病毒检验基本技术——病毒的培养条件

病毒检验基本技术——病毒的培养条件

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病毒检验基本技术——病毒的培养条件

实验动物、鸡胚以及体外培养的器官和细胞都可以作为人工增殖病毒的基本工具。而大量病毒的培养，又是病毒学实验研究以及制备疫苗和特异性诊断试剂的先决条件。

1．组织培养

病毒在细胞内的增殖及其对细胞的作用，可以根据细胞病变、细胞培养物内出现血凝素或其他病毒抗原、红细胞吸附现象以及通过对“指示病毒”的干扰等方法加以识别。

组织培养用的玻璃器皿要求比较严格，要用硫酸和重酪酸钾溶液浸泡后再清洗应用。

常用于组织培养的人工综合营养液的主要成分有氨基酸、糖类、无机盐、维生素和辅助生长因子等，常用的人工综合营养液为MEM和RPMI1640。用人工综合营养液配制细胞生长液时需要加入适量血清和谷氨酰胺溶液，还需要加入规定量的抗生素溶液防止细菌污染，加人碳酸氢钠溶液修正pH，根据情况还可加入HEPES溶液可使生长液具有较强的pH缓冲能力。能使组织和成片细胞分散成单个细胞的化学制剂为胰蛋白酶和EDTA，EDTA使用液又可称之为Versen溶液，其分散细胞的作用原理是EDTA可以结合钙、镁离子，使组织细胞分散。动物血清中具有细胞生长所必需的各种营养因子，它能促进细胞的贴壁和生长，且有很强的酸碱缓冲能力。细胞培养液在细胞培养过程中可分为细胞生长液和细胞维持液两种。生长液是使细胞发育增殖的液体，因此要求营养条件丰厚；维持液用于延

缓细胞代谢，从而延长细胞的存活时间，以利于实验的进行。这两种液体成分的主要区别是血清含量不同。细胞生长适宜的pH范围是pH7.2～7.6。细胞培养技术全过程的关键是防止污染。

2．细胞株的保存

细胞株的保存是组织培养中一个十分重要的工作，二甲基亚砜是细胞低温保存的良好的保护剂，含10％二甲基亚砜的血清可以作为悬浮细胞的液体在液氮中保存细胞。

病毒学上常用的细胞类型可分为原代细胞、二倍体细胞和传代细胞三大类，原代细胞培养和传代细胞培养的根本区别在于细胞是否能在体外无限传代。

4．细胞的纯化

细胞的纯化可以用细胞克隆技术。克隆是指用无性繁殖方法产生的一组遗传上相同的细胞和生物群体的过程。