您好,欢迎来到华佗健康网。
搜索
您的当前位置:首页橘皮提取物的抗氧化能力与有效成分分析

橘皮提取物的抗氧化能力与有效成分分析

来源:华佗健康网
龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn

橘皮提取物的抗氧化能力与有效成分分析

作者:淡小艳,王芳,薛佳尔,谢依锦 来源:《湖北农业科学》2012年第14期

摘要:用不同溶剂(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、去离子水)于室温对橘皮进行提取,得到不同溶剂的橘皮提取物。研究5种溶剂的橘皮提取物对1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)和亚盐的清除能力,并考察其有效成分的含量。结果表明,5种溶剂的橘皮提取物均具有清除DPPH和亚盐的能力,其中乙酸乙酯提取物的清除能力最强。在5种溶剂的橘皮提取物中柠檬苦素含量有极显著差异,黄酮、总酚的含量也如此;而氯仿提取物和石油醚提取物的单宁含量差异不显著,其他3种提取物的单宁含量差异极显著。乙酸乙酯提取物中各有效成分含量均最高,且相关性分析表明,橘皮提取物清除DPPH和亚盐的能力与其黄酮含量之间存在显著的相关性。

关键词:橘皮;提取物;1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH);亚盐;抗氧化能力;有效成分

中图分类号:TS202.3 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2012)14-3052-04

Antioxidant Ability of the Extracts from Orange Peels and Its Effectire Components

DAN Xiao-yan,WANG Fang,XUE Jia-er,XIE Yi-jing

(College of Chemistry and Life Sciences, Zhejiang Normal University, Jinhua 321004, Zhejiang, China)

Abstract: Different extracts of orange peels was obtained at room temperature using petroleum ether, chloroform, ethyl acetate, n-butyl alcohol and water as solvent. The DPPH free radical and nitrite scavenging capacity of the 5 extracts were determined; and the contents of their main active ingredients were examined. The results showed that all the five extracts from the orange peels had antioxidant activity and nitrite-scavenging ability. And the strongest antioxidant activity was observed in ethyl acetate extract. The content of limoni

龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn

n, flavonoid, total phenolics and tannins of the five extracts was different. The highest content of the four ingredients was detected in ethyl acetate extract; and correlation analysis showed that the content of flavonoids exhibited significant correlation with the antioxidative activity and nitrite-scavenging ability of the extracts from orange peels.

Key words: orange peel; extract; DPPH; nitrite; antioxidant ability; effective component

柑橘为中国著名果品之一,年产量超过107 t[1]。橘皮约占柑橘质量的20%~40%,除含维生素C、精油外,还含有丰富的黄酮类物质[2,3]。近年来,国内外关于橘皮抗氧化成分的研究较多,并取得了较大的进展。已有的报道表明天然橘皮中含有的黄酮类、酚类、精油、色素类、柠檬苦素等都是具有开发潜力的抑菌和抗氧化的化学成分[4-6]。随着人们对食品安全的关注程度不断加大,开发能够清除食品中亚盐的天然活性物质具有广阔的市场前景。目前橘皮的天然提取物对亚盐清除能力的研究尚未见报道,以橘皮为研究材料,分别使用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、去离子水5种不同极性的溶剂进行常压提取,测定5种提取物对1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)和亚盐的清除能力,并分析其中有效成分的含量,旨在为橘皮的进一步开发利用提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料

1.1.1 原料与试剂 柑橘购自浙江省金华市水果市场,于45 ℃条件下将新鲜橘皮烘干,用粉碎机粉碎得橘皮粉,于4 ℃保存备用;DPPH购自日本和光纯药工业株式会社,柠檬苦素标准品购自上海锐谷生物科技有限公司;其余试剂均为分析纯,购自金华市医药有限公司。

1.1.2 仪器与设备 料理机购自九阳股份有限公司,DZF-9140B型真空干燥箱购自上海一恒科学仪器有限公司,R-1001-L旋转蒸发仪购自郑州长城科工贸有限公司,UV1000紫外可见分光光度计购自上海天美科学仪器有限公司。 1.2 方法

1.2.1 5种溶剂的橘皮提取物的制备 取50 g橘皮粉,分别加入500 mL石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和去离子水,提取6 h,离心,收集上清液,再同法提取3

龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn

次。合并上清液,用旋转蒸发仪浓缩,回收溶剂。将浓缩后的样品放入55 ℃烘箱中烘干,得到5种膏状提取物,于4 ℃冰箱中备用。

1.2.2 对DPPH清除能力的测定 精确称取12.0 mg DPPH,用无水乙醇溶解并定容于250 mL容量瓶中,DPPH浓度为0.12 mmol/L,避光保存[7]。

将不同溶剂提取物用无水乙醇配成浓度为0.05、0.10、0.20、0.40和0.80 mg/mL的样品液,取2 mL待测样品,加入2 mL 0.12 mmol/L DPPH溶液,混匀避光放置30 min,在517 nm处测其吸光度(Ai);以溶剂为参比,于517 nm处测定吸光度(Ac);同时,取待测样品2 mL,加入2 mL无水乙醇,混匀,于517 nm处测定吸光度(Aj)。DPPH清除率=[1-(Ai-Aj)/Ac]×100%。

1.2.3 对亚盐清除能力的测定 采用盐酸萘乙二胺法[8]。向25 mL比色管中加入2 mL 25 μg/mL NaNO2标准溶液、3 mL样品液(不同提取物用去离子水配成的,浓度为0.05、0.10、0.20、0.40、0.80 mg/mL),迅速加入适量0.05 mol/L HCl调至pH 3,于80 ℃水浴10 min,然后加入1 mL 4 g/L对氨基苯磺酸混合均匀,静置3~5 min,加入0.5 mL 2 g/L盐酸萘乙二胺,振荡混匀,加去离子水定容至25 mL,静置15 min,以相应的试样空白调零,测定538 nm波长处的吸光度(A样品),亚盐清除率按以下公式计算:清除率=[1-(A样品-A样空)/A对照]×100%,式中,A对照为用3 mL去离子水代替对应体积的样品液试验测得的吸光度;A样空为用2 mL去离子水代替2 mL 25 μg/mL NaNO2标准溶液试验测得的吸光度。 1.2.4 有效成分含量的测定方法

1)总酚含量的测定。采用Folin-Ciocalteu试剂比色法[9]。精确称取0.005 g没食子酸标准样品,用去离子水溶解并定容至50 mL,标准溶液浓度为0.1 mg/mL。准确量取上述标准溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL于7个50 mL容量瓶中,各加30 mL去离子水,摇匀,再加2.5 mL福林酚试剂,充分摇匀。1 min后加入7.5 mL 200 g/L Na2CO3溶液,混匀。在75 ℃水浴反应10 min,于760 nm波长下测定吸光度,以没食子酸浓度为横坐标,吸光度为纵坐标制作标准曲线。用最小二乘法作线性回归。按照同样的方法测定样品的吸光度,带入得到的标准方程中即可得到样品总酚的浓度,从而得到提取物总酚的含量。

2)黄酮含量的测定。称取20 mg芦丁,用体积分数为10%的乙醇定容至25 mL,备用。取7支具塞试管,分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL芦丁标准溶液,用体积分数为30%的乙醇补足体积至5 mL,混匀,各加入

龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn

0.3 mL 50 g/L NaNO2,混匀静置5 min,加入0.3 mL 100 g/L Al(NO3)3,混匀后静置6 min,加入4 mL 1 mol/L NaOH,再加入0.4 mL 体积分数为30%的乙醇使总体积为10 mL,混匀后静置10 min,用UV1000紫外可见分光光度计于510 nm处测定吸光度,以试剂为空白参比。以芦丁浓度为横坐标,吸光度为纵坐标制作标准曲线。用最小二乘法作线性回归。按照同样的方法测定样品的吸光度,带入得到的标准方程中即可得到样品黄酮的浓度[10],从而得到提取物黄酮的含量。

3)单宁含量的测定。采用香草醛比色法[11]。准确称取0.05 g单宁溶于50 mL甲醇中,分别取上述标准溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0 mL,依次加入2.0、1.5、1.0、0.5、0 mL甲醇,然后加2 mL 40 g/L香草醛溶液和1.0 mL浓盐酸,于30 ℃水浴加热20 min,冷却,在510 nm处测定吸光度。以单宁浓度为横坐标,吸光度为纵坐标制作标准曲线。用最小二乘法作线性回归。按照同样的方法测定样品的吸光度,带入得到的标准方程中即可得到样品单宁的浓度,从而得到提取物单宁的含量。

4)柠檬苦素含量的测定。反应液的制备:将125 mg对二-甲氨基苯甲醛溶解于100 mL体积比为35∶65的硫酸、无水乙醇混合液中,加入0.5 mL 9 g/L三氯化铁溶液,现配现用。标准曲线的制作:将柠檬苦素标准品用无水甲醇配成130 μg/mL的标准溶液,在6支试管中分别加入0、0.5、0.8、1.2、1.5和2.0 mL标准溶液,分别加无水乙醇至2.0 mL,加入反应液5.0 mL,摇匀,静置30 min,在500 nm处测定吸光度,以空白溶液为参比溶液。以柠檬苦素浓度为横坐标,吸光度为纵坐标制作标准曲线。用最小二乘法作线性回归。按照同样的方法测定样品的吸光度,带入得到的标准方程中即可得到样品柠檬苦素的浓度[12],从而得到提取物柠檬苦素的含量。 2 结果与分析

2.1 有效成分含量测定中各标准方程的建立

1)总酚含量的测定。吸光度(y)与没食子酸浓度(x//μg/mL)的标准曲线的标准方程为=0.144 0x-0.030 6,r=0.993 9。

2)黄酮含量的测定。吸光度(y)与芦丁浓度(x//mg/mL)的标准曲线的标准方程为=1.301 9x+0.001 7,r=0.999 9。

3)单宁含量的测定。吸光度(y)与单宁浓度(x//mg/100 mL)的标准曲线的标准方程为=0.497 5x-0.021 7,r=0.997 7。

4)柠檬苦素含量的测定。吸光度(y)与柠檬苦素浓度(x//mg/mL)的标准曲线的标准方程为=5.235 0x-0.104 5,r=0.990 7。

龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn

2.2 不同溶剂的橘皮提取物对DPPH的清除能力

由图1可知,不同溶剂的橘皮提取物对DPPH都具有清除作用,清除率与提取物的浓度存在剂量效应关系,当提取物的浓度为0.80 mg/mL时,乙酸乙酯提取物对DPPH的清除率达到94.2%。由IC50计算小软件可以计算出5种溶剂的橘皮提取物的IC50分别为乙酸乙酯0.106 mg/mL、正丁醇0.171 mg/mL、氯仿0.311 mg/mL、去离子水0.584 mg/mL和石油醚0.887 mg/mL,可见5种溶剂的橘皮提取物中乙酸乙酯提取物对DPPH的清除能力最强。 2.3 不同溶剂的橘皮提取物对亚盐的清除能力

由图2可知,5种溶剂的橘皮提取物对亚盐均有一定的清除作用,且清除率与提取物的浓度存在剂量效应关系,当提取物的浓度为0.80 mg/mL时,乙酸乙酯提取物对亚盐的清除率达到64.2%。由IC50计算小软件计算得出5种溶剂的橘皮提取物的IC50分别为:乙酸乙酯0.366 mg/mL、正丁醇0.533 mg/mL、氯仿1.020 mg/mL、去离子水1.810 mg/mL和石油醚4.419 mg/mL,与清除DPPH的能力表现出相同的特点,5种溶剂的橘皮提取物中乙酸乙酯提取物对亚盐的清除能力最强。

2.4 不同溶剂的橘皮提取物中有效成分的含量

由表1可知,乙酸乙酯提取物中4种有效成分的含量远高于其他溶剂提取物中各成分的含量,黄酮含量最高,达40.40 mg/g;不同溶剂的橘皮提取物中黄酮含量均为最高。由SPSS 18.0软件计算可知,柠檬苦素含量在5种溶剂的橘皮提取物中有极显著差异,黄酮、总酚的含量也如此;氯仿提取物和石油醚提取物的单宁含量差异不显著,其他3种提取物单宁含量差异极显著。

2.5 橘皮提取物中有效成分与对DPPH和亚盐清除能力的相关性

橘皮提取物中黄酮、柠檬苦素、总酚和单宁含量与提取物对DPPH和亚盐清除能力的相关性分析结果如表2所示。由表2可知,黄酮含量与DPPH清除率之间呈显著正相关,其相关系数为0.936,与亚盐清除率之间呈极显著正相关,其相关系数为0.969,所以黄酮含量与提取物对DPPH和亚盐的清除能力之间有良好的相关性。柠檬苦素和总酚的含量与亚盐清除率之间也呈显著正相关。 3 结论

5种不同极性溶剂的橘皮提取物均具有清除DPPH和亚盐的能力,其中乙酸乙酯提取物的清除能力最强,表明橘皮中具有清除DPPH和亚盐能力的活性成分主要为中等极性的成分,乙酸乙酯是较为适宜的提取溶剂。

龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn

柠檬苦素含量在5种溶剂的橘皮提取物中有极显著差异,黄酮、总酚的含量也如此;而氯仿提取物和石油醚提取物的单宁含量差异不显著,其他3种提取物单宁含量差异极显著。且5种溶剂的橘皮提取物中黄酮的含量均最大,而且黄酮含量与提取物清除DPPH的能力呈显著正相关,与提取物清除亚盐的能力呈极显著正相关,柠檬苦素与总酚的含量与提取物清除亚盐的能力呈显著正相关,因此推测橘皮的主要抗氧化成分为黄酮,清除亚盐的主要活性成分为黄酮、柠檬苦素、总酚等成分。 参考文献:

[1] 汪海波,汪芳安,潘从道. 柑橘皮果胶的改进提取工艺研究[J]. 食品科学,2007,28(2):136-141.

[2] 麻明友,刘建本,吴显明,等. 超声微波双辅助提取柑橘皮总黄酮的研究[J]. 食品科学,2010,31(20):266-269.

[3] 张 玉,曾凡坤,吴 剑. 响应面法优化柑橘皮渣中类黄酮的超声波提取工艺[J]. 食品科学,2010,31(8):28-32.

[4] 孙石磊,姚卫蓉. 杨梅果实不同溶剂提取物抑菌特性的研究[J]. 中国微生态学杂志,2009,21(3):229-231.

[5] 关海宁,小琴,张润光. 柑橘皮功能性成分研究现状及发展前景[J]. 食品研究与开发,2008,29(9):169-173.

[6] REHMAN Z. Citrus peel extract—A natural source of antioxidant[J]. Food Chemistry,2006,99(3):450-454.

[7] 吴琼英,贾俊强.柚皮黄酮的超声辅助提取及其抗氧化性研究[J]. 食品科学,2009,30(2):29-33.

[8] 宋 茹,韦荣编,胡金申,等. 荔枝皮色素体外清除亚盐作用研究[J]. 食品科学,2010,31(5):104-107.

[9] 韩 菊,魏福祥.Folin-Ciocalteu比色法测定苹果渣中的多酚[J]. 食品科学,2010,31(4):179-182.

[10] WANG Y C,CHUANG Y C,HSU H W. The flavonoid,carotenoid and pectin content in peels of citrus cultivated in Taiwan[J]. Food Chemistry,2008,106(1):227-284.

龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn

[11] 吴耀军,常明山,李德伟,等. 桉树枝瘿姬小蜂危害对桉树缩合单宁含量的影响[J]. 南京林业大学学报(自然科学版),2010,34(6):1-4.

因篇幅问题不能全部显示,请点此查看更多更全内容

Copyright © 2019- huatuo0.com 版权所有 湘ICP备2023021991号-1

违法及侵权请联系:TEL:199 1889 7713 E-MAIL:2724546146@qq.com

本站由北京市万商天勤律师事务所王兴未律师提供法律服务