａｐｈＰａｄ　Ｐｒｉｓｍ作图软件进行绘制。计量资料以（　±ｓ）表示，　采用ｔ检验或者ＡＮＯＶＡ统计学方法分析数据，Ｐ＜Ｏ．０５为差　ＭＨＶ一３以无菌生理　异有统计学意义。　２结果　１．３．１建立暴发性肝炎小鼠动物模型盐水重悬配置，制备感染液，合适浓度为５００　ＰＦＵ／ｍｌ。以腹　腔注射方式感染小鼠感染每只小鼠腹腔注射２００　ｌ感染液　（１００　ＰＦＵ感染每只小鼠）。不同时间点３　１０只，每次实验　重复３次。对照组以无菌生理盐水以同等剂量注入小鼠腹腔。　２．１　ＭＨＶ一３小鼠暴发性肝炎模型小鼠生存率观察正常　ＢＬＡＢ／ｃｉ小鼠腹腔注射生理盐水作为对照组，腹腔注射含　ＭＨＶ一３病毒生理盐水作为模型组。持续观察小鼠死亡时间　及生存率见图１。７２　ｈ时，感染组小鼠开始出现死亡，直至　１２０ｈ时，感染组小鼠全部死亡。见图ｔ。　口Ｉ　Ｏ　１．３．２小鼠肝脏非实质细胞获得脊椎脱臼处死不同组别小　鼠，取出小鼠肝脏。将肝脏置于不锈钢滤网（２００目）上，　用１　ｍｌ注射器吸取生理盐水反复冲洗，轻柔碾碎，使得细胞　经网进入平皿的ＰＢＳ中，得到细胞悬液；５００　ｒ／ｍｉｎ，离心机　离心５　ｍｉｎ，留取悬浮液，去沉淀；再次１５００　ｒ／ｍｉｎ，离心机　离心１０　ｍｉｎ，留取沉淀。取沉淀与１０　ｍｌ　４０％Ｐｅｒｃｏｌｌ（原液　与无菌ＰＢＳ配制成）充分混匀，离心。弃去上清，留取沉淀；　用Ｔｒｉｓ—ＮＨ４Ｃ１破去红细胞，ＰＢＳ充分润洗；重悬后，即得　肝脏小鼠非实质细胞悬液。　１．３．３小鼠外周血清ＡＩＪＴ以及ＡＳＴ的检测检测。　取小鼠外周血，　生理盐水组　嗣ＭＨＶ一３ｆｉｔ　０・８　碍　壮　０・６　０．４　于华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科化验室进行　１．３．４小鼠肝脏病理切片制作取小鼠肝脏，于福尔马林液　（）＿２　（）．０　ｏ　ｈ　２４　ｈ　４８　ｈ　７２　ｈ　９６　ｈ　Ｉ２０　ｈ　中固定，于武汉谷歌生物有限公司进行伊红一苏木精染色　ＨＥ　染色），并拍照。　１．３．５细胞表型分析收集待测细胞，离心，弃去上清。用　图１　各时间点小鼠生存率比较　注：实验重复３次，每次每组１０只小鼠　２．２　ＭＨＶ一３暴发性肝炎模型小鼠谷丙转氨酶以及谷草转氨　酶的检测检测感染组小鼠０　ｈ、１２　ｈ、４８　ｈ、７２　ｈ小鼠外周　血谷丙转氨酶以及谷草转氨酶含量。图２为小鼠暴发性肝炎　模型０ｈ、１２ｈ、４８　ｈ、７２ｈ的血清ＡＬＴ的含量，在小鼠腹腔　ＰＢＳ重悬混匀细胞，加入荧光标记的抗体，分别标记ＣＤ３ｅ，　８　ＴＣＲ，ＮＫＧ２Ａ，ＮＫＧ２Ａｉｓｏ，室温避光孵育２０—３０　ａｉｒｎ，　用ＰＢＳ洗２次，流式细胞仪上机分析。　１．４观察指标感染组小鼠死亡时间以及个时间点死亡率。　注射ＭＨＶ一３病毒４８　ｈ，血清ＡＬＴ含量显著高于生理盐水对　照组小鼠血清Ａ　含量。同时，小鼠暴发性肝炎模型４８　ｈ的　检测小鼠外周血清ＡＬＴ、ＡＳＴ含量。取小鼠肝脏制作ＨＥ病　理切片后观察肝脏病理变化。流式细胞仪观察各组小鼠肝脏　血清ＡｌＪｒｒ，显著高于该模型１２　ｈ、２４　ｈ的血清ＡＩＪｒｒ和ＡＳＴ　非实质细胞　６　Ｔ细胞表达ＮＫＧ２Ａ受体的差异性。　含量。见表１。　表１小鼠血清ＡＬＴ（　±５）　Ｕ／Ｌ　｛与对照组比较，Ｐ＜Ｏ．Ｏｌ　２５００　２０００　４８　ｈ后肝脏病理切片示肝细胞有较多的核分裂，有较多的中　性粒细胞浸润，局部呈小灶性炎症细胞浸润，其周围有大量　肝细胞死亡（符合重型肝炎病理学诊断）见图３。　１５００　１０００　５００　Ｏ　０　ｈ　ｌ２　ｈ　２４　ｈ　４８　ｈ　７２　ｈ　生理盐水组　一　ＭＨＶ一３感染组　图２小鼠外周血清ＡＬＴ含量　图３小鼠肝脏ＨＥ染色病理切片　２．３小鼠肝脏病理学变化分别选取未处理小鼠肝脏、腹　２．４＾ｙ　８　Ｔ细胞广泛存在于ＭＨＶ一３感染前后小鼠肝脏内。　腔注射生理盐水对照组的小鼠肝脏，暴发性肝炎模型４８　ｈ的　已有研究表明　８Ｔ可以广泛存在于机体免疫器官，　８Ｔ　细胞作为重要的天然免疫细胞，发挥着重要作用。如图４所示，　ＭＨＶ一３感染前后，小鼠肝脏内均存在一定数量的　８　Ｔ细胞。　Ｍｅｄｉｃａｌｌｎｎｏｖａｔｉｏｎ　０ｆ　Ｃｈｉｎａ　Ｖｏ１．１　０，Ｎｏ．９　Ｍａｒ。２０１　３　小鼠肝脏进行病理学检查。腹腔注射生理盐水对照组的小鼠　肝脏病理切片图与未处理组的肝脏切片相似；感染ＭＨＶ一３，　１８—　一《中国医学创新》第１０Ｓ第９期（总第２５５期）２０１３年３ｆｌ　基础研究Ｊｉｃｈｕｙａｎｊｉｕ　２．５　ＮＫＧ２Ａ持续低水平表达检测肝脏中　８Ｔ细胞表　近年来的研究不断升温【４】。如今，对于　８　Ｔ细胞的抗原识　达　８　Ｔ细胞抑制性受体ＮＫＧ２Ａ的比例，以及抑制性受体　别方式和无ＭＨＣ限制性已达成共识　】。但是，　８Ｔ细胞　ＮＫＧ２Ａ的平均荧光强度。流式细胞检测后发现感染ＭＨＶ一３　作为一群具有的效应功能的免疫细胞，其调控机制尚不明确。　４８　ｈ，小鼠肝脏　８　Ｔ细胞表达ＮＫＧ２Ａ的细胞比例基本未　＾ｙ　８　Ｔ细胞是固有免疫的效应性细胞，在病毒性感染疾病如　发生变化，但是其活化受体ＮＫＧ２Ａ的平均荧光强度持续低　柯萨奇病毒Ｂ３（ＣＯＸ　ｓａｃｋ　ｉｅｖｉｒｕｓＢ　３，ＣＶＢ３）、巨细胞病毒　水平表达（图５），另外ＮＫＧ２Ａ　ｉｓｏ染色，排除非特异性染色。　（Ｃｙ　ｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＣＭＶ）等发挥着重要作用［６－７１ｏ因此，研　究　８Ｔ的调控机制，对疾病的发病机制，生理病理学研究、　疾病的治疗、疾病的转归、以及疾病的预防具有非常重要的　意义［８－９］ｏ在慢性病毒性肝炎小鼠模型中，＾ｙ　８Ｔ细胞可以　大量杀伤肝脏细胞，因此，研究该细胞活化机制，对研究人　类肝炎病毒诱发急性肝衰竭的发病机制，治疗方法有十分重　要的意义。ＮＫＧ２Ａ作为＾ｙ　８　Ｔ细胞表面重要的抑制性受体，　表达的高低对于预后有一定的意义　。本研究表明，在小鼠　暴发性肝炎（ＭＨＶ一３）中，感染小鼠肝脏内＾ｙ　８Ｔ细胞表　达ＮＫＧ２Ａ的细胞数量以及强度持续低水平表达。该实验提　感染前　ＭＨＶ一３感染４８ｈ后　示，＾ｙ　８　Ｔ细胞作为重要的天然免疫细胞，如能在暴发性肝　图４感染前后。小鼠肝脏内均存在ｙ　６Ｔ细胞　炎早期，通过药物、基因调控、细胞治疗等方法提高　８　Ｔ　细胞表达ＮＫＧ２Ａ，则可能为疾病的治疗提供重要的方法。　参考文献　［１］ＬｕＹ，ＷａｎｇＸ，ＹａｎＷ，ｅｔ　ａ１．ＬｉｖｅｒＴＣＲ　８（＋）ＣＤ３（＋）ＣＤ４（一）　ＣＤ８（一）Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ　ｔｏ　ｍｕｒｉｎｅ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ　ｓｔｒａｉｎ　３－ｉｎｄｕｃｅｄ　感染前　感染后　ｈｅｐａｔｉｃ　ｉｎｊｕｒｙ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ａ　ＴＮＦ－　－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，　图５　ＮＫＧ２Ａ持续低水平表达　２０１２，５２（３－４）：２２９—３６．　３讨论　［２］Ｗａｎｇ　Ｌ，Ｋａｎｇ　Ｎ，Ｚｈｏｕ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｄ０ｗｎｒｅｇｕｌａｔｉ０ｎ　ｏｆ　ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ　在ＭＨＶ一３诱导小鼠暴发性肝炎模型中，小鼠感染病毒　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｏｎ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　８　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｓｙｓｔｅｍｉｃ　７２小时开始出现死亡，直至１２０　ｈ时，感染组小鼠全部死　ｌｕｐｕｓ　ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ［Ｊ］．Ｓｃａｎｄ　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１２，７６（１）：６２－９．　亡。该模型较好的反应了暴发性肝炎（肝炎重症化）的预　【３】ＦｏｕｒｅａｎＤＭ，ＭｃＫｉｌｌｏｐＩＨ，ＪｏｎｅｓＣＰ，ｅｔ　ａ１．Ｓｋｉｎｔｕｍｏｒ　ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ　后。另外综合小鼠外周血清ＡＬＴ、ＡＳＴ含量变化与小鼠肝脏　ｔｏ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ａｎｄ　ＣＤ８　Ｆｏｘｐ３＋Ｔ　ｃｅｌｌ　ｅｘｐａｎｓｉｏｎ　ｉｎ　ａｎ　ＨＥ病理切片，选取４８　ｈ为该模型实验观察关键时间点，具　ｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｅｔｅｎｔ　ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，　有合理性。＾ｙ　８　Ｔ细胞表面可以表达多种调节性受体，其中　２０１１，６０（９）：１３４７—５６．　ＮＫＧ２Ａ是重要的抑制性受体。当ＮＫＧ２Ａ表达增高，＾ｙ　８　Ｔ　］Ｇｅ　ＳＪ，ＤｕａｎＬＮ，ＬｕｏＹ，ｅｔａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆＮＫＧ２Ｄ　ａｎｄＮＫＧ２Ａｗｉｔｈ　即被抑制，作为重要的免疫细胞，在天然免疫阶段发挥重要　ｔｈｅｉｒ　ｌｉｇａｎｄｓ　ＭＨＣ—Ｉ　Ａ／Ｂ　ａｎｄ　ＨＬＡ—Ｅ　ｉｎ　ａｃｕｔｅ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ａｎｄ　作用。当ＮＫＧ２Ａ在＾ｙ　８Ｔ细胞上持续低水平表达，受机体　ｉｔｓ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ［Ｊ］．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｓｈｉ　Ｙａｈ　Ｘｕｅ　Ｙｅ　Ｘｕｅ　Ｚａ　Ｚｈｉ，２０１　１，１９（２）：　负调控机制缺失，导致　８Ｔ细胞可抑制性低下，＾ｙ　８Ｔ细　３１２－３１６．　胞可以被其他免疫调节细胞快速激活，而无法维持免疫稳态。　［５］田爱，焦琳，王熙才．　８Ｔ细胞与疾病的关系［Ｊ］．现代肿瘤医学，　因此，笔者用流式细胞技术检测小鼠肝脏非实质细胞＾ｙ　８　Ｔ　２０１２，２０（７）：２０．　细胞以及其表面ＮＫＧ２Ａ表达。在现有现代免疫学技术条件　［６］Ａｎｇｅｌｉｎｉ　ＤＦ，Ｚａｍｂｅｌｌｏ　Ｒ，Ｇａｌａｎｄｒｉｎｉ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．ＮＫＧ２Ａ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　下，该方法广泛应用于细胞表面标志物检测，得到广大国际　ＮＫＧ２Ｃ　ｅｆｆｅｃｔｏｒ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　８　Ｔ　ｃｅｌｌｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　同行认可。检测后，发现　８Ｔ细胞活化受体ＮＫＧ２Ａ的平　ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｌｅｕｋｏｃ　Ｂｉｏｌ，２０１１，８９（１）：７５－８４．　均荧光强度持续低水平表达。此现象可能与重症肝炎预后较　［７］李军，魏海明，张瑞军．结核杆菌耐热抗原对人外周血淋巴细胞　差有一定的联系。然而本实验仍有一定不足，如该小鼠模型　ＮＫＧ２ＭＮＫＧ２Ｄ的影响［Ｊ］．中国免疫学杂志，２００５，２１（８）：１５．　仍不能完全等同于人类重症肝炎病理生理变化，其细胞表面　［８】吴迪，郭威，王洪武，等ＩＴ细胞抗原受体　８～　细胞在小鼠暴发　标志物的表达是否与人类细胞有共性，以及细胞染色技术是　型肝炎模型中的作用啪．中西医结合肝病杂志，２０１２，２２（３）：２０．　否完全成熟，实验技术年代性局限等问题有待今后实验进一　【９］Ｙａｎｙａｎ　Ｗａｎｇｌ，Ｈａｒｔ　Ｘｕ，Ｘｉａｏｄｏｎｇ　Ｚｈｅｎｇ，ｅｔ　ａ１．Ｈｉｇｈ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　步完善。　ＮＫＧ２Ａ／ＣＤ９４　ａｎｄ　ｌｏｗ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｇｒａｎｚｙｍｅ　Ｂ　ａｒｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　重型肝炎是一类病死率甚高、严重威胁人们健康的肝脏　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｃｏｒｄ　ｂｌｏｏｄ　ＮＫ　ｃｅｌｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｃｅｌｌｕｌａｒ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，　疾病。我国病毒性肝炎防治方案（试行）将重型肝炎分为急性、　２００７，４（５）：３０．　亚急性和慢性重型肝炎。其中急性重型肝炎发病急，病死率高，　［１０］Ｍａｌｏｎｅ　Ｆ，Ｃａｒｐｅｒ　Ｋ，Ｒｅｙｅｓ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．ｇａｍｍａｄｅｌｔａＴ　ｅｅＮｓ　ａ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　研究其发病机制，治疗以及预后转归具有重要的临床意义。　ｌｉｖｅｒ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ　ｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．Ｔｒｎａｓｐｌｎａｔ　Ｐｒｏｃ，２００９，４１（１）：２３３－２３５．　６　Ｔ细胞作为一种有独特构成和独特功能的Ｔ细胞，　（收稿日期：２０１３—０１—０４）（本文编辑：车艳）　ＭｅｄｉｃａＩｌｎｎｏｖａｔｉｏｎ　０ｆ　Ｃｈｉｎａ　Ｖｏ１．１０。Ｎｏ．９　Ｍａｒ。２０１３　一１９—