细胞角蛋白免疫组化染色对胃癌淋巴结转移的诊断意义

JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGEVol. 29 No. 4Aug. 2011

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细胞角蛋白免疫组化染色对胃癌淋巴结转移的诊断意义

王啓名，张庆玲

1,2

1,2

（南方医科大学 1.基础医学院病理学系；2.南方医院病理科，广州 510515）

摘　要：目的 探讨细胞角蛋白(CK)免疫组化染色在判断胃癌淋巴结转移中的作用。方法 采用常规HE染色、CK免疫组化染色检测51例胃癌根治术患者的淋巴结转移情况。结果 51例胃癌中，HE、CK免疫组化染色发现淋巴结转移检出率分别为58.8%、80.3%；在送检的848个淋巴结中，HE、CK免疫组化染色显示淋巴结转移率分别为12.3%、23.9%；两种方法的检出率和淋巴结转移率差异有统计学意义(P<0.01或0.05)。CK免疫组化染色的淋巴结转移检出率与胃癌分化呈负相关(r=－0.335，P<0.05)。结论 CK免疫组化染色可明显提高胃癌淋巴结转移的检出率，对判断胃癌分化和指导治疗有重要的临床意义。

关键词：胃癌；淋巴结转移；免疫组化

中图分类号：R 782 文献标识码：A 文章编号：1005-4057(2011)04-0367-03DOI: 10.3969/j.issn.1005-4057.2011.04.004

Diagnostic signficance of immunohistochemical cytokeratin staining on lymph node metastasis of gastric cancer

WANG Qi-ming, ZHANG Qing-ling (Department of Pathology, Nanfang Hospital of Southern Medical University,

Guangzhou 510515, China)

Abstract: Objective To explore the role of immunohistochemical cytokeratin (CK) staining in determining lymph node metastasis of gastric cancer. Methods Hematoxylin and eosin (HE) stain and immunohistochemical CK staining were used to detect lymph node metastasis in 51 patients with gastric cancer. Results HE and CK stain showed that the detection rates of lymph node metastasis were 58.8% and 80.3% in 51 cases, and metastatic rates of lymph node were 12.3% and 23.9% in 848 tested lymph nodes, respectively. There were significant differences between two methods (P<0.01 or 0.05). Lymph node metastasis determined by CK stain was negatively correlated with tumor differentiation (r=-0.335, P<0.05). Conclusion Immu-nohistochemical CK stain can improve the detection rate of lymph node metastasis in gastric cancer, which plays an important role in judging tumor differentiation and guiding therapy.

Key words: gastric cancer; lymph node metastasis; immunohistochemistry

转移是恶性肿瘤的标志和特征，也是造成患者死亡的主要原因。淋巴结转移是癌复发的重要原因，淋巴结转移的早期发现对肿瘤的诊断、分期、复发、预后判断、术后综合治疗的选择具有极其重要的指导意义。胃癌是我国高发的恶性肿瘤之一，容易较早发生转移，而由于胃癌分化往往较低，其早期淋巴结的微转移不易被发现，是造成胃癌预后差的重要原因之一。本文对免疫组化检测(IHC)在诊断胃癌淋巴结转移中的作用及其临床意义进行探

基金项目：国家自然基金(No.810719)，广东省自然基金 (No.K1021185)，南方医科大学基础医学院院长 基金(No. B11003)。

收稿日期：2011-01-11；修订日期：2011-05-08作者简介：王啓名 ( 19 - )，男，本科在读。通讯作者：张庆玲，E - mail: zqllc8@fimmu.com。

讨。

1　资料和方法1.1　一般资料

2009年3月至12月南方医院行胃癌根治术患者51例，其中男39例，女12例；年龄19～81岁，平均56.1岁。所有患者术前均未行化疗、放疗或者其他针对肿瘤的治疗，均经术后病理检查证实。病理分型：高分化腺癌3例，中分化腺癌8例，低分化腺癌40例。

1.2　常规HE染色及免疫组化检测

胃癌手术标本及胃周淋巴结组织常规固定、取材、石蜡包埋并切片。经烤片、脱腊后，进行常规HE染色，判断胃癌组织学类型及淋巴结转移情况。用EnvisionTM法进行免疫组化角蛋白检

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广东医学院学报2011 年 第 29 卷

测。免疫组化EnvisionTM 试剂盒(DAKO)、广谱细胞角蛋白CK(AE1/AE3) (鼠抗人单克隆抗体，MAB-0049，迈新公司)、DAB显色试剂盒(MAX-003,迈新公司)。免疫组化染色步骤为：常规脱蜡后的切片经柠檬酸缓冲液微波抗原修复、CK(AE1/AE3)一抗体室温孵育1 h、二抗体室温孵育30 min、DAB显色，苏木素复染,无水酒精脱水,中性树胶封片并观察。1.3　观察方法　

HE染色观察以淋巴结内以可见确切异型癌细胞或淋巴窦结构破坏为淋巴结转移的判断标准。免疫组化观察以淋巴结内可见CK染色阳性的细胞为判断标准。病理观察及结果判断由2名有经验的病理医生双盲完成，不一致的观察结果则通过重新观察讨论来判定。1.4　统计学处理

统计学分析应用SPSS 13.0软件，采用χ2

检验和相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。2　结果

2.1　HE检测结果

常规HE切片观察到癌组织转移的淋巴结内，癌组织呈片巢状或团块状浸润，破坏淋巴结结构；癌细胞明显较淋巴细胞大，胞浆丰富，细胞核异型性明显。部分原发肿瘤为高/中分化胃癌者，其转移淋巴结内可见腺样分化。但原发肿瘤为低分化胃癌者，包括印戒细胞癌者，往往只能判断大片的癌组织转移区域。

51例胃癌中，30例发生淋巴结转移，检出率为58.8%(30/51)；全部检出的淋巴结为848个，其中104个存在癌组织转移，淋巴结转移率为12.3%(104/848)。基于HE基础上的淋巴结转移分析与TNM分期呈正相关(rp=0.533，P<0.01)，年龄、性别和胃癌分化程度无明显相关性(P>0.05)。2.2　IHC检测结果

免疫组化CK检测能显示胃周围淋巴结的癌组织转移情况，尤其是常规HE不能发现的微小转移灶。CK免疫组化阳性染色呈棕黄色，位于细胞膜及胞浆 (图1) 。848枚淋巴结中，免疫组化染色结果显示104枚HE检测发现存在癌组织转移的淋巴结均为CK免疫组化阳性，另外744枚HE未观察到癌组织转移的淋巴结中有99枚存在数量不等的CK阳性癌细胞浸润。大部分CK阳性癌细胞位于淋巴结被膜下或皮质区的淋巴窦内，呈单个散在或一个及数个小团状

癌细胞聚集区，部分区域可见窦淋巴管内CK阳性的癌细胞聚集(图1)。

免疫组化CK检出淋巴结转移人数为41人，检出率为80.3%(41/51)；发生转移的淋巴结为203个，淋巴结转移率为23.9%(203/848)。基于免疫组化基础上的淋巴结转移与胃癌分化程度负相关(rp=－0.335，P<0.05)，与TNM分期呈正相关(rp=0.533，P<0.01)；与年龄和性别无明显相关性(P>0.05)。2.3　HE及免疫组化检测结果的比较

与HE染色比较，免疫组化的检出率和淋巴结转移率均有统计学意义(P<0.05或0.01)。与HE相比，IHC检出的淋巴结转移数量除与分期呈正相关，还与组织分化呈负相关(结果见2.2)。 3　讨论

胃癌在世界范围内的发病率排名第二，也是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，具有恶性度高、预后差等特点。胃癌的发生发展是一个多因素、多阶段、连续复杂的多基因异常的累积过程, 分子生物学基础复杂。正确判断胃癌的临床病理学分期，是制定临床治疗方案和判断预后的重要依据之一。淋巴结转移状况是判断肿瘤分期的重要指标和影响胃癌预后的最重要因素[1]。目前, 临床上对胃癌手术切除标本的淋巴结转移状态分析，主要是通过常规HE切片病理组织学观察并判断有无淋巴结转移。然而有研究显示，胃癌根治术后仍有20%患者死于复发,而早期胃癌中仍有3%的患者因复发而死亡[2]，目前认为其中原因之一就是常规组织学观察可能漏诊部分胃癌患者的淋巴结转移,尤其是淋巴结的微转移。

关于微转移已经进行了相当多的研究。微转移的定义及其对胃癌预后的影响仍存在争议。随着免疫组织化学技术的发展,使单个癌细胞的检出和定位成为可能。通过免疫组化技术对HE观察未见癌组织转移的淋巴结组织进行广谱细胞角蛋白(Cytokeratin,

第 4 期王啓名，等. 细胞角蛋白免疫组化染色对胃癌淋巴结转移的诊断意义

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CK)表达检测，可以发现单个癌细胞及或小簇转癌

细胞。有学者认为常规组织学观察未见癌，而免疫组化检测发现单个癌细胞的定义为见孤立肿瘤细胞巢(ITCs，Isolated/disseminated/circulating tumor cells)；肿瘤直径为0. 2～2 mm为微转移(MCM，Micrometastasis， or occult metastasis)[3]。而有学者则将常规组织学观察未见转移，而免疫组化可见的单个癌细胞或小片状转移灶均归为微转移[4]。目前比较一致的观点是认为MCM在一定时间内可发展为显性转移，可能是胃癌年生存率难以提高的因素之一，是影响胃癌预后的重要因素之一[5]。因此，提高淋巴结转移的检出率将有助于明确胃癌分期、指导治疗及判断预后。

免疫组化技术具有敏感性高、特异性强和定位准确等特点。HE检测基础上结合免疫组化检测可以提高诊断的准确性[6]。因此，在判断胃癌淋巴结转移过程中引入免疫组化检测，可能有助于提高淋巴结转移诊断的水平。为验证免疫组化检测在淋巴结转移诊断方面的意义，本研究比较了常规HE及免疫组化检测淋巴结转移的差异，结果显示，免疫组化检测在淋巴结检出率和淋巴结转移率方面优于HE染色，提示免疫组化检测可以明显提高淋巴结转移的检出率。

HE检测的淋巴结转移结果与分化程度无相关关系，但免疫组化检测结果与胃癌的分化程度呈负相关(rp=－0.335，P<0.05)。原因可能与胃癌生长方式

有关，因为低分化胃癌往往呈单细胞、小条索状或弥漫浸润性生长，使HE切片下观察检出难度增加，容易造成遗漏。

综上所述，胃癌进行淋巴结的CK免疫组化检测，有助于临床准确分期、判断预后及指导治疗。参考文献：

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[3] Hermanek P, Hutter R V, Sobin L H, et al. International Union Against Cancer. Classification of isolated tumor cells and micrometastasis[J]. Cancer, 1999, 86(12): 2668-2673.[4] Lee E, Chae Y, Kim I, et al. Prognostic relevance of immuno-histochemically detected lymph node micrometastasis in patients with gastric carcinoma[J]. Cancer, 2002, 94(11): 2867-2873.

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[6] 王秋生, 马世文. 免疫组化技术的应用[J]. 安庆医学, 2004, 5(1): 37-38.

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