三氯乙烯对大鼠视网膜的损伤及诱导型一氧化氮合酶的影响

工业卫生与职业病　２０１５年第４１卷第５期　・　３３４　・　Ｉｎｄ　Ｈｈｈ＆Ｏｃｃｕｐ　Ｄｉｓ　２０１５，Ｖｏ１．４１，Ｎｏ．５　【论著】　三氯乙烯对大鼠视网膜的损伤及诱导型一氧化氮合酶的影响　常旭红　，高金霞　（１．兰州大学公共卫生学院，甘肃兰州７３００００；２．兰州市疾病预防控制中心，甘肃兰州７３００３０）　【摘要】目的　探讨三氯乙烯（ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｅｔｈｙｌｅｎｅ，ＴＣＥ）对大鼠视网膜组织的脂质过氧化损伤效应及诱导　型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）表达的影响。方法　将３２只大鼠随机分为对照组和５００、１　０００、２　０００　ｍｇ／ｋｇ　ＴＣＥ　３个剂量染毒组，测定视网膜组织中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活力、丙二醛（ＭＤＡ）、一氧化氮（ＮＯ）的含　量，光学显微镜下观察视网膜形态学变化，免疫组织化学法测定ｉＮＯＳ的表达。结果　与对照组比较，　ＴＣＥ染毒１　０００、２　０００　ｍｇ／ｋｇ组大鼠视网膜组织中ＳＯＤ活力均降低（Ｐ＜０．０１），ＴＣＥ染毒５００、１　０００、　２　０００　ｍｇ／ｋｇ组大鼠视网膜组织中ＭＤＡ含量均升高（Ｐ＜Ｏ．０５或Ｐ＜０．０１）；ＴＣＥ染毒的３个剂量组中，大　鼠视网膜组织中ＮＯ含量均高于对照组（Ｐ＜ｏ．０１）。ＴＣＥ染毒组大鼠视网膜组织的内核层、外核层、节细　胞层出现细胞核变大、水肿、空泡等变化。ＴＣＥ染毒１　０００、２　０００　ｍｇ／ｋｇ组大鼠视网膜组织中ｉＮＯＳ活力　高于对照组（Ｐ＜Ｏ．０５）。结论ＴＣＥ能激活视网膜组织ｉＮＯＳ表达，产生过量的ＮＯ可损伤视网膜细胞；　视网膜脂质过氧化作用增强也是ＴＣＥ所致视网膜损害的机制之一。　【关键词】三氯乙烯；视网膜；一氧化氮合酶；形态学；脂质过氧化　［中图分类号］Ｒ　１３５　［文献标志码］Ａ　［文章编号］１０００—７１６４（２０１５）０５—０３３４—０３　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｄａｍａｇｅ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｔｒｉｃｈＩＯｒ０ｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｒｅｔｉｎａ　ＣＨＡＮＧ　Ｘｕ—ｈｏｎｇ　，ＧＡＯ　Ｊ　ｉｎ—ｘｉａ　（　Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ，Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００００　Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｄａｍａｇｅ　ｏｆ　ｒｅｔｉｎａ　ｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｄａｍａｇｅ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ（ｉＮＯＳ）ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｅｔｈｙｌｅｎｅ（ＴＣＥ）ｏｎ　ｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｉｒｔｙ　ｔｗｏ　ｍａｌｅ　ＳＤ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　４　ｇｒｏｕｐｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，３　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｉｔｈ　５００　ｍｇ・ｋｇ一　・ｄ一　，１　０００　ｍｇ・ｋｇ一　・ｄ一　ａｎｄ　２　０００　ｍｇ・ｋｇ　・ｄ～ＴＣＥ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｅｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｒａｔ　ｒｅｔｉｎａ　ｔｉｓｓｕｅ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｔｏ　ｍｅａｓｕｒｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ），ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｍａｌｏｎｄｉａ１ｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ）ａｎｄ　ＮＯ．Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｒｅｔｉｎａｌ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｂｙ　ｌｉｇｈｔ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｉＮＯＳ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｉｎ　ｒｅｔｉｎａ　ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ　ｓａｍｐｌｅｓ，ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＳＯＤ　ｉｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗａｓ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　（Ｐ＜Ｏ．０１），ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＭＤＡ　ｉｎ　ａｌｌ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５～Ｐ＜Ｏ．０１）．　Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏ１．ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＮＯ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｒｅｅ　ＴＣＥ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜Ｏ．０　１）．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｒｅｔｉｎａ　ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｃｅｌｌ　ｎｕｃｌｅｕｓ　ｇｅｔｓ　ｂｉｇｇｅｒ，ｅｄｅｍａ，ｃａｖｉｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｋｅｒｎｅｌ　ｌａｙｅｒ，ｏｕｔｅｒ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｌａｙｅｒ　ａｎｄ　ｇａｎｇｌｉｏｎ　ｃｅｌｌｓ　ｏｆ　ｒａｔ　ｒｅｔｉｎａｌ　ｔｉｓｓｕｅ　ｉｎ　ＴＣＥ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｉＮＯＳ　ｉｎ　１０００　ａｎｄ　２０００　ｍｇ／ｋｇ　ＴＣＥ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　Ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｉＮＯＳ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｉｎ　ｒｅｔｉｎａ　ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ．Ｌｉｐｉｄ　ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｈａｖｅ　ａ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｒｅｔｉｎａ　ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］Ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｅｔｈｙｌｅｎｅ；Ｒｅｔｉｎａ；ｉＮＯＳ；Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ；Ｌｉｐｉｄ　ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ　三氯乙烯（ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｅｔｈｙｌｅｎｅ，ＴＣＥ）是一种无　色、易挥发、难溶于水的工业有机溶剂和金属清洁　剂，目前常用于电镀或油漆喷涂前五金工件的去　污、不锈钢制品清洁剂、印刷电路板清洗、电子元　件制造等。吴志强等报道３　３３１家电子、塑胶、五　金类企业的ＴＣＥ超标率较高达２Ｏ　９，６～３Ｏ　ｎ　；自　１９８４年Ｐｈｏｏｎ等＿２　报告了首例ＴＣＥ引起眼角膜溃　疡之后，以后不断有接触ＴＣＥ后对眼造成不同程　度的损害的报道　］，王秀芹等报道了１４６例ＴＣＥ　［作者简介］常旭红（１９８２一），男，讲师。　［通讯作者］高金霞，Ｅ—ｍａｉｌ：ｇａｏｊｘｇｓｌ０１ｌ＠１６３．ｃｏｒｎ　药疹样皮炎患者，７１．９２　的患者有不同程度的眼　常旭红，等．三氯乙烯对大鼠视网膜的损伤及诱晏型＿氧化氮合　响　部异常症状　］。但是关于ＴＣＥ如何引起眼部损害　切片，ＨＥ染色，进行形态学观察；用免疫组化法　的机制尚不清楚。我们通过对大鼠皮下注射ＴＣＥ　测定ｉＮＯＳ。其余视网膜组织制备１０　匀浆。　的染毒方式，初步探讨ＴＣＥ对大鼠视网膜组织的　１．２方法　形态改变、脂质过氧化损伤效应及视网膜组织中一　１．２．１　ＳＯＤ活力和ＮＯ及　Ａ含量的测定　将制　氧化氮（ＮＯ）及诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）的表　备好的１０　匀浆以３　０００　ｒ／ｒａｉｎ离心１０～１５　ｍｉｎ（离心　达，为进一步研究ＴＣＥ对眼部损害提供科学依据，　半径为５．４８　ｃｍ），严格按照试剂盒说明，根据实验需　以期对职业性ＴＣＥ接触者的眼部防护及为临床应　要，取适量上清液进行ＮＯ、ＳＯＤ、ＭＤＡ指标测定。　用提供参考依据。　１．２．２　ｉＮ０Ｓ活力的测定采用免疫组化ＳＡＢＣ法，　ｉＮＯＳ阳性判断标准为复染封片后，经显微镜观察出　１材料与方法　现褐色的染色区域。将复染后的载玻片，用光学显　１．１　材料　微镜和照相显微镜对免疫组化的结果拍照，并将图　１．１．１　主要仪器和试剂　７２１分光光度计，　像输人电脑，应用ＩＰＰ软件进行阳性区域的测定，　ＯＬＹＭＰＵＳ光学显微镜，ＴＣＥ分析纯（美国Ｓｉｇｍａ　结果以单位面积累计吸光度（　）值表示。　公司），橄榄油（美国Ｓｉｇｍａ公司），超氧化物歧化　１．３统计学处理　酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）、ＮＯ试剂盒购自南京　数据用（　±ｓ）表示。采用单因素方差分析和ｑ　建成试剂有限公司，ｉＮＯＳ抗体及显色剂购自武汉　检验。　博士德公司。　１．１．２　实验动物与染毒　清洁级ＳＤ雄性大鼠３２　２　结果　只（由蚌埠医学院实验动物中心提供，许可证号为　２．１　ＴＣＥ对大鼠视网膜脂质过氧化指标的影响　ｓｃｘｋ２００９－－０００１），体质量为（１９７±１８）ｇ。随机分　由表１可见，与对照组比较，ＴＣＥ染毒　为对照组和５００、１　０００、２　０００　ｍｇ／ｋｇ　ＴＣＥ染毒　１　０００、２　０００　ｍｇ／ｋｇ组大鼠视网膜组织中ＳＯＤ活　组，每组８只。染毒方式采用皮下注射，对照组注　力均降低（Ｐ＜０．０１）；ＴＣＥ　３个染毒组大鼠视网膜　射等体积的橄榄油（Ｏ．２４　ｍｌ／１００　ｇ），１次／ｄ，连　组织中ＭＤＡ含量均升高（Ｐ＜Ｏ．０５或Ｐ＜０．０１）；　续７　ｄ。染毒结束后脱颈处死，每组取出４个视网　ＴＣＥ　３个染毒组中大鼠视网膜组织中ＮＯ含量均　膜组织用质量分数为１　多聚甲醛固定，石蜡包埋　高于对照组（Ｐ＜０．０１）。　表１　ＴＣＥ对大鼠视网膜组织ＳＯＤ活力及ＭＤＡ和ＮＯ含量的影响（　±ｓ）　注：经ｑ检验，与对照组比较，。Ｐ＜Ｏ．０５，　Ｐ＜Ｏ．Ｏ１；Ｓ０Ｄ－超氧化物歧化酶；ＭＤＡ～丙二醛；Ｎ０一一氧化氮。　２．２大鼠视网膜形态学改变　光学显微镜下，对照组视网膜组织有３层细胞　核，为神经节细胞层（ＲＣＬ）、内核层（ＩＮＬ）、外核层　（ＯＮＬ）。ＲＣＬ的细胞呈单层排列，ＩＮＬ和ｏＮＬ呈　多层排列。光镜下可见ＲＣＬ排列整齐，大小不一，　轮廓不规则，有大而浅染的细胞核，也有小而深染　的细胞核，细胞核染色均匀。ＴＣＥ染毒组大鼠视网　膜组织中的ＲＣＬ、ＩＮＬ、ＯＮＬ出现不同程度的细胞　核变大、水肿、空泡等变化（图１）。　注：ＲＣＬ一神经节细胞层，ＩＮＬ一内核层；０ＮＬ一外核层。　ａ一对照组；ｂ～ｄ—ＴＣＥ染毒低、中、高剂量组。　图１　三氯乙烯染毒后大鼠视网膜病理学变化　２．３　ＴＣＥ染毒对大鼠视网膜组织中ｉＮＯＳ活力的影响　免疫组化结果显示，与对照组比较，ＴＣＥ染　毒１　０００、２　０００　ｍｇ／ｋｇ组大鼠视网膜组织中ｉＮＯＳ　活力增高（Ｐ＜Ｏ．０５，图２）。　ｊ粤１５０．００　吨　溢　１００．００　５０．００　到　曲　０．００　对照组　５００ｍｇ，ｋｇ　１　０００　ｒｎｇ『ｌ【ｇ　２０００ｍｇ，ｌ【ｇ　图２三氯乙烯染毒对大鼠视网膜中　诱导性一氧化氮合酶表达的影响　３讨论　正常视神经内含有完善的抗氧化防御系统，可　及时清除积累过量的自由基，ＳＯＤ是视网膜抗氧　化系统的主要成分，可催化超氧化物发生歧化反应　生成性质稳定的无毒物质，对于视网膜抵御活性氧　（ＲＯＳ）分子的氧化攻击，避免结构损伤，具有重　要的意义Ｌ６］。毒理学研究中常同时测定ＳＯＤ活力　和ＭＤＡ含量，反映组织过氧化损伤的程度ｌ７］。本　实验显示，大鼠皮下注射ＴＣＥ可以使视网膜组织　中ＳＯＤ活力改变，ＭＤＡ含量升高，说明ＴＣＥ可　以致大鼠脂质过氧化作用增强，可能是进人体内的　ＴＣＥ及其代谢产物具有亲电活性、产生自由基，　视神经损伤后，大量自由基攻击胞膜，诱发脂质过　氧化而导致ＭＤＡ积聚。　ＲＯＳ损伤在眼科疾病中的作用一直被关注，　ＮＯ作为一种ＲＯＳ，参与了眼部多种病理、生理　过程　＿１ｏｊ，ＮＯ是一种在细胞内和细胞间具有高度　活性的信使分子，广泛分布于生物体内各组织中，　特别是神经组织中。研究表明，Ｎ０具有免疫调　节、神经传递、血压调控和血小板凝聚抑制等生理　功能，其浓度变化与机体的生理功能紧密相关。目　前发现ＮＯＳ有两种亚型，即原生型Ｎ０Ｓ（ｃＮ０Ｓ）　和ｉＮ０Ｓ；在正常生理状态下，机体能通过ｃＮＯＳ　的作用产生适量的ＮＯ，从而在体内发挥重要的生　理功能。而ｉＮＯＳ虽广泛存在于人和哺乳动物的巨　噬细胞等免疫细胞中，但在正常生理状态下，　ｉＮ０Ｓ不发挥其生物活性，只是在病理条件下（如　炎症、肿瘤、创伤等）才被激活、诱生，催化机体合　成大量的ＮＯ。王军民等［８］证实有机溶剂ＣＳ　能激　活视网膜组织ｉＮＯＳ表达，也可产生过量的Ｎ０，　些里生皇职些病２０１５年第４１卷第５期　从而损伤视网膜细胞。在本实验条件下，ＴＣＥ能　使视网膜组织中ｉＮＯＳ的表达，硝酸还原酶法证实　了ＴＣＥ染毒组中视网膜的ＮＯ含量均高于对照组。　ＮＯ的水平受多因素的影响，研究证实体内存在着　ＮＯ自由基（ＮＯ・）和超氧自由基（ＯＺ）之间的相　互反应［１　，ＳＯＤ活力降低促使ＯＺ大量蓄积，而　Ｏ　可激活ｉＮＯＳ促进ＮＯ合成。推测ＴＣＥ能激活　视网膜组织发生脂质过氧化反应，进而促使ｉＮＯＳ　表达，由此产生的过量的ＮＯ可损伤视网膜细胞。　参考文献　［１］吴志强，杨建平，吴礼康，等．深圳市宝安区２００７　年５类企业职业病危害因素监测情况分析［Ｊ］．职业与　健康，２００８，２４（２４）：２６４７—２６４８．　［２］Ｐｈｏｏｎ　ｗＨ，Ｃｈａｎ　ＭＯＹ，Ｒａｊａｎ　ＶＳ，ｅｔ　ａ１．Ｓｔｅｖｅｎ－　ｊｏｈｏｎｓｏｎ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ａｓｓｏ　ｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｏｃｃｕｐａｔｉｏｎａｌ　ｅｘｐｏｓｕｒｅ　ｔＯ　ｔｒｉｃｈ１ｏｒ。ｅｔｈｙ１ｅｎｅ　ＥＪ］．Ｃｏｎｔａｃｔ　Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ，　１９８４，１０（５）：２７０—２７６．　［３］黄伟欣，吴艮娇．三氯乙烯中毒引起干眼症２例报告　［Ｊ］．职业与健康，２００３，１９（１２）：３０—３０．　［４］王秀芹，陈建生，黄家文，等．３例三氯乙烯变态反　应对眼部损害的临床观察ＥＪ］．中国职业医学，２００３，　３Ｏ（４）：４１—４２．　［５］王秀芹，黄伟欣，夏丽华，等．三氯乙烯药疹样皮炎　眼部损害的观察［Ｊ］．中华劳动卫生职业病杂志，　２００７，２５（２）：Ｉ１６—１１７．　［６］Ｓａｎｄｂａｃｈ　ＪＭ，Ｃｏｓｃｕｎ　ＰＥ，Ｇｒｏｓｓｎｉｋｌａｕｓ　ＨＥ，ｅｔ　ａ１．　Ｏｃｕｌａｒ　ｐａｔｈｏｌｏｇｙ　ｉｎ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ　（Ｓｏｄ２）一ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｉｎｖｅｓｔ　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ　Ｖｉｓｕａｌ　Ｓｃｉ，２００１，４２（１０）：２１７３—２１７８．　［７］夏世钧，吴中亮．分子毒理学基础［Ｍ］．武汉：湖北科　学技术出版社，２００１．　［８］王军明，张虹，李贵刚．一氧化氮及诱导型一氧化氮合　酶与二硫化碳所致视网膜功能损害的相关性［Ｊ］．华中科　技大学学报：医学版，２００９，３８（４）：４７Ｏ一４７２．　［９］Ｐａｒｋ　ＳＨ，Ｋｉｍ　ＪＨ，Ｋｉｍ　ＹＨ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｎａｌ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｔｉｎａ　ｏｆ　ａ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｇｌａｕｃｏｍａ［Ｊ］．Ｖｉｓｉｏｎ　Ｒｅｓ，２００７，４７　（２１）：２７３２—２７４０．　ＥｌＯ］Ｙｕａｓａ　Ｉ，Ｍａ　Ｎ，Ｍａｔｓｕｂａｒａ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｍｅｄｉａｔｅｓ　ｒｅｔｉｎａｌ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎ　Ｇｏｔｏ－　Ｋａｋｉｚａｋｉ　ｒａｔ　ｒｅｔｉｎａ［Ｊ］．Ｊａｐａｎ　Ｊ　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，２００８，　５２（４）：３１４—３２２．　［１１］　Ｍｕｒｐｈｙ　ＭＥ，Ｓｉｅｓ　Ｈ．Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ　ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　ｏｆ　ｎｉｔｒｏｘｙｌ　ａｎｉｏｎ　ｔＯ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｂｙ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ　－ＩＪ］．Ｐｒｏｃｅｅｄ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ，１９９１，８８（２３）：　１Ｏ８６Ｏ～１０８６４．　（收稿Ｈ期：２Ｏ１４～１２—２８）