胃癌患者明胶酶A 基因表达的研究

３３６　中华内科杂志２００１年５月第４０卷第５期Ｃｈｉｎ　ＪＩｎｔ￣ｌ＇ｎｌ￣ｌｅｄ，　２００１，ｖｏｌ４０，Ｎｏ．５　阳性克隆茁，然后，将阳性克隆茁提取质粒，垒自动测序仪测　序，测序用引物为ｘ２。参照文献［３］每例送捡至少３个克　隆，其中至少２个克隆序列相同即为该倒的优势克隆株。测　序结果用Ｄ一椰软件分析。从基因库中选取１０株已发表　的Ｂ基因型、２０株Ｃ基因型序列进行同源性比较，并参照中　国株Ｃ基因型序列　驯，分别编辑Ｂ、Ｃ基因型的共同序列作　为参照。　二、结果　１．Ｉ－ＩＢ￣基因分型：１４倒ＡｓＣ者所感染的Ｉ－ＩＢ￣均为Ｂ基　因型，１４例ｃＡＨ中１２例为Ｂ基因型，另２倒为Ｃ基因型。　２　Ｉ－ＩＢＶ前Ｃ终止变异：ＡｓＣ与ｃＡＨ组中，前Ｃ区　ｎｔ１８９６Ｇ￣Ａ变异分别为７倒和１０倒。　３．Ｉ－ＩＢＶＸ基因变异：直接重复序列（Ｄｉｎ，ｎｔ１５９０　１６００￣　ＤＲ１，ｎｔ１８２４—１８３４）、基本核心启动子（ＢＣｅ）的第三个ＡＴ富　集区（ｎｔ１７８９—１７９５）在全部１４倒ＡｓＣ和ｌ４例ｃＡＨ中均无变　异发生。而１ｄ砸Ａ１似联合突变见于１０倒ｃＡＨ和１例Ａ宴ｃ　中，另有９例ＡｓＣ在此联合突变区前后共有２０—２１个棱苷　酸的缺失。８倒ＪＵＣ（５７．１％）在ｎｔ１６４６～１６４７问有３０　５２个　棱苷酸片段的插入，其插入的片段与其后的ｎＭ们　Ｍ　盯脯曲舢　舭　ｔ１６４７～１６９８之　间的序列基本一致。此８倒与另１倒ＪＵＣ（共９倒，６４．３％）　在ｎｔ１７４７（或ｎｔ］７４８）至ｎｔ１７６７（或ｎｔ１７６８）问有２０　２１个核苷　酸的缺失。另３倒ＡｓＣ分别有ｎｔ１７７６　１７７７间１１个核苷酸　插入、ｎｔ１７５２—１７５３问单个核苷酸的插入、ｎｔ１７９１Ａ￣Ｔ点突变　而形成终止密码子１　。此１２倒ＡｓＣ（８５　７％）导致ｘ基因　因框移、或无框穆但因点突变而提前出现终止密码子，使ｘ　蛋白被截短７～５１个氨基酸。截短的ｘ蛋白３　端氨基酸编　码见图１。全部１４倒ｃＡＨ均未出现上述使ｘ蛋白截短的ｘ　基因的变异，均编码１５４个氨基酸的完整的ｘ蛋白（Ｐ＜　０　００１）。　讨论抗．Ｉ／Ｂｅ阳性的Ｉ－ＩＢＶ感染者多有前Ｃ区ｎｔ１８９６　变异。ｎｔ１８９６变异导致前Ｃ基因组ｍＲＮＡ翻译成｝ｍＢＡｇ前　体的中断，在翻译水平上造成ｒｍｅＡｇ阴性的Ｉ－ＩＢＶ感染。　研究表明，ｘ蛋白反式激活功能域在ｘ蛋白的第１３３　１３９位氨基酸１　。文中ｘ蛋白被截短的１２倒ＡｓＣ中有７倒　（见图１　Ａ６一Ａ１２），在此段功能域前已终止编码，另５倒（见　图１　Ａ１一Ａ５）虽然在此段编码，但为新的氨基酸链，可能难　以发挥转式激活作用。另外，Ｂ凹区２０　２１个碱基的缺失，　胃癌患者明胶酶Ａ基因表达的研究　冀明　李龙霞　于中麟　向周围组织浸润是恶性肿瘤的典型特征；对细胞外基质　作者单也：１０００５０首都医科大学附属北京友谊医院清化科（冀　明、于中麟）；山东潍坊青洲中心医院捎化科（李龙霞）　１１１０　１１０　Ｉ　２１１　】３０　Ｆ１０　ｔ５０　ＫＶＵⅨ盯ＬＧＬ　ＳｋＵＳＩＴ￣ＹＦＫＭｖＦＨＸ－ＥＢ　匝ＩｎＸ；＇ＰＣＬＣｅｏＣ　Ｈ　Ｍ　●　ＴＥ　Ｕ　跏Ｌ　ＰＴＰ（１ｑｆｌ－＇３＂Ｓ￣＊　Ｓｖ　ＬｌＩＫ　眦￥，￣ＴＩＩＩＬ卧Ｙ　哪Ｆ哪ＥⅡ６ｗｌ　Ｃ　ＲＨＩ　Ｓｖ　ＬｌＩ岫眦Ｓ＾■ＳｍＬＨ　ＹＦＨＤ　国脚ｃＴＲＲ　Ｅ…一Ｖ——　●　Ｅ一一～一ｖ……　Ⅲ　Ｔ　一　●　ｐ－－－－　Ｌ＾＋　Ｌ舾　Ｌ　Ｌ¨　ＤＦ。口∞肿¨　圈中英文字母为氨基酸的缩写；第一行鼓字为氨基酸位序；ＢＢ　为标准Ｂ基因型编码的参ｊｆＩ｛序列｛＊为终止密码　圈ｌ　ｌ２倒Ａ　藏短ｘ蛋白３　端复基酸的编码　可引起增强子Ⅱ及核心启动子结掏的破坏。虽然奉研究中　ＤＲ１是完整的，但上游的缺失引起新的终止密码子可能影响　ＤＲ１的功能，因此，ｘ基因的上述变异可直接或间接地抑制　病毒复制。与此假设相符的证据是：奉研究中ＡｓＣ者血清　船Ｖ　ＤＮＡ水平显著低于ｃＡＨ者，扩增船ｖ目的基因需用套　式ＰＣＲ才能扩增出阳性带，表现为低复制水平　现有结果不足以阐明病毒变异与病变的因果关系　但　至少可以说明：ｅ抗体阳性的船ｖ感染者中，出现截短的ｘ　蛋白的变异与船ｖ低水平复制及肝炎活动的静止密切相　关。　参考文献　１　ｌｔｌｍｔｃＭ，Ｍｃ　ⅡＪＭ．Ａｎ哪ＭＩ．ｅｔ　．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｅ　ｏｆｈ印　ｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｍｌ　ｌⅢｔ　ｏｎ日．　ｐ日Ｉ山　，２０００，３１：１０３７—１１）４４．　２Ⅱ珊ｌＭ，ｃ啦　ＪＥ，Ｈ∞ｋＴ曲（ｉ－，ｄ　Ｇ钾　ｏｆ　ｊ　日Ｂ　目　ｐｍ口　ｏｆ１ｔ．口ｓ　岫∞　Ｊ　Ｖｊｒ０ｌ　Ｍｅ岫．１９９８．７２：１６３—１　３　Ｋ　ｌ眦Ｔ，Ｓ　ｎ—Ｔ，０ｋ—Ｙ，ｅｌ　．Ａ筠ｏ　叫】ｂｅｔｗｅｅｎ　ｈ。ｑｕ恤叮０ｆ蚰　ｎＤ　ｃｂ　ｅｒｉｅ　Ｉ　叽０ｆ　ｂ删ｉ血Ｂ　ｖ＿ｍ　（耶ｖｊ　ｐｒｉｔｈｅｅ　０ｆ　ｍｌ　衄ｉｎ　Ｊ叩　雌耶ｖ　ｃ　啪．　Ｊ　Ｇ蚋咖卿ｍ　，１９９＂７，３２：６１Ｉ－　４郭亚兵，侯金林．蕈炜．等．乙型肝炎病毒中国株垒基因参照序列　的初步建立．中华微生物学和免疫学杂志，１９９９．１９：１９７－２００　５　ＡＩｉｉＭ，ｎｋ山Ｓ，Ｋ　ｅ　Ｋ．Ｊｄ棚Ｉｉｆ　∞ｏｆ岣ｆｅｅ塌旧　嘲。惜０ｆ　ｈ　ｌ　Ｂ　ｎ日Ｘ　ｏｌ　ｆｏｒ　ｈｍ　∞　ｍｄ　．０ｎ咖鲫ｅ．　１９９２．７：研—４０３．　（收稿日期：∞００　Ｍ）　（本文编辑：侯鉴君）　的溶解是肿瘤细胞向外扩散的基础。近来的研究表明基质　金属蛋白酶（ｍ噩　）在肿瘤溶解细胞外基质向外侵袭中发挥　了重要作用。明胶酵Ａ（砌　）是基质金属蛋白酵的一种，　它在乳腺癌、前列臃癌及结肠癌中的研究已有报道，本研究　中华内科杂志　∞１年５月第４０卷第５期Ｃｈｉｎ　ＪＩ丌ｆ唧＾蜘，Ｍａｙ２∞ｌ，Ｖｏｌ　４０．Ｎ０．５　３３７　旨在了解明胶酶Ａ在胃癌浸润、转移中的作用。　的研究表明在原发性乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和肺癌均有　对象与方法　Ｍｆ　ｍＲＮＡ表达的增强　＿４　Ｊ　在乳腺和前列腺组织免疫组　１．研究对象：３０例胃癌患者，男２３例，女７例，平均年龄　化研究中可见：随着病变由不典型增生进展到原位癌，　（５０±６）岁。内镜下取胃癌组织，经病理检查确诊；所有患者　的染色反应逐渐增强；在癌的进展阶段有更强的明胶酶染　均行手术治疗。以１９例慢性胃炎患者作为对照。　色　有关胃癌患者加旺Ｐ２基因表达的研究目前尚鲜有报道。　２．试剂与仪器：总ＲＮＡ提取试剂盒（Ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　我们研究了胃癌患者　基因表达的情况，结果表明：胃　ｓｙⅡ绷）、ＡＭＶ逆转录酶、ＲＮＡ酶抑制剂、叫Ｅ（ｄｔ）１５　Ｐｒｉｍｅｒ８、　癌组绸加　Ａ表达水平明显高于慢性胃炎组织；局部　Ｔａｑ酶、ＦＣＲ　ｈ　ｅ　、琼脂糖均为Ｐｒｏｍｅｇａ公司产品。毛细管　淋巴结受累者Ｍｆ　基因表达水平明显高于局部淋巴结未　ＰＥＲ仪为美国Ｉｄａｈｏ公司产品；凝胶成像系统：Ｋｏｄａｋ　ｃｕｇｉ￣　受累者；这提示胃癌患者　基因表达水平增强可能与肿　ｓｃｉｅｎｃｅ　ｓｙｓｔｅｍ　Ｉ）Ｃ－４０。　瘤向周围浸润、转移有关。我们既往曾研究了胃癌患者血清　３．ＩＬＮＡ提取、ｅＤＮＡ合成、共扩增一ＰＣＲ、扩增产物定量分　Ⅳ型胶原酶活性，结果表明随着周围及远处淋巴结转移的发　折参照王爱民等　的方法进行。ＭＭＰ２引物的设计参照王爱　生，胃癌患者血清Ⅳ型胶原酶活性明显增强　Ｊ。本研究结　民等【　Ｊ的设计；内参对照￣－ａｒｔｉｎ的引物设计参照　哪ｂ叭ｋ　果似乎提示胃癌患者加　基因表达水平增强是其血清Ⅳ　资料。　型胶原酶活性升高的基础。加　的基因表达受诸多细胞因　４统计处理：结果以　±ｓ表示，用　检验进行处理。　子、生长因子的调节。本研究是对胃癌患者　基因表达　二、结果　的初步研究，许多问题尚有待于进一步澄清、证实。　１胃癌组织明胶酶Ａ的基因表达水平：３０倒胃癌组织　和１９例慢性胃炎组甥中ｍ　／｝ａｅｔｌｎ的值分别为１．３４±　参考文献　０．３３和０．３６±０．１３，其差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。　１王爱民．王宝恩，扬跃伟，等．实验性肝纤维化明腔酶Ａ基因表　２．胃癌组织明胶酶Ａ的基因表达水平与局部淋巴结转　达的研究中华医学杂志，１９９９，７９：３９４－３９５．　移的关系：１６例有局部淋巴结转移者和１４例无局部淋巴结　２王爱民，杨跃伟，江龙安．等慢性肝病明腔酶Ａ基因表达的研　究．临床消化病杂志．１９９９．１１：６５．．６７　转移者的加ｍ　／ｐ＿日ｃｔｉＩ１的值分别为１．６３±０　４０和１．０２±　３　耐Ｐ，Ｂｅｌｌ￣ｑ　ＪＰ，Ｗ０１ｆ　Ｃ，Ｈ　Ａ　ｎ舯ｅｌ　ｍｅｔ丑Ｉｌ删　１鼬ｅ肿　０　２６，其差异有显著性（Ｐ＜０　０１）。对胃癌患者明胶酶Ａ的　ｓ口∞出ｃ　ｖ　ｅｘｐｒｅ￣ｌ　ｉｎ　Ｄ丑Ｉ　ｃｅｌｌｓ　Ｑｆ　ｈ吲塌ｒｃｌ嘲　ａｒＬ】ｒｅ．　１螂．３４８：￣９９－７０４．　基因表达水平与血清癌胚抗原水平行相关分析表明两者无　４　ＡＴ，Ｃｉ　Ｖ．Ｓｏｂｅｌ皿．Ｈ　ｈ　删Ｉｍ　Ｍｒ　相关性（ｒ＝０　２３６，ｎ＝３０，Ｐ＜０．０５）。　７２，ａ］０　ｔｙｐｅ　。０Ｕ　∞ｒＬａ９ｅ　ｉｎ　ｈ　Ⅱ姐ｃ　ｃ　０ｃ　ｎ０咖Ｃ∞１ｃ盯　讨论加　是Ⅳ型胶原酶／明胶酶的一种；另一种为明　１９９１．５１：４３９４４４　５冀明，王爱民，于中辩胃癌患者血清Ⅳ型腔原障解酶活性的研　胶酶Ｂ（加旺　）；它们降解的底物主要是明胶、Ⅳ型和Ｖ型胶　究中华内科杂志．１９９９，３８：１８９—１９０　原＝Ⅳ型胶原是基底膜胶原的主要成分；肿瘤细胞对基底膜　胶原的溶解是其向细胞外间质扩散的起始．可溶解Ⅳ型胶原　（收稿日期：２∞０—０８—１０）　的明胶酶Ａ在肿瘤向外浸润中可发挥重要作用：国外学者　（本文编辑：游苏宁）　高胆固醇血症患者血浆Ｐ．选择素表达的研究　马建忠　傅国胜　秦光明　唐玉泉　本研究观察高胆固醇血症患者血浆Ｐ－选择素水平的变　晨空腹血清总胆固醇＜５．２ｍｍｏｌ／Ｌ的患者，可包含或不包含　化以及普伐他汀的作用，旨在探讨Ｐ选择素表达改变在高胆　有其他动脉粥样硬化危险因素。凡具有以下任何一项因素　固醇血症致动脉粥样硬化中的作用。　则不列＾本研究：（１）空膜血糖≥７．７７　ＩＩⅡＤ０　；（２）收缩压≥　资料与方法　１６５　ｍｍ　Ｈｇ（１　ｍｍ　＝０．１３３ｋＰａ）或舒张压≥１００　ｍｎｌ￣；（３）血　高胆固醇血症患者的诊断参照１９９７年中华心血管病学　肌酐≥１３２．６￣ｍ＆／Ｌ或尿素氨≥８　９珊ｎ０　；（４）急性心肌梗　分舍制订的《血脂异常防治建议》，非高胆固醇血症患者指清　死和不稳定型心绞痛；（５）风湿性心脏病和心内膜炎；（６）房　颤持续时间＞１０ｈ；（７）ＮＹＩｔｇ心功能分级＞Ⅲ级的患者。人　作者单位：３ＩＩＩＩ５浙江省余抗市第三人民医院心内科（马建忠　选患者６６例，高胆固醇血症患者组３ｌ例，对照组为３５例非　唐玉泉］；浙江大学医学院附属第二医院心内科（傅国胜、秦光明）　高胆固醇血症患者。所有病例均于＾院后次日晨空腹１２ｈ