益肾通脉方对急性脑梗死缺血再灌注大鼠氧化应激、脑组织形态学改变及行为学影响-郭娜

JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM

辽宁中医药大学学报

Vol. 22 No. 12 Dec .，2020

DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2020.12.012

益肾通脉方对急性脑梗死缺血再灌注大鼠氧化应激、

脑组织形态学改变及行为学影响

郭娜1，张树泉2

（1.山东中医药大学，山东 济南 250355；2.泰安市中医医院，山东 泰安 271000）

摘要：目的 探究益肾通脉方对急性脑梗死缺血再灌注大鼠氧化应激、脑组织形态学改变及行为学的影响。方法 选取180只健康SD雄性大鼠，通过随机分组的方式对大鼠进行分组，分为假手术组，模型组与低、中、高剂量益肾通脉方组，每组36只。给予益肾通脉方组大鼠中药灌胃（低剂量组：25 mg/kg；中剂量组：50 mg/kg；高剂量组：100 mg/kg），给予假手术组与模型组大鼠等体积生理盐水灌胃，连续1周。制备大脑中动脉闭塞后再灌注大鼠模型，筛选出建模成功的大鼠，每组32只。假手术组大鼠在建模过程中仅进行血管分离，不进行动脉栓塞。治疗14 d后，各组分别取8只大鼠断头取脑制备成匀浆，按照试剂盒的操作说明检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、NO的含量水平；各组分别取8只大鼠断头取脑制备成匀浆，用酶标仪检测ATP酶活力情况；分别于治疗7、14 d对各组大鼠神经行为学进行评估与记录；治疗14 d后，各组随机抽取8只大鼠，断头取脑制备成匀浆，通过比色法测定大鼠脑组织caspase-3、caspase-8、caspase-9活性情况；治疗14 d后，各组随机抽取8只大鼠，断头取脑制成切片并镜检，观察各组大鼠脑组织形态学改变情况；并通过显微图像分析系统计算梗死灶体积及梗死率。结果 治疗14 d后，模型组大鼠SOD水平明显低于假手术组，MDA、NO水平明显高于假手术组（P<0.05）；各剂量益肾通脉方组氧化

++2+

应激指标与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）。模型组Na-K-ATP酶活力与Mg-ATP酶活力均明显低于假手术组（P<0.05）；各剂量益肾通脉方组ATP酶活力均明显高于模型组（P<0.05）。治疗7、14 d之后，模型组大鼠神经行为学评分均明显高于假手术组（P<0.05）；各剂量益肾通脉方组神经行为学评分均明显低于模型组（P<0.05）。治疗14 d后，模型组大鼠caspase-3、caspase-8、caspase-9表达水平明显强于假手术组（P<0.05）；各剂量益肾通脉方组大鼠caspase-3、caspase-8、caspase-9表达水平均明显低于模型组（P<0.05）。治疗14 d后，模型组大鼠脑组织细胞坏死明显，各剂量益肾通脉方组大鼠坏死细胞占比明显减少。模型组大鼠梗死灶体积、梗死率均明显高于假手术组（P<0.05）；各剂量益肾通脉方组大鼠梗死灶体积、梗死率均明显低于模型组（P<0.05）。结论 益肾通脉方能够有效减轻急性脑梗死缺血再灌注的氧化应激反应，提高ATP酶活力，降低caspase-3、caspase-8、caspase-9表达水平抑制神经细胞凋亡，对神经起到一定的保护作用。

关键词：益肾通脉方；急性脑梗死缺血再灌注；氧化应激；脑组织形态学；行为学

(中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1673-842X 2020) 12- 0052- 04

Effects of Yishen Tongmai Decoction on Oxidative Stress，Brain Tissue Morphology and Behavior in Rats with Acute Cerebral Infarction After Ischemia-reperfusionGUO Na1，ZHANG Shuquan2（1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，Shandong，China；2.Tai'an Hospital of Traditional Chinese Medicine，Tai'an 271000，Shandong，China）Abstract：Objective To investigate the effects of Yishen Tongmai Decoction on the improvement of oxidative stress，brain tissue morphology and behavior in rats with acute cerebral infarction after ischemia-reperfusion. Methods A total of 180 healthy SD male rats were randomly divided into sham operation group，model group and low，medium and high dose Yishen Tongmai group，with 36 rats in each group. Rats in Yishen Tongmai group were given traditional Chinese medicine by gavage（low dose group：25 mg/kg；medium dose group：50 mg/kg；high dose group：100 mg/kg），rats in the sham operation group and the model group were gavaged with normal saline of the same volume for 1 week. The rat model of reperfusion after middle cerebral artery occlusion was prepared and 32 rats in each group were screened out. During the modeling process，the rats in the sham operation group only underwent vascular separation，not arterial embolization. After 14 d of treatment，8 rats in each group were taken from their severed heads to prepare homogenate，and the levels of SOD，MDA and NO were detected according to the instructions of the kit. In each group，8 rats were cut off and their brains were extracted to prepare homogenate. ATP activity was detected by enzyme marker. The neurobehavioral behaviors of the rats in each group were evaluated and recorded on day 7 and day 14，respectively. After 14 d of treatment，8 rats were randomly selected from each group and their brains were cut off to prepare homogenate. The activity of caspase-3，caspase-8 and caspase-9 in the brain tissues of the rats was determined by colorimetry. After 14 days of treatment，8 rats were randomly selected from each group，and their brains were cut off and sectioned for microscopic examination. The infarct volume and the infarct rate were calculated by micrograph analysis system. Results After 14 d of treatment，SOD level in the model group was significantly lower than that in the sham group，and MDA and NO levels were significantly higher than that in the sham group（P<0.05）. The oxidative stress indexes of the Yishen Tongmai group and the model group were significantly different（P<0.05）. Na+-K+-ATP activity and 基金项目：山东省泰安市科技发展计划项目（2018NS0113）作者简介：郭娜（1995-），女，山东泰安人，硕士研究生，研究方向：中医内科学。通讯作者：张树泉（1962-），男，山东泰安人，教授，硕士研究生导师，研究方向：脑病内科疾病的诊治。E-mail：zhangshuquana@126.com。

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22卷 辽宁中医药大学学报 Mg2+-ATP activity in the model group were significantly lower than those in the sham group（P<0.05）. The ATP activity of Yishen Tongmai group was significantly higher than that of the model group（P<0.05）. After 7 and 14 days of treatment，the neurobehavioral scores of rats in the model group were significantly higher than those in the sham group（P<0.05）. The neurobehavioral scores of all doses of Yishen Tongmai group were significantly lower than that of the model group（P<0.05）. After 14 days of treatment，the expression levels of caspase-3，caspase-8 and caspase-9 in the model group were significantly higher than those in the sham group（P<0.05）. The expression levels of caspase-3，caspase-8 and caspase-9 in rats of Yishen Tongmai group were significantly weaker than those in the model group（P<0.05）. After 14 days of treatment，brain cell necrosis was obvious in rats in the model group，and the proportion of necrotic cells in rats in the Yishen Tongmai group decreased significantly. The size and rate of infarction were significantly higher in the model group than in the sham group（P<0.05）. The infarct volume and infarct rate of rats in Yishen Tongmai group were significantly lower than that in model group（P<0.05）. Conclusion Yishen Tongmai Decoction can effectively reduce the oxidative stress response of ischemia reperfusion in acute cerebral infarction，improve the activity of ATP，reduce the expression level of caspase-3，caspase-8 and caspase-9，inhibit the apoptosis of nerve cells，and play a protective role in nerves.Keywords：Yishen Tongmai Decoction；acute cerebral infarction ischemia reperfusion；oxidative stress；brain histomorphology；behavior急性脑梗死是一种常见的心脑血管疾病，患者一旦发病局部脑组织血流供应会明显减少，血流灌注不足导致的缺氧、缺血症状会对患者脑组织造成[1]进一步的损伤。脑梗死发生后机体会产生氧自由基[2]，短暂缺血恢复灌注时，会加剧氧自由基的合成与释放过程，导致其在患者脑组织大量堆积[3]。氧自由基会对脑细胞造成一定的损伤，并诱导其发生凋亡，对患者的脑组织形态学与神经行为学均会产生不良影响[4]。因此，即便在短暂缺血后恢复灌注，患者的脑组织仍会受到一定损伤。故有效清除氧自由基，是减轻脑梗死再灌注损伤，保护患者神经功能[5-6]的必要措施。益肾通脉方具有通络活血之效，在治疗缺血性脑损伤方面具有良好的效果，但其实际作用机制尚不明确。本次研究通过构建急性脑梗死缺血再灌注大鼠模型，探讨益肾通脉方是否能够有效减轻大鼠氧化应激反应，抑制神经细胞凋亡，并分析其保护大鼠神经功能的具体机制。1 材料与方法1.1 实验动物本次研究选取180只健康SD雄性大鼠，体质量250~280 g，购自成都达硕实验动物有限公司，合格证号SYXK（川）2014-1。1.2 仪器与试剂 益肾通脉方药物组方：坤草、葛根、川芎、当归、云苓各30 g，制首乌20 g，肉苁蓉、石斛、麦冬、炒山药、山茱萸各15 g，全虫、郁金、菖蒲各10 g，五味子5 g，中药材均为泰安市中医医院康仁堂颗粒剂。本次研究使用的主要仪器、试剂见表1。表1 主要仪器与试剂仪器与试剂高精度电子天平显微镜图像分析系统酶标仪SOD试剂盒MDA试剂盒NO试剂盒caspase-3试剂盒caspase-8试剂盒caspase-9试剂盒公司上海友声衡器有限公司日本奥林巴斯美国Media Cybernetics美国BIO-RAD上海晶抗生物工程有限公司上海晶抗生物工程有限公司上海晶抗生物工程有限公司北京百奥莱博科技有限公司北京百奥莱博科技有限公司北京百奥莱博科技有限公司型号/货号BS-600L型CΧ23型Image-Pro Plus Version 6.0BIORAD-680JKSJ-1821JKSJ-12JKSJ-2092YT152-BNKYT6-LZFYT655-HGV1.3 方法1.3.1 分组与建模 选取180只健康SD雄性大鼠，对大鼠进行随机分组，包括假手术组、模型组与低、中、高剂量益肾通脉方组，每组36只。对各组大鼠进行持续1周的灌胃治疗，之后进行建模。腹腔注射水合氯醛（10 mg/mL）对大鼠进行麻醉。之后将大鼠固定在手术台上，在其颈部作一手术切口，将右侧颈总动脉分离，之后分离其他动脉并进行电凝结扎。将大鼠颈总动脉近心端与颈外动脉结扎，并夹闭颈总动脉，在大鼠颈总动脉上作一小切口并插入尼龙线进行堵塞。2 h后拔出尼龙线恢复动脉灌注，并将大鼠肌肉与皮肤进行逐层缝合。假手术组仅进行血管分离，不采取动脉栓塞操作。再灌注24 h后评估各模型组大鼠神经功能损伤情况，将0分与4分大鼠剔除，其他视为造模成功。剔除造模失败的大鼠，各组保留32只大鼠进行后续实验。1.3.2 治疗方法 建模成功后对各组大鼠进行药物治疗，低、中、高剂量益肾通脉方组大鼠分别按照25、50、100 mg/kg进行灌胃，每天1次。假手术组与模型组大鼠采用等体积生理盐水灌胃，每天1次，连续治疗14 d。1.3.3 氧化应激指标检测 治疗14 d后，从各组随机抽取8只大鼠，断头取脑，将大鼠脑组织放入-20 ℃冰箱内保存15 min。之后取出大鼠脑组织剔除脑干、嗅球及小脑后，加入生理盐水制备成10%脑组织匀浆，离心10 min（4 ℃，3000 r/min），取上清液保存在-20 ℃冰箱内备用，用试剂盒检测各氧化应激指标水平含量。1.3.4 ATP酶活力检测 采取与“1.3.3”相同的方法制备大鼠脑组织匀浆，通过酶标仪检测Na+-K+-ATP与Mg2+-ATP酶活力。1.3.5 大鼠神经行为学评分检测 参考LONGA等[7]关于大鼠神经功能缺损的评分标准，大鼠行为表现正常，无神经异常表现记为0分；大鼠无法完全伸展右前肢记1分；大鼠右侧肢体瘫痪，行走时向右转圈记2分；大鼠在行走时会向右侧跌倒，或无法站立记为3分；大鼠无法自主活动，出现意识障碍记为4分。大鼠恢复灌注后24 h对模型组大鼠进行神经功能评分，将0分与4分大鼠剔除。在治疗7、14 d后，随机抽取各组大鼠8只，分别记录各组大鼠神经功能损伤评分，并进行对比分析。1.3.6 比色法检测 治疗14 d后，从各组随机抽取8只大鼠，断头取脑制备脑组织匀浆，按照试剂盒说明书执行各项操作，检测各组大鼠caspase-3、53

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caspase-8、caspase-9表达水平。1.3.7 大鼠脑组织形态学及梗死情况检测 治疗14 d后，将各组剩余8只大鼠断头取脑，用4%中性甲醛对大鼠左侧脑组织进行固定，包埋、切片、染色之后进行镜检观察大鼠脑组织形态。将冠状切面顺序切5片，厚度为2 mm，之后放入TTC溶液中，在37 ℃恒温振荡器内染色30 min。取出脑片通过显微图像分析系统计算大鼠脑组织梗死灶体积与梗死率。[8]1.4 统计学处理文中数据采用统计学软件SPSS17.0进行处理分析，计数资料用—

x±s表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。2 结果2.1 各组大鼠氧化应激指标水平比较模型组超氧化物歧化酶（SOD）表达水平明显低于假手术组（P<0.05），随着药物剂量的增加，益肾通脉方组大鼠SOD表达水平逐渐上升，且各组SOD表达水平均明显高于模型组（P<0.05）；模型组丙二醛（MDA）与NO水平明显高于假手术组P<0.05），随着药物剂量的增加，益肾通脉方组大鼠MDA与NO水平逐渐降低，且各组均明显低于模型组（P<0.05），见表2。表2 各组大鼠氧化应激指标水平比较（—x±s）组别nSOD（U·mg-1）MDA（μmol·g-1）NO（μmol·L）假手术组8174.93±9.2216.53±3.1132.35±3.28模型组8140.08±8.47a30.08±5.36a50.34±5.13a益肾通脉方低剂量组8147.23±8.30b24.32±4.42b45.38±4.12b益肾通脉方中剂量组8151.72±8.98b20.05±3.68b41.35±3.94b益肾通脉方高剂量组8162.82±10.25b17.33±3.38b37.41±3.68b注：与假手术组比较，aP<0.05；与模型组比较bP<0.052.2 各组大鼠ATP酶活力比较随着药物剂量的增加，益肾通脉方组大鼠Na+-K+-ATP与Mg2+-ATP酶活力逐渐上升，假手术组与各剂量益肾通脉方组ATP酶活力均明显高于模型组（P<0.05），差异具有统计学意义，见表3。表3 各组大鼠ATP酶活力比较（μmol Pi·mg-1·h-1，—x±s）组别nNa+-K+-ATPMg2+-ATP假手术组87.42±1.225.24±1.09模型组

85.01±0.81a3.36±0.80a益肾通脉方低剂量组85.96±1.08b4.24±0.91b益肾通脉方中剂量组86.21±1.22b4.58±0.97b益肾通脉方高剂量组86.62±0.94b4.81±0.79b

注：与假手术组比较，aP<0.05；与模型组比较，bP<0.052.3 各组大鼠神经行为学评分比较假手术组大鼠并未进行动脉夹闭与结扎，故神经功能正常，神经行为学评分在治疗7、14 d时均为0。随着药物剂量的增加，各组大鼠神经行为学评分逐渐降低，各组与模型组比较差异均有统计学意义P<0.05），见表4。表4 各组大鼠神经行为学评分比较（分，—

x±s）组别n第7天第14天假手术组800模型组82.66±0.56a2.03±0.38a益肾通脉方低剂量组81.76±0.43b1.43±0.34b益肾通脉方中剂量组81.46±0.33b1.13±0.27b益肾通脉方高剂量组81.11±0.32b0.70±0.15b注：与假手术组比较，aP<0.05；与模型组比较，bP<0.052.4 各组大鼠caspase-3、caspase-8、caspase-9表达水平比较模型组caspase-3、caspase-8、caspase-9表达

水平明显高于假手术组（P<0.05），随着药物剂量的增加，益肾通脉方组大鼠caspase-3、caspase-8、caspase-9表达水平逐渐降低，且各组均明显低于模型组（P<0.05），见表5。表5 各组大鼠caspase-3、caspase-8、caspase-9表达水平比较（U/mg，—

x±s）组别ncaspase-3caspase-8caspase-9假手术组80.78±0.071.84±0.13 3.21±0.33模型组87.47±0.76a8.36±0.84a12.35±1.30a益肾通脉方低剂量组86.22±0.62b6.45±0.62b 9.31±0.92b益肾通脉方中剂量组84.52±0.58b5.02±0.b 7.±0.75b益肾通脉方高剂量组82.26±0.29b3.28±0.35b 5.31±0.53b注：与假手术组比较，aP<0.05；与模型组比较，bP<0.052.5 各组大鼠脑组织形态学改变情况比较大鼠脑组织形态学镜检结果显示：假手术组大鼠细胞结构较为完整，细胞核位置居中，且核膜核仁较为清晰，细胞排列较为整齐。相比之下，模型组大鼠细胞排列较为散乱，部分细胞细胞核破裂，细胞坏死较为严重。各剂量益肾通脉方组大鼠随着药物剂量增加，坏死细胞占比明显减少，见图1。

假手术组 模型组

益肾通脉方低剂量组 益肾通脉方中剂量组益肾通脉方高剂量组图1 各组大鼠脑组织形态学改变情况（×400）2.6 各组大鼠脑组织梗死灶体积、梗死率比较随着药物剂量的增加，各组大鼠梗死灶体积与梗死率均逐渐降低，各组间与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05），见表6。表6 各组大鼠脑组织梗死灶体积、梗死率比较组别n梗死灶体积（mm3）梗死率（%）假手术组8 0

0

模型组

8191.63±10.94a31.±4.38a益肾通脉方低剂量组8128.47±7.45b27.53±3.96b益肾通脉方中剂量组8120.56±7.69b23.03±2.67b益肾通脉方高剂量组8111.48±8.25b16.12±1.43b

注：与假手术组比较，aP<0.05；与模型组比较，bP<0.053 讨论急性脑梗死会导致大量的氧自由基产生，这些氧自由基会对细胞内的脱氧核糖核酸、蛋白质、糖类、脂质等大分子造成一定的影响[9]，使其发生交联与形变等损伤，会对神经细胞的结构功能产生严重影响。脑缺血恢复灌注的过程中会生成更多的氧自由基，进一步加剧其损害作用，最终导致神经细胞功（（ 22卷 辽宁中医药大学学报 能丧失，诱发细胞凋亡[10]。故在急性脑梗死发生时，有效降低机体的氧化应激反应是保护神经细胞正常功能最便捷、最有效的方法。氧化应激指标主要包括SOD、MDA等[11]，其中SOD是抵御氧化损伤的酶，其可以将氧自由基歧化为过氧化氢与氧气，从而减轻机体分氧化应激反应[12]。MDA则是一种脂质氧化的天然产物，当机体处于氧化应激状态时，其会发生脂质氧化[13]。此外，自由基会激活NO合成酶，导致NO在机体内的含量增加。NO具有一定的神经毒性作用，NO堆积会对神经细胞造成一定的损伤[14]。SOD水平相对降低与MDA、NO水平相对升高预示着机体正在受到氧化应激反应带来的侵害，神经功能受到进一步损伤。ATP酶活力可以在一定程度上反应细胞的能量代谢水平，当脑组织处于缺氧缺血状态时，线粒体功能受阻，ATP生成减少。Na+-K+-ATP酶功能异常导致Na+在细胞内含量增加，并激活Na+-Ca2+交换体，Ca2+超载会加重脑组织损伤，进一步诱导神经元细胞发生凋亡[15]。此外，在氧自由基形成的过程中，Bax与Bcl-2形成异二聚体阻断信号传递过程，Bax还能自身形成二聚体向caspase家族传递凋亡信号[16]，其成员caspase-8与caspase-9将信号放大后呈递给caspase-3，最终执行促进细胞凋亡[17]。导致急性脑梗死缺血再灌注患者的脑组织形态学发生一定的改变，神经行为学功能也受到一定的影响。故尽可能的减弱机体的氧化应激反应，降低其对脑组织与神经细胞造成的损伤是当前临床医学在不断努力探索的目标与方向。益肾通脉方是治疗脑缺血再灌注损伤的经验良方，在促进患者神经功能恢复方面表现出较好的疗效。方中川芎补肾养血、补益肝肾，偏走于肢体筋脉，具强筋健骨之效；制首乌补肾益精，主治筋骨羸弱瘫软或中风肢体强急拘挛等症。诸药联用滋补肝肾、填充精血、通络化瘀、滋补驱邪，寓泻于补，补中有泻。本次研究主要观察益肾通脉方的作用效果，探究其保护大鼠神经功能的具体机制。苗明三等[18]在研究中指出：大血藤总酚酸可以通过减轻大鼠脑组织氧化应激反应，提高大鼠能量代谢来改善大鼠的神经功能。本次研究发现，益肾通脉方能够有效提升大鼠SOD含量水平，降低MDA、NO水平，减轻氧化应激反应对脑组织的损害作用。此外，大鼠的Na+-K+-ATP与Mg2+-ATP酶活力升高，预示着大鼠能量代谢得到了一定的改善，从而有效的避免钙离子超载对大鼠脑组织进一步造成损伤，对大鼠的神经功能保护起到了一定的效果。顾力华等[19]在研究中指出：局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织形态学会发生一定的改变，主要表现为细胞坏死，桑芪首乌片能够有效减轻大鼠的脑组织损伤，服药组大鼠脑组织形态学观察结果显示大鼠脑细胞随着药物剂量的增加形态逐渐趋于完整，排列也趋于整齐。且随着药物剂量的增加，大鼠梗死灶体积逐渐减小。本次研究得到相似的结果，随着药物使用剂量的增加，大鼠脑组织梗死灶的体积逐渐减少，梗死率也逐渐降低。说明益肾通脉方可以有效的抑制细胞凋亡过程，从而保护神经细胞的结构与功能的完整性。究其原因，可能在于益肾通脉方在减轻机体氧化应激反应的同时可以下调caspase家族成员的表达水平，避免神经细胞的过度凋亡，对大鼠的神经功能起到一定的保护效果。杜秋等[20]的研究结果表明：川芎嗪注射液可以有效的减小大鼠脑梗死比例，改善其神经行为学。本次研究结果表明，益肾通脉方对大鼠的神经行为学会产生一定的影响，通过降低机体的氧化应激反应对脑组织及神经功能起到一定的保护作用。且表现出一定的药物浓度依赖性，即药物浓度越高，其对大鼠神经功能的保护效果越好。综上所述，益肾通脉方可以有效减轻急性脑梗死缺血再灌注损伤，其主要作用机制可能在于降低机体的氧化应激反应，提高机体的能量代谢，抑制细胞凋亡过程，从而对脑组织及神经功能起到一定的修复与保护作用。◆参考文献[ 1 ] 王群涛，王海涛.高压氧治疗对急性脑梗死患者神经功能及氧化应激水平的影响[ J ] .中国民康医学，2019，31 ( 19 )：33-35.[ 2 ] 杨银涛，付磊，谭健伟.硫辛酸联合甲钴胺治疗急性脑梗死疗效及对患者NHISS评分、氧化应激水平的影响[ J ] .罕少疾病杂志，2019，26 ( 2 )：27-29.[ 3 ] 冯君健，周德生.依达拉奉联合中成药制剂治疗急性脑梗死大鼠的疗效和安全性评价[ J ] .湖南中医杂志，2019，35 ( 7 )：142-144.[ 4 ] 马宁，陈会生.尤瑞克林对急性脑梗死大鼠神经保护作用研究[ J ] .临床军医杂志，2018，46 ( 4 )：383-386.[ 5 ] 孙晓丽，王勇，刘俊杰，等.龙生蛭胶囊对脑卒中大鼠行为学的影响及脑组织的保护作用[ J ] .中国实验方剂学杂志，2019，25 ( 24 )：23-29.[ 6 ] 李晓娜.下调硫氧还蛋白相互作用蛋白表达对急性脑梗死大鼠脑保护作用[ J ] .国际神经病学神经外科学杂志，2019，46 ( 1 )：65-69.[ 7 ] LONGA E Z，WEINSTEIN P R，CARLSON S，et al. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[ J ] . Stroke，19，20 ( 1 )：84-91.[ 8 ] 凌丽，沈俊逸，陈淼，等.复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠脑组织梗死体积及形态学影响的实验研究[ J ] .中国中医急症，2018，27 ( 2 )：1-193.[ 9 ] 张芳，张波，钱发才.益血方对急性脑梗死大鼠血管新生的作用及对促血管生成因子HIF-1α和Ang-2表达的影响[ J ] .中国中医急症，2019，28 ( 6 )：1007-1010.[ 10 ] 路永坤，刘向哲，王新志，等.健脾补肾活血方对急性脑梗死患者氧化应激及血管内皮功能的影响[ J ] .中药药理与临床，2019，35 ( 3 )：156-160.[ 11 ] 刘长春，徐涛，莫卫焱，等.醒脑静联合依达拉奉治疗对大面积脑梗死患者血清氧化应激指标、神经功能及血流动力学的影响[ J ] .心脑血管病防治，2019，19 ( 5 )：458-460.[ 12 ] 陈华，张帆，王婉，等.丹红注射液辅助治疗急性脑梗死疗效及对氧化应激的影响[ J ] .现代中西医结合杂志，2019，28 ( 18 )：1986-1988.[ 13 ] 王江潮.通脉消梗汤对大面积脑梗死患者神经功能缺损程度和氧化应激的影响[ J ] .中国中医药科技，2019，26 ( 1 )：58-59.[ 14 ] 董自鹏.益肾活血汤联合电针穴位刺激对脑梗死后记忆功能障碍患者中医证候与氧化应激反应的影响[ J ] .光明中医，2019，34 ( 23 )：3597-3599.[ 15 ] 孙晓羽，曲慧玲.氟西汀灌服对脑缺血大鼠行为学及海马齿状回神经再生的影响[ J ] .山东医药，2019，59 ( 30 )：33-36.[ 16 ] 彭静华，金飞，张鸿日，等.过表达BCL-2对急性脑梗死大鼠神经功能的影响[ J ] .中风与神经疾病杂志，2017，34 ( 3 )：217-220.[ 17 ] 周哲屹，银楠楠，顿玲露，等.通窍活血汤对缺血性卒中后抑郁大鼠海马行为学及海马齿状回BDNF的影响[ J ] .时珍国医国药，2019，30 ( 11 )：2571-2574.[ 18 ] 苗明三，彭孟凡，方晓艳，等.大血藤总酚酸对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织氧化应激水平和能量代谢的影响[ J ] .神经药理学报，2019，9 ( 1 )：1-5.[ 19 ] 顾力华，杨仁华，陈奇刚，等.桑芪首乌片对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积及脑组织形态病理的影响[ J ] .中国中医基础医学杂志，2018，24 ( 8 )：1070-1072，1081.[ 20 ] 杜秋，夏勤，谈瑄忠，等.川芎嗪注射液穴位注射对缺血性脑中风模型大鼠脑梗死比例及行为学评分的影响[ J ] .中医药导报，2017，23 ( 17 )：32-34.55