专题论述 食品研究与并发 ２０１３年４月 Ｆｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ ＤｅｖｅＬｏｐｍｅｎｔ 第３４卷第８期 ＤＯＩ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００５－６５２１．２０１３．０８．０３２ 低聚半乳糖检测方法研究进展 张志国 （内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司研发中心，内蒙古呼和浩特０１１５００） 摘要：在参阅国内外大量文献的基础上，详细归纳了检测低聚半乳糖的薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法、离子 色谱法等各自的优缺点及研究进展。认为今后低聚半乳糖的检测方法应该以ＡＯＡＣ ４５．４．１２—２００１．０２方法为基础，研 究适用性强的检测方法。为建立食品中低聚半乳糖的国标检测方法提供参考依据。 关键词：低聚半乳糖；检测方法；研究进展 Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｎ ＺＨＡＮＧ Ｚｈｉ－ｇｕｏ （Ｒ＆ＤＣｅｎｔｅｒ，ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＭｅｎｇｎｉｕＤａｉｒｙ（Ｇｒｏｕｐ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｈｕｈｈｏｔ０１１５００，Ｉｎｎｅｒｍｏｎｇｏｌｉａ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ，ｔｈｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ ａｄｖａｎｔａｇｅｓ ａｎｄ ｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓ ａｎｄ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｇａｌａｃｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｏｎ ｔｈｉｎ－ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎｄ ｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗａｓ ｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ ｉｎ ｄｅｔａｉｌ．Ｔｈｅ ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ｗａｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＡＯＡＣ ４５．４．１２ ２００１．０２ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｌｌ ｂｅ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ．Ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｐａｐｅｒ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｖｉｄｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ＧＢ ｏｆ ｇａｌａｃｔ００ｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｎ ｆｏｏｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｇａｌａｃｔｏ０ｌｉｇ０ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ；ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄｓ；ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ 低聚半乳糖（Ｇａｌａｃｔ０ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＧＯＳ）是由 外标法检测存在一定的困难，所以低聚半乳糖检测技 ２个～８个单糖通过Ｂ一糖苷键连接形成直链寡糖，不能 术是低聚糖检测研究的重点。下面从国内外低聚半乳 被人体上消化道消化吸收，可以直接进入大肠。经过 糖检测技术的研究情况、存在的问题和研究方向分别 国内外科学家的大量研究，低聚半乳糖具有低能量、 进行介绍。 促进肠道双歧杆菌的增殖、改善矿物质元素的吸收和 防止骨质减少、改善脂质代谢、预防、治疗便秘、低致龋 １低聚半乳糖检测方法研究现状 齿性、生成营养物质，改善营养状况、提高免疫力、增强 低聚半乳糖属于低聚糖，而低聚糖的分离检测技 抗肿瘤和抗衰老等营养功能 。 术一直是科研工作者研究的重点。Ｒｉｃｈａｒｄ Ｃ ｅｔ ａｌｔＳ］在 低聚半乳糖在日本已经广泛的被用作甜味剂、糖 １９８６年采用纸色谱检测了婴儿配方乳中的乳果糖和 的替代品、食品原料、功能性食品原料，在各类食品中 大豆低聚糖，Ｔａｋａｍｉｔｓｕ ｃｈａｋａ ｅｔ ａｌ同采用薄层色谱法分 添加。我国卫生部已经批准ＧＯＳ为新资源食品，并且 离了藻朊酸纤维低聚糖，Ｓｐｌｅｃｈｔｎａ Ｂ ｅｔ ａｌ［７］采用薄层色 允许添加在婴幼儿食品、乳制品、饮料、焙烤食品、糖果 谱法分析了转糖基产物中的低聚半乳糖。 中（中华人民共和国卫生部公告２００８年第２０号，中华 对于低聚糖的分离检测技术，高效液相色谱法研 人民共和国卫生部公告２００７年第１２号）＿３１。 究相对多一些［８１，高效液相色谱法主要利用低聚糖的 因为低聚半乳糖是一系列半乳糖基低聚糖的混 易溶特性，在糖柱、氨基柱、凝胶柱上分离效果较好的 合物，聚合度从２到８不等，有１５种以上的组分 ，用 特点，一般采用示差折光检测器检测。随着技术的进 基金项目：呼和浩特市重大科技专项（２０１１－重一Ｉ一１３）；国家“十二五” 步，Ａｎｔｏｎｏｐｏｕｌｏｓ Ａ ｅｔ ａｌｌ９］用蒸发光散射检测器（ｅｖａｐｏ— 高技术研究发展计￣ｔＪ（８６３计划）项目（Ｎｏ．２０１２ＡＡ１０１６０５０４） ｒａｔｉｖｅ ｌｉｇｈｔ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ＥＬＳＤ）检测低聚糖的研 作者简介：张志国（１９７７一），男（汉），高级工程师，硕士，研究方向：食 究，蒸发光散射检测器比示差折光检测器检出限高１～２ 品检测技术研究。 个数量级，具有比较好的前景。Ｈｉｒｏｔａｋａ Ｋａｋｉｔａ ｅｔ ａ１Ｉ ｑ把 张志国：低聚半乳糖检测方法研究进展 专题论述 —＝＝＝１１６ 单糖和低聚糖进行荧光素衍生后，利用ＨＰＬＣ法检测 取得了较好的效果。 随着技术的发展，也有用质谱进行低聚糖分离和 结构分析的研究。林勤保等ｌｌＩ１用气相色谱一质谱联用法 测定了大枣低聚糖的单糖组成，结果发现大枣低聚糖 的单糖组成为阿拉伯糖、鼠李糖、核糖、甘露糖、半乳糖 和葡萄糖，同时测定了大枣中单糖的组成成分为果糖 和葡萄糖，取得了较好的效果。Ｂｒｏｂｅｒｇ Ａ【ｌ 用高效液相 色谱串联离子阱质谱进行了低聚糖的分析。Ｙｉｎｇ Ｌｉｕ ｅｔ ａ１ 采用液相色谱和液相色谱串联电喷雾电离质谱 进行了低聚糖分离和鉴定。 另外，冯咏梅等㈣还采用００１ｘ７阳离子交换树脂 柱层析分离提纯低聚半乳糖（ＧＯＳ）混合物，然后采用 薄层色谱分析纯化结果。Ｋａｍｏｄａ Ｓ ｅｔ ａｌ［坷采用激光诱 导荧光检测器分析经过毛细管电泳分离的Ｎ一连接低 聚糖，也取得了良好的效果。还有Ｄｒｅｉｓｅｗｅｒｄ Ｋ ｅｔ ａｌｔ 采用薄层色谱板分离生牛乳中的低聚糖，然后用基质 辅助激光解吸电离飞行时间质谱完成分析，也取得了 较好的结果。 下面根据研究较多的分析方法具体介绍一下检 测低聚半乳糖的方法，有薄层色谱法（Ｔｈｉｎ Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏ— ｍａｔｏｇｒａｐｙ）、气相色谱法、液相色谱法、离子色谱法。 １．１薄层色谱法 李玉梅等㈣对低聚半乳糖含量为３０％的Ｂ一半乳 糖苷酶转糖基发酵产物进行了分析。利用薄层色谱法 和ＨＰＬＣ法两种方法。薄层色谱法采用Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０制 薄层板，展开剂为：正丁醇：乙醇：水＝５：３：２（体积比）， 薄层显色剂为：２０％硫酸溶液＋０．５％３，５一二羟基甲 苯，糖显色条件为：１２０ ｏＣ烘烤３ ｍｉｎ～５ ｍｉｎ，然后用 ＩｍａｇｅＪｖ １．２８软件进行定量分析。 陆文伟等【 睬用薄层色谱法，并把展开剂调整为： 正丁醇：正丙醇：乙醇：水＝２：３：３：２（体积比），分析了转 糖基产物中的低聚半乳糖含量（含量超过２０％）。 许牡丹等［ 睬用上行薄层色谱法以硅胶Ｇ做薄层， 正丁醇：水＝８５：１５作展开剂，用苯胺一二苯胺一磷酸溶 液作为显色剂检测转糖基产物中各个糖组分含量（低 聚半乳糖含量大于２Ｏ％）。 李正义等［２０１采用了李玉梅等 的相同薄层色谱方 法分析了低乳糖牛奶中的低聚半乳糖含量，由于乳糖 水解率很高，超过７０％，ＧＯＳ含量超过２０％，所以乳糖的 干扰很少。而采用Ａｍｉｎｅｘ ＨＰＸ－４２Ｃ（３００ ｍｉｎｘ７．８ ｍｍ）糖 分析柱，超纯水作流动相，柱温７Ｏ℃的ＨＰＬＣ条件检 测。转移二糖和乳糖的色谱峰重叠，造成低聚半乳糖 含量的检测结果偏低，乳糖含量的检测结果偏高。 吴昊等＿２ｌ＿对高效薄层色谱法分析低聚半乳糖及其 衍生物进行了系统的研究。试验对薄层厚度、固定相 盐效应、硅胶粘合剂浓度、点样的技巧以及展开剂的 选择、显色剂优化等进行了优化试验，确定了适合的 方法。但是方法适合高低聚半乳糖含量和低的乳糖和 半乳糖含量的样品。 １．２气相色谱法 随着气相色谱法和衍生技术的发展，也有人采用 气相色谱分离检测碳水化合物，由于糖的高分子量和 沸点高的特点，先把多糖水解成单糖，然后采用衍生 试剂把单糖衍生成容易气化的物质，采用气相色谱分 离定量，所以气相色谱主要进行单糖组成及含量的分 析，操作相对复杂。 刘建福［２２－２３１把经过分离纯化的低聚半乳糖样品水 解、衍生后用气相色谱分析。试验采用０Ｖ１７０１石英毛 细管柱（３０ １ＴＩ，Ｉ．Ｄ．０．３２ ｍｍ），根据测定的葡萄糖和半 乳糖峰面积之比确定分离产物的大致结构，但是没有 给出定量方法。 １．３液相色谱法 采用高效液相色谱检测单糖和低聚糖，是目前较 为普遍的方法。前面介绍的研究人员还采用液相色谱 法和薄层色谱项结合分析了转糖基产物中的低聚乳 糖。比如，李玉梅等 还用ＨＰＬＣ分析了转糖基产物中 的低聚半乳糖。将糖浆用０．２２ ｍ滤膜过滤，以三蒸水 作为流动相，柱温８０℃，色谱柱为Ａｍｉｎｅｘ ＨＰＸ一４２Ａ （３００ ｍｉｎｘ７．８ ｍｍ）糖分析柱。陆文伟等口８】也采用ＨＰＬＣ 法测定了转糖基产物中的低聚半乳糖含量，流动相用 ５ ｍｍｏｌ／Ｌ硫酸，柱温为５０℃，色谱柱用Ａｍｉｎｅｘ ＨＰＸ ８７Ｈ。 Ｂａｒｒｏｓｏ Ｂｅｇｏｎａ ｅｔ ａｌ 采用在线高效液相色谱／飞 行时间质谱联用仪分析了糖蛋白来源的低聚糖的结 构和类型，分析了Ｎ连接和０连接的低聚糖，取得了 较好的效果。 罗倩等闭研究了利用１一苯基一３一甲基一５一吡唑啉 酮（ＰＭＰ）对低聚半乳糖柱前衍生化的方法，并采用硅 胶柱层析结合薄层层析，分离检测原料糖浆中低聚半 乳糖，采用紫外光检测器在波长２４５ ｎｍ条件下，可以 检测半乳糖、葡萄糖、乳糖、三糖、四糖、五糖。从而进 行间接定量。 吴红京等［２６１采用反相高效液相色谱仪，以水作为 流动相，分离分析了淀粉经过酶水解得到的含２－６个 葡萄糖聚合物的混合物，也取得了比较好的结果。 李静芳等 研究了高效液相色谱法测定乳制品及 糖浆中低聚半乳糖含量的方法。以水和乙腈为流动 专题论述 张志国：低聚半乳糖检测方法研究进展 相，用氨基柱将葡萄糖、半乳糖和乳糖与其他物质分 离，用示差折光检测器检测定量。通过检测计算低聚 半乳糖酶解成的半乳糖含量，来计算样品中低聚半乳 糖含量。葡萄糖、半乳糖、乳糖和低聚半乳糖的相对标 准偏差分别为２．７２％、４．１６％、１．１６％、４．２６％。此法的 线性相关系数为０．９９９ ０—０．９９９ ５，回收率达到９５％～ １ １０％。该方没有解决水解后样品溶液中半乳糖和葡 萄糖分离的问题，也没有确定半乳糖换算成低聚半乳 糖的换算系数，推广意义不大。 １．４离子色谱法 离子色谱法检测单糖和低聚糖是比较新的检测 技术，具有灵敏度高、分离效率好等优点。离子色谱法 检测低聚半乳糖首先是美国ＡＯＡＣ官方公布的标准 方法，其他的关于离子色谱法检、？贝４低聚半乳糖的研究 主要是对ＡＯＡＣ标准方法的改进研究。 １．４．１美国ＡＯＡＣ ４５．４．１２—２００１．０２标准［２８１ ＡＯＡＣ ４５．４．１２—２００１．０２（（Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓ— Ｇａｌａｃｔ０ｏｌｉｇ０ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（ＴＧＯＳ）ｉｎ Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｄ— ｕｃｔｓ））标准，依据的理论基础是利用特定、专一的Ｂ一半 乳糖苷酶水解样品中的乳糖和低聚半乳糖，产物是葡 萄糖和半乳糖，再利用样品中检测出的乳糖含量计算 出乳糖水解来源的半乳糖含量。最后用样品溶液中总 半乳糖含量减去游离的和乳糖水解来源的半乳糖含 量，然后用半乳糖增量乘以一个系数计算得到样品中 低聚半乳糖（ＧＯＳ）的含量。该标准的操作和计算步骤 如下： ①用ＩＣ测出游离的半乳糖和乳糖的量； ②计算乳糖来源的半乳糖的量； ③水解样品中的乳糖和 ； ④用ＩＣ钡４出水解液中总半乳糖的量； ⑤计算ＧＡＬＧ０ｓ＝ＧＡＩ＿￣一ＧＡ —ＧＡＬＬｉｃ； ⑥计算 ＝ｋ×ＧＡＩ 。 注：这里 ＝（１８０＋１６２ ｎ）／（１８０ ｎ），ｎ是低聚半乳糖 分子中半乳糖基的平均数。 该标准方法用于低聚半乳糖的检测存在２个技术 问题： １）ＡＯＡＣ ４５．４．１２—２００１．０２标准中的计算系数是由 低聚半乳糖的聚合度计算得到的。可是在试际检测 中，由于不同生产工艺造成的低聚半乳糖各组分的复 杂性，低聚半乳糖的聚合度不能准确测量得到。因为 没有统一的换算系数，所以该方法只能是给出了检测 思路和方法，推广的意义不大。 ２）因为定量依据是样品中半乳糖的增量，所以待 测样品中乳糖或含有半乳糖的碳水化合物的量是影 响检测结果准确性的最重要因素（该标准已经做了说 明）。食品尤其是乳粉中的乳糖含量（＞１４０ ｇ／１００ ｇ）远 高于添加的ＧＯＳ含量（≤１ ｇ／１００ ｇ），这样由乳糖水解 来源的半乳糖含量高于２０ ｇ／ｌＯＯ ｇ。而由ＧＯＳ水解得 到的半乳糖含量不超过总半乳糖含量的５％，从样品 处理、仪器分析的结果分析这５％增量可以计为非常 好的平行结果，不能用来计算ＧＯＳ的含量，因此该方 法不适用于乳糖含量高的样品。 １．４．２其他的离子色谱检测方法 采用离子色谱法检测低聚半乳糖含量的研究基 本上都是以ＡＯＡＣ ４５．４．１２—２００１．０２标准为基础进行 的。主要在色谱柱型号、流动相梯度和浓度、Ｂ一半乳糖 苷酶的添加量等方面进行了研究，也有科研人员利用 离子色谱一质谱联用进行了一些研究。 Ｂｒｕｇｇｎｋ Ｃ ｅｔ ａｌ 用离子交换色谱和单四极质谱串 联做了一些研究，并认为该方法可以分离分析了 ｃｈｉｃｏｒｙ ｃｏｆｆｅｅ、蜂蜜、啤酒样品中的单糖、二糖、三糖和 低聚糖。 李建文等［３ｏｌ在ＡＯＡＣ一２００１．０２方法基础上，优化 淋洗液梯度，以高效离子色谱一脉冲安培检测法测定 了原料糖浆中的低聚半乳糖含量。 徐莉等ｐ 考ＡＯＡＣ－２００１．０２方法，用水、２５０ｎｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ溶液和１ ｍｏｌ／Ｌ乙酸钠溶液梯度淋洗，选用 ＣａｒｂｏＰａｃ ＰＡｌ０（２ ｍｍｘ２５０ ｍｍ）色谱柱和安培检测器， 研究了离子色谱法测定糖浆中低聚半乳糖含量的方 法，测定了糖浆中各组分（乳糖、半乳糖、葡萄糖和低 聚半乳糖）的含量。 ２现有方法存在的问题 ２．１样品通用性 虽然现在有很多技术进行低聚半乳糖的检测，但 是主要针对低聚半乳糖原料糖浆、转化糖产物等低聚 半乳糖含量较高的样品。包括ＡＯＡＣ标准在内，涉及 到的食品样品也主要是乳糖含量较低和半乳糖含量 较低的食品样品中低聚半乳糖含量的检测。 ２．２外标法的适用性 工业化生产使用乳糖酶的来源不同，各生产企业 采用的生产工艺也存在一定的差别，造成了低聚半乳 糖组分种类和比例的复杂性，采用外标法检测存在标 准品制备难度大、色谱分离技术要求高等技术难点， 所以采用外标法进行检测方法研究的可能性不大。 ２．３经验换算系数 采用Ｂ一半乳糖苷酶把样品中乳糖和低聚半乳糖 水解，通过半乳糖增量计算样品中低聚半乳糖含量， 张志国：低聚半乳糖检测方法研究进展 专题论述 —＝＝＝１１８ 需要利用样品中低聚半乳糖中的半乳糖单元的平均 数（半乳糖单元的平均聚合度）来计算得到一个换算 系数。因为低聚半乳糖组分的复杂性，所以到目前为 止还没有一个统一的换算系数，导致即使测得来源于 低聚半乳糖的半乳糖增量，也无法计算出样品中低聚 半乳糖的含量。 ２．４样品中乳糖含量 考虑到采用ＡＯＡＣ一２００１．０２方法的思路，我们必 须要检测到来源于样品中低聚半乳糖的半乳糖增量， 所以如果样品中游离的半乳糖、乳糖或者含有半乳糖 的低聚糖含量非常高，比如说乳制品样品，就需要解 决样品中游离的半乳糖、乳糖或含有半乳糖的低聚糖 的去除问题，而上述研究中都没有对这一问题进行 研究。 ３食品中低聚半乳糖检测方法的研究方向 由于国际上发布的低聚半乳糖的检测方法标准 只有ＡＯＡＣ ４５．４．１２—２００１．０２（（Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓ— Ｇａｌａｃｔ００ｌｉｇ０ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（ＴＧＯＳ）ｉｎ Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｄ－ ｕｃｔｓ＞＞，我们国家还没有发布低聚半乳糖检测方法的国 家或行业标准。而其他的研究结果应用到食品中低聚 半乳糖的测定存在较多的不足，所以食品中低聚半乳 糖的检测方法研究最好以ＡＯＡＣ方法为思路，重点解 决以下２个问题。 ３．１商业化低聚半乳糖分子的平均聚合度 通过对商业化低聚半乳糖原料中低聚半乳糖组 分结构和比例进行研究，测定并计算低聚半乳糖的平 均聚合度，进而计算得到利用半乳糖增量计算低聚半 乳糖含量的换算系数，解决ＡＯＡＣ方法结果计算问题。 低聚半乳糖平均聚合度的测定方法主要有高效 液相色谱法、离子色谱法和质谱法。 ＨＰＬＣ法可以采用聚合度分析和氨基柱分析，利 用面积归一法计算出低聚半乳糖的平均聚合度。离子 色谱法需要选用适合分离低聚糖的色谱柱，把低聚半 乳糖原料进行很好的分离，测量每个组分的分子量 （或聚合度），然后用面积归一法计算出低聚半乳糖的 平均聚合度。这两种方法建立在用于研究的低聚半乳 糖原料是由纯的乳糖转化而来，不能含有乳糖来源的 半乳糖、葡萄糖、低聚糖以外的低聚糖，而且每一种低 聚半乳糖组分都要很好的分离，还要知道每个组分的 聚合度，同时假设每种组分的响应值相等，存在一定 的误差。 质谱法需要对低聚半乳糖每个组分的质荷比进 行测量，确定不同质荷比的离子丰度，通过每个聚合 度组分的离子丰度比计算低聚半乳糖的平均聚合度。 质谱法所研究的对象也应该是由纯的乳糖转化而来 的低聚半乳糖，不能含有其他来源的低聚糖，还要保 证乳糖和低聚半乳糖中的二糖有很好的分离，保证每 个聚合度组分的离子丰度响应值相同（最重要的是每 个离子的带电荷数一定要相等），也存在一定的误差。 虽然以上测定聚合度的方法都存在一定的误差， 但是通过分析误差的可接受程度和测定方法的可操 作性，应该可以建立与蛋白质换算系数相类似的低聚 半乳糖的换算系数。 ３．２可测定样品的通用性研究 因为需要通过测定样品中的半乳糖增量来计算 样品中低聚半乳糖含量，所以样品中游离的乳糖、半 乳糖含量是影响测定结果准确性的重要因素，因为本 底中半乳糖含量太高，通过水解后得到的半乳糖增量 相对比例较低，测定误差就比较大。 研究并解决在样品前处理中去除游离乳糖、半乳 糖的干扰，能够提高检测结果的准确性，提高检测方 法对样品的通用性，尤其是乳制品样品。可以考虑通 过固相萃取、微生物、色谱制备技术对样品中游离的 乳糖、半乳糖进行去除。但是因为检测目标物和乳糖、 半乳糖都属于糖类，结构相同，所以这部分研究将有 比较大的难度，并且需要较大的投入。 另外，在样品前处理过程中还需要考虑样品中的 带电离子尤其是二价离子对离子色谱柱的影响，需要 研究这些离子的去除技术。 ４结论 虽然低聚半乳糖的检测技术研究有一定的难度， 但是随着人们的生活水平不断提高，添加低聚半乳糖 的食品会越来越受到消费者的重视，开发生产添加低 聚半乳糖的具有益生功能的食品将是发展趋势。从当 前国内的食品质量安全形式和消费者对食品质量要 求的不断提高，研究开发食品中低聚半乳糖含量的检 测方法显得尤为重要。研究开发并制定食品中低聚半 乳糖含量的检测方法标准，不仅能够为企业提供适合 的检测方法，加强产品的生产过程控制；也可以为食 品质量监督检验部门提供检测方法，并可为食品中其 他低聚糖成分的检测技术研究提供借鉴。 参考文献： 【１１毛跟年，许牡丹．功能性食品生理特性与检测技术【Ｍ］．北京：化学 工业出版社，２００５：１０３—１ １７ 【２ Ｖａｎ Ｌｏｏ ２］Ｊ，Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｊ，Ｄｅｌｚｅｎｎｅ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｆｏｏｄ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ 专题论述 张志国：低聚半乳糖检测方法研究进展 ｏｆ ｎｏｎ－ｄｉｇｅｓｔｉｂｌｅ ｇａｌａｃｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ：ａ ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｒｅｐｏｒｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＥＮＤＯ ｐｒｏｊｅｃｔ（ＤＧＸＩＩ ＡＩＲ ＩＩ—ＣＴ９４－１０９５）［Ｊ］．Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｔｉｒｔｉｏｎ，１９９９，８１：１２１—１３２ 【３３ 中华人民共和国卫生部公告（】２００７年第１２号）叨．中国食品卫生 杂志，２００７，１９（６）：５７１—５７３ ［４】张志国．功能性低聚半乳糖的研究进展及应用【Ｊ］．中国食品添加 剂．２０１２（６）：２０７—２１３ ［５】Ｒｉｃｈａｒｄ Ｃ，Ｂｅａｃｈ Ｉ Ｍ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｌａｃｔｕｌｏｓｅ ａｎｄ ｓｏｙａ ｏｌｉｇｏｓａｃ－ ｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ ｉｎｆａｎｔ ｆｏｒｍｕｌａ ｍｉｌｋ ｆｅｅｄｓ［Ｊ］．Ｊ Ｄａｉｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９８６，５３： ２９３—２９９ ［６］Ｔａｋａｍｉｔｓｕ ｃｈａｋａ，Ｈｄｅｔｏ Ａｋｍｉ，Ａｋｉｈｉｒｏ Ｓｈｂａｔａ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｇｉｎａｔｅｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｒｏｍｍｏｌｌｕｓｋ ．Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ， ２００６，７０（１ １）：２７９３—２７９６ 【７］Ｓｐｌｅｃｈｔｎａ Ｂ，Ｎｇｕｙｅｎ ＴＨ，ＳｔｅｉｎｂＳｃｋ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ ｇａｌａｃｔｏ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ ｌａｃｔｏｓｅ ｕｓｉｎｇ ｂｅｔａ—ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅｓ ｆｒｏｍ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ［Ｊ］．Ｊ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ，２００６，５４（１４）： ４９９９—５００６ 【８］Ｓｈａｗ Ｐ Ｅ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ｓｕｇａｒ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｆｏｏｄｓ ｂｙ ＨＰＬＣ［Ｍ］．Ｂｏ－ ｃａ Ｒａｔｏｎ：ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ，１９８８：２７—３０ ［９］Ａｎｔｏｎｏｐｏｕｌｏｓ Ａ，Ｆａｖｅｔｔａ Ｐ，Ｌａｆｏｓｓｅ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｏ－ ｔａ—ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎｓ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｗｉｔｈ ｈｉ ｈｇ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｗｉｔｈ ｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅ ｌｉｇｈｔ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ 【Ｊ］．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ａ，２００４，１０５９（１／２）：８３－８７ ［１０］Ｈｉｒｏｔａｋａ Ｋａｋｉｔａ，Ｈｉｒｏｓｈｉ Ｋａｍｉｓｈｉｍａ，Ｋａｔｓｕｏ Ｋｏｍｉｙａ，ｅｔ ａ１．Ｓｉｍｕｈａ－ ｎｅｏｕｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ａｎｄ ｏｌｉｇｏｓａｅｅｈａｒｉｄｅｓ ｂｙ ｈｉｇｈ— ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｐｏｓｔｃｏｌｕｍｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ａ，２００２，９６１（１）：７７－８２ ［１ １］林勤保，蒋梅峰，杨春．气相色谱一质谱联用法测定大枣低聚糖的 单糖组成［Ｊ１．食品科学，２００９，１６：２１０—２１２ 【１２］Ｂｒｏｂｅｒｇ Ａ．Ｈｉｇｈ—ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｅｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ／ｅｌｅｅｔｒｏｓｐｒａｙ ‘ｉｏｎｉ‘ｚａｔｉｏ ｎ ｉ’ｏｎ—ｔｒａｐ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｆｏｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａ－ ｉｒｄｅｓ ｄｅｒｉｖａｔｉｚｅｄ ｂｙ ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ａｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｎ，Ｎ—ｄｉｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｒＪ】． Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｅｓ，２００７，３４２（１ １）：１４６２—１４６９ 【１３】Ｙｉｎｇ Ｌｉｕ，Ｓａｍｅｅｒ Ｕｒｇａｏｎｋａｒ，Ｊｏｈｎ Ｇ Ｖｅｒｋａｄｅ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｕｎｄｅｒｉｖａｔｉｚｅｄ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｕｓｉｎｇ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎｄ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ａ，２００５，１０７９（１／２）：１４６—１５２ ［１４］冯咏梅，常秀莲，王文华，等．离子交换层析快速高效分离低聚糖 【Ｊ］．食品与发酵工艺，２００９，３５（３）：１７９—１８２ 【１５］Ｋａｍｏｄａ Ｓ，Ｉｓｈｉｋａｗａ Ｒ，Ｋａｋｅｈｉｋ．Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｗｉｔｈ ｌａｓｅｒ—－ｉｎｄｕｃｅｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｄｅｔａｉｌｅｄ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｎ—． １ｉｎｋｅｄ ｏｌｉｇｏｓａｅｃｈａｒｉｄｅ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｍｏｎｏ— ｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ａ，２００６，１ １３３（１／２）：３３２—３３９ 【１６］Ｄｒｅｉｓｅｗｅｒｄ Ｋ，Ｋ￣ｌｂｌ Ｓ，Ｐｅｔｅｒ－Ｋａｔａｌｉｎｉｃ ｊ，ｅｔ ａ１．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｎａｔｉｖｅ ｍｉｌｋ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｆｒｏｍ ｔｈｉｎ－ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｐｌａｔｅｓ ｂｙ ｍａｔｒｉｘ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ｌａｓｅｒ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ— ｔｉｍｅ一０卜Ⅱｉｇｈｔ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｙｒ ｗｉｔｈ ａ ｇｌｙｃｅｒｏｌ ｍａｔｒｉｘ［Ｊ］．Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ，２００６，１７（２）：１３９－１５０ ［１７］李玉梅，卢丽丽，肖敏．产转糖基Ｂ一半乳糖苷酶菌株Ｆ３的鉴定、 产酶条件及转糖基活性研究ｆＪ１．山东大学学报：理学版，２００９，４４ （１）：１—６ ［１８】陆文伟，孔文涛，孔健，等．发酵乳杆菌Ｂ一半乳糖苷酶转糖基活性 研究［Ｊ］．山东大学学报：理学版，２００８，４３（７）：８３—８７ ［１９］许牡丹，张俊涛，范金波，等．固定化乳糖酶水解乳清粉合成低聚 半乳糖的研究『Ｊ］．食品科技，２００６（１）：１２２～１２５ ［２Ｏ］李正义，肖敏，卢丽丽，等．转糖基ｐ一半乳糖苷酶生产含低聚半乳 糖的低乳糖牛奶［Ｊ】．食品科学，２００７，２５（５）：２４１—２４４ 【２１］吴吴，丁鼎，杨思行．高效薄层色谱法分析低聚半乳糖及其衍生物 【Ｊ１．中国乳品工业，２００１，２９（２）：２５—２８ ［２２］刘建福．脆壁克鲁维酵母（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）ＬＦＳ一８６１ ｌｐ—Ｄ一 半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖［Ｄ】＿无锡：江南大学，２００４ ｆ２３］刘建福，陈庆森，王璋．Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ ｐ一半乳糖苷酶催化合成低聚半 乳糖的组成分析【Ｊ］．食品发酵工业，２００５，３１（１１）：１０９—１１１ 【２４］Ｂａｒｒｏｓｏ Ｂｅｇｏｎａ，Ｄｉｊｋｓｔｒａ Ｒｅｎｅ，Ｇｅｅｒｔｓ Ｍａｒｌｉｅｋｅ，ｅｔ ａ１．Ｏｎ－ｌｉｎｅ ｈｉｇｈ—ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ／ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｉｒｃ ｃｈａｒ－ ａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｔｉｖｅ ｏｌｉｇｏｓａｅｅｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｒａｐｉｄ Ｃｏｍｍｕｎ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ，２００２，１６（１３）：ｌ３２０～ｌ３２９ 【２５】罗倩，王晓丹，王卿卿，等．低聚半乳糖混合物的分离与检测［Ｊ］．食 品工业科技，２０１０（１０）：３９２—３９５ ［２６】吴红京，唐根源，李志达，等．高效液相色谱测定麦芽低聚糖的组 分［Ｊ】．色谱，１９９４（４）：２８９—２９０ ［２７】李静芳，彭美纯．高效液相色谱法测定低聚半乳糖的含量［Ｊ】．食品 科技，２０１２（７）：２７９—２８２ ［２８］Ｓｌｅｇｔｅ Ｊ．ＡＯＡＣ Ｏｆｆｉｃｉｌａ Ｍｅｔｈｏｄ ４５．４．１２—２ｏｏ１．０２，Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｄｅｓ（ＴＧＯＳ１ ｉｎ Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｆ００ｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ 【 Ａｍｅｒｉｃａｎ：Ｊ ＡＯＡＣ ｉｎｔｅｒｎ，２００２ ［２９】Ｂｒｕｇｇｎｋ Ｃ，Ｍａｕｒｅｒ Ｒ，Ｈｅｒｒｍａｎｎ Ｈ，ｅｔ １ａ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ｂｙ ａｎｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ ａｎｄ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ｃｈｒｏ－ ｍａｔｏｇｒ Ａ，２００５，１０８５（１）：１０４－１０９ 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