秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对7种常用抗球虫药的耐药性

JournalofNorthwestA&FUniversity(Nat.Sci.Ed.)Vol.36No.7

Jul.2008

秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对7种常用

抗球虫药的耐药性

*

张香斋,张艳英,贾青辉,李蕴玉,李佩国

(河北科技师范学院动物科学系,河北秦皇岛066600)

[摘󰀁要]󰀁󰀁目的󰀁研究秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对克球粉、氨丙啉、马杜霉素、瑞冠球、金三特、球敌和尼卡巴嗪7种抗球虫药的耐药性。󰀁方法󰀁试验设7个感染药物组、1个感染球虫卵囊不给药组(阳性组)和1个未感染球虫卵囊不给药组(阴性组),采用最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)综合评定秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对以上7种抗球虫药物的抗药性。󰀁结果󰀁秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对7种抗球虫药物均产生不同程度的抗药性,其中对马杜霉素、尼卡巴嗪和氨丙啉呈现轻度抗药,对克球粉、瑞冠球和金三特呈现中度抗药,对球敌呈现完全抗药性。󰀁结论󰀁目前在秦皇岛地区可合理使用马杜霉素、尼卡巴嗪和氨丙啉,对克球粉、瑞冠球和金三特应慎用,对球敌应减少或暂停使用。

[关键词]󰀁柔嫩艾美耳球虫;抗球虫药;耐药性;鸡球虫病[中图分类号]󰀁S858.312.72+3

[文献标识码]󰀁A

[文章编号]󰀁1671󰀁9387(2008)07󰀁0014󰀁05

StudiesondrugresistanceofEimeriatenellaQinhuangdaostrain

tosevenanticoccidialdrugs

ZHANGXiang󰀁zhai,ZHANGYan󰀁ying,JIAQing󰀁hui,LIYun󰀁yu,LIPei󰀁guo

(DepartmantofAnimalScience,HebeiNormalUniversityofScience&Technology,Qinhuangdao,Hebei066600,China)

Abstract:󰀁Objective󰀁ThedrugresistancesofEimeriatenellaQinhuangdaostraintosevenanticoccid󰀁ialdrugssuchasKeqiufen,Amprolium,Maduramicin,Ruiguanqiu,Jinsante,QiudiandNicarbazinweretest󰀁ed.󰀁Method󰀁Theexperimentcontained7medicatedgroups,oneinfectedandnon󰀁medicatedgroup(positivegroup)andonenon󰀁infectedandnon󰀁medicatedgroup(negativegroup).Basedonthecriteriaofthepercent󰀁ageofoptimumanticoccidialactivity(POAA),reductionoflesionscores(RLS),relativeoocystproduction(ROP)andanticoccidialindex(ACI),thedrugresistancesofEimeriatenellaQinhuangdaostrainwerede󰀁tected.󰀁Result󰀁Theresultsrevealedthat,thestrainswerelightresistanttoMaduramicin,NicarbazinandAmprolium,middleresistanttokeqiufen,RuiguanqiuandJinsante,butstrongresistanttoQiudi.󰀁Conclu󰀁sion󰀁ItisconcludedthatMaduramicin,NicarbazinandAmproliumcanbeusedinQinhuangdaoeffectively,keqiufen,RuiguanqiuandJinsanteshouldbeusedprudently,Qiudishouldbereducedorpausedtouseatpresent

Keywords:Eimeriatenella;coccidiostat;drugresistance;chickenEimeriatenella󰀁󰀁鸡球虫病是严重危害养鸡业发展的一种寄生虫

*

病,呈全球性流行。该病死亡率达20%~30%,严

[收稿日期]󰀁2007󰀁08󰀁28

[基金项目]󰀁河北省自然科学基金项目(C2006000554)

[作者简介]󰀁张香斋(1970-),女,河北沧州人,副教授,硕士,主要从事动物生理及动物寄生虫病防治研究。

Zhangxiangzhai@163.com

第7期张香斋等:秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对7种常用抗球虫药的耐药性

15

重时高达80%,给养鸡业造成巨大的经济损失。自20世纪40年代以来,一直使用有效药物预防球虫病。目前,虽有球虫疫苗应用于养鸡生产,但仍然存在诸多缺点,所以控制鸡球虫病的最有效方法仍是药物预防。由于球虫抗药物的普遍使用,无法避免球虫抗药性的产生,如刘群等[1]、韩谦等[2]、黄兵等[3]、赵其平等[4]和汪明等[5]分别调查了山东省潍坊与诸城、上海、北京和广东清远等地鸡球虫的抗药性,顾有方等[6]比较了柔嫩艾美耳球虫南京株、扬州株、宣城株和蒙城株对地克珠利、马杜霉素、氯羟吡啶的抗药性,结果均表明鸡球虫抗药性在我国已成为一个非常严重的问题,由于我国地域的差别,用药习惯的不同,各地的抗药谱也不尽相同,为此,本试验监测秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对7种抗球虫药的抗药性,旨在为指导养鸡生产、合理选择抗球虫药物提供科学依据。

号,根据体重离散度随机分成9组,每组40只,分别为克球粉组(0.5g/kg),马杜霉素组(0.5g/kg),尼卡巴嗪组(0.5g/kg),氨丙啉组(0.6g/L),瑞冠球组(0.33g/L),金三特组(1.0g/L),球敌组(0.2mL/L),感染球虫卵囊不给药组(阳性组)和未感染球虫卵囊不给药组(阴性组)。除阴性组外,其他各组鸡在14日龄经口接种秦皇岛株孢子化柔嫩艾美耳球虫卵囊,剂量为5.0万/只。各用药组于接种当天给药。感染后每天检查鸡的精神、食欲、粪便变化。于感染后第9天逐只称重后,剖杀,按Johnson等的方法做盲肠病变记分。按角田清计算盲肠内容物克卵囊数(OPG)。1.3󰀁抗药性评定指标

选用最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)4项指标对抗药性进行综合判定[3󰀁4]。

POAA=[(感染用药组GSR-阳性组GSR)󰀁(阴性组GSR-阳性组GSR)]󰀁100%,其中,GSR=末重󰀁始重。POAA>50%,判为阴性;POAA󰀁50%,判为阳性。

RLS=[(阳性组病变记分-感染用药组病变记分)󰀁阳性组病变记分]󰀁100%。RLS󰀁50%,判为阴性;RLS<50%,判为阳性。

ROP=(感染用药组卵囊数󰀁阳性组卵囊数)󰀁100%。ROP<15%,判为阴性;ROP󰀁15%,判为阳性。

ACI=(存活率+相对增重率)󰀁100-(病变值+卵囊值)。ACI󰀁160,判为阴性;ACI<160,判为阳性。

其中:存活率(%)=存活只数󰀁开始鸡数󰀁100%;相对增重率(%)=阳性组或感染用药组增重率󰀁阴性组增重率󰀁100%;病变值=每组平均病变记分󰀁10;卵囊值:当阴性组或感染用药组OPG值与阳性组OPG值的比值分别为小于1%、1%~25%、26%~50%、51%~75%和76%~100%时,卵囊值分别为0,5,10,20和40。

1.4󰀁抗药性评定标准

按POAA、RLS、ROP、ACI4项指标中出现阳性指标数量确定抗药程度[9]。

1.4.1󰀁无抗药性󰀁POAA、RLS、ROP、ACI中4项指标中均为阴性。

1.4.2󰀁轻度抗药󰀁POAA、RLS、ROP、ACI中4项指标中有3项指标为阴性。

1.4.3󰀁中度抗药󰀁POAA、RLS、ROP、ACI中4项[7]

[8]

的方法,

1󰀁材料与方法

1.1󰀁材󰀁料

1.1.1󰀁试验动物󰀁1日龄海兰褐蛋公雏1200只,购自河北科技师范学院实习牧场,在严格消毒的环境下饲养,喂以无抗球虫药的全价饲料,至14日龄对试验鸡粪便球虫卵囊检查,阴性鸡备用。

1.1.2󰀁感染用柔嫩艾美耳球虫卵囊󰀁秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫,从河北秦皇岛地区某鸡场采集因盲肠球虫病死亡的鸡盲肠内容物,经分离纯化后,依据球虫在机体内的寄生部位、病变特征、形态特点等进行鉴别为纯种柔嫩艾美耳球虫。口服接种无球虫感染的健康鸡纯化传代,扩增卵囊,置于25g/L重铬酸钾溶液的平皿中,于28󰀁温箱通气培养至孢子化,供试验用。

1.1.3󰀁试验药物󰀁克球粉(有效成分:氯羟吡啶),江苏天成保健品有限公司,批号:060211󰀁2;氨丙啉,广东省农科集团前沿动物保健有限公司,批号:20050501;马杜霉素,齐鲁动物保健品厂生产,批号:20050926;瑞冠球(有效成分:磺胺氯吡嗪钠),济南百鸣生物制药有限公司,批号:2006022601;金三特(有效成分:磺胺喹噁啉钠),保定市科恒动物药业有限公司,批号:20060601;球敌(有效成分:地克珠利),齐鲁动物保健品厂生产,批号:0511007;尼卡巴嗪,山东鲁西兽药股份有限公司生产,批号:20050601。1.2󰀁试验设计

将试验用雏鸡于14日龄早晨逐只空腹称重,编16

西北农林科技大学学报(自然科学版)第36卷

指标中有2项指标为阳性。1.4.4󰀁完全抗药󰀁POAA、RLS、ROP、ACI中4项指标中有3项及以上指标为阳性。

POAA值均大于50%,为阴性;在增重效果方面,克

球粉组的增重效果最好,为85.79g/只;其次是马杜霉素组,达84.92g/只,均极显著高于尼卡巴嗪组、氨丙啉组和球敌组(P<0.01);尼卡巴嗪组的增重效果最差,仅为61.22g/只,极显著低于其他各用药组(P<0.01)。

2󰀁结果与分析

2.1󰀁7种药物对鸡抗球虫活性的影响

由表1可以看出,所选的7种抗球虫药物组的

表1󰀁各组鸡增重及最适抗球虫活性的百分率(POAA)

Table1󰀁Weightgainandpercentageofoptimumanticoccidialactivity(POAA)indifferentgroups

组别Group

克球粉Keqiufen马杜霉素Maduramicin尼卡巴嗪Nicarbazin氨丙啉Amprolium瑞冠球Ruiguanqiu金三特Jinsante球敌Qiudi

阴性组Negativegroup阳性组Positivegroup

始重/(g󰀁只-1)Startweight105.86󰀁6.89106.39󰀁7.10106.18󰀁7.29105.34󰀁6.36106.34󰀁7.15106.12󰀁7.50106.43󰀁6.96106.27󰀁7.58105.06󰀁6.76

末重/(g󰀁只-1)Endweight191.65󰀁14.14191.30󰀁10.70167.40󰀁8.55179.71󰀁19.45187.45󰀁13.13190.18󰀁11.28179.62󰀁17.61201.57󰀁14.89129.35󰀁24.79

增重/(g󰀁只-1)Weightgain85.79󰀁10.18bAB84.92󰀁6.41bAB61.22󰀁6.80D74.37󰀁15.08cC81.11󰀁9.35bcBC84.06󰀁8.31bBC73.19󰀁13.35cC95.30󰀁8.66aA23.92󰀁27.33E

GSR1.8101.7981.5771.7061.7651.7921.6891.8971.231

POAA/%85.4482.4351.9571.3280.1884.8368.77100

0

󰀁󰀁注:同列数据后标不同大写字母者表示差异极显著(P<0.01),标不同小写字母者表示差异显著(P<0.05)。

Note:Valuesfollowedbydifferentcapitallettersinthesamecolumnareextremelysignificantlydifferent(P<0.01),Valuesfollowedbydif󰀁

ferentsmalllettersaresignificantlydifferent(P<0.05).

2.2󰀁7种药物对鸡肠道病变的影响

由表2可见,马杜霉素、尼卡巴嗪、氨丙啉和瑞冠球组的RLS分别为71.75%,68.64%,68.64%和56.21%,均大于50%,呈阴性,可见在减轻肠道病

变方面以马杜霉素最优;克球粉、金三特和球敌组的RLS分别为49.51%,47.46%和43.50%,均小于50%,呈阳性。

表2󰀁各组鸡的盲肠病变记分及病变记分减少率

Table2󰀁Cecallesionscoresandreductionoflesionscores(RLS)indifferentgroups

组别

Group

克球粉Keqiufen

马杜霉素Maduramicin尼卡巴嗪Nicarbazin氨丙啉Amprolium瑞冠球Ruiguanqiu

盲肠病变记分Cecallesionscore

1.801.01.111.111.55

RLS/%49.1571.7568.6468.6456.21

组别Group

金三特Jinsante球敌Qiudi

阴性组Negativegroup阳性组Positivegroup

盲肠病变记分Cecallesionscore

1.862.003.54

RLS/%47.4643.500100

2.3󰀁7种药物对鸡抑制球虫卵囊产量的影响

由表3可以看出,尼卡巴嗪组的ROP值为0,而其他药物的ROP值均大于15%,表明除尼卡巴

嗪外,秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对其他几种药物均有抗药性。

表3󰀁各组鸡的盲肠内容物克卵囊数(OPG)及相对卵囊产量(ROP)

Table3󰀁Oocystspergramfeces(OPG)andrelativeoocystsproduction(ROP)indifferentgroups

组别Group

克球粉Keqiufen马杜霉素Maduramicin尼卡巴嗪Nicarbazin氨丙啉Amprolium瑞冠球Ruiguanqiu

OPG/(󰀁106󰀁只-1)

1.0861.19700.7621.844

ROP/%33.9837.45023.8457.70

组别Group

金三特Jinsante球敌Qiudi

阴性组Negativegroup阳性组Positivegroup

OPG/(󰀁106󰀁只-1)

1.8861.74103.196

ROP/%59.0154.470100

2.4󰀁7种药物对抗球虫指数(ACI)的影响

由表4可见,马杜霉素组的ACI值最高,达到177.33;克球粉组、金三特组和氨丙啉组的ACI值

分别为171.02,168.61和165.93,均大于160,呈阴性,表明秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对其无抗药性。尼卡巴嗪、瑞冠球和球敌组的ACI值分别为

第7期张香斋等:秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对7种常用抗球虫药的耐药性

17

153.14,159.61和146.72,均小于160,呈阳性,表明秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对其有抗药性。

表4󰀁7种药物的抗球虫指数(ACI)

Table4󰀁Anticoccidialindex(ACI)indifferentgroups

组别Group

克球粉Keqiufen马杜霉素Maduramicin尼卡巴嗪Nicarbazin氨丙啉Amprolium瑞冠球Ruiguanqiu金三特Jinsante球敌Qiudi

阴性组Negativegroup阳性组Positivegroup

相对增重率/%Relativegainrate

90.0288.3364.2478.0385.1188.2176.7210025.10

存活率/%Survivalrate

10010010010010010010010085

病变值Lesionvalue

181011.111.115.518.620035.4

卵囊值Oocystvalue

110110110020

ACI171.02177.33153.14165.93159.61168.61146.7220054.7

2.5󰀁球虫对7种药物抗药性的综合判定

由表5可以看出,根据POAA、RLS、ROP和ACI4项指标综合判断,秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对所选的7种抗球虫药物均产生不同程度的抗药

性,其中对球敌呈现完全抗药性,对克球粉、瑞冠球和金三特呈现中度抗药,对马杜霉素、尼卡巴嗪和氨丙啉则呈现轻度抗药。

表5󰀁秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对7种药物抗药性的综合判定结果

Table5󰀁Drug󰀁resistanceoftoEimeriatenellaisolatedfromQinhuangdaotosevenanticoccidiosisdrugs

组别Group克球粉Keqiufen马杜霉素Maduramicin尼卡巴嗪Nicarbazin氨丙啉Amprolium瑞冠球Ruiguanqiu金三特Jinsante球敌Qiudi

POAA/%87.14(-)85.48(-)52.04(-)70.80(-)80.03(-)84.72(-)68.23(-)

RLS/%49.15(+)71.75(-)68.64(-)68.64(-)56.21(-)47.46(+)43.50(+)

ROP/%33.98(+)37.45(+)0(-)3.84(+)57.70(+)59.01(+)54.47(+)

ACI171.02(-)177.33(-)153.14(+)165.93(-)159.61(+)168.61(-)146.72(+)

结果Results

中度抗药middleresistant轻度抗药lightresistant轻度抗药lightresistant轻度抗药lightresistant中度抗药middleresistant中度抗药middleresistant完全抗药completeresistant

3󰀁讨󰀁论

氨丙啉、尼卡巴嗪、金三特和瑞冠球均为磺胺类药物,可以通过阻断叶酸合成途径抑制球虫的生长发育,具有抗球虫作用。氨丙啉是国内较早生产上市的化学合成抗球虫药,该药与乙氧乙胺苯甲酯合用时效果最佳。据黄兵[3]等报道,在上海地区球虫的抗药性抽查中,有65%~80%虫株对氨丙啉产生中度以上的抗药性。尼卡巴嗪产生抗药性的速度最慢,迄今仍是一种有实际使用价值的抗球虫药,该药在华南地区应用较为普遍,主要原因是因为在华南地区鸡球虫的抗药性非常严重,多数抗球虫药物已失去应用效力[10]。据李佩国等[11]报道,柔嫩艾美耳球虫秦皇岛分离株对金三特已产生较强的抗药性。本试验根据POAA、RLS、ROP和ACI4项指标,综合评定了4种磺胺类抗球虫药对秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫的抗药性,结果表明,秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对氨丙啉和尼卡巴嗪均轻度抗药,对金三特和瑞冠球呈中度抗药性。

离子载体类抗生素是70年代以后推出的新型抗球虫药物,此类药物的作用都是通过破坏球虫细

胞膜内外的渗透平衡,使阳离子和水分大量进入球虫细胞内导致球虫肿胀而死[12],这一类药相对于一些化学合成类药物产生抗药性速度慢得多。我国在80年代末开始引用,并且很快推广应用,对鸡球虫的防治起了非常重要的作用。但由于该类药物已使用多年,所以其抗药性也较为普遍。谢明权等[13]、赵其平等

[4]

分别报道,从广东省分离的鸡球虫虫株

对几乎所有的离子载体类抗生素都具有严重的抗药性。马杜霉素是一种离子载体类抗球虫药,曾被认为其不易产生抗药性而被全国各地养殖户看好。本试验结果表明,秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对马杜霉素轻度抗药,提示该药在秦皇岛地区仍可以合理使用,但应注意与其他高效抗球虫药进行轮换或穿梭用药。

克球粉有效成分为氯羟吡啶,属于吡啶类抗球虫药物,该药初期使用时对球虫有较好的效果,但球虫对其极易产生抗药性

[14]

。本试验结果表明,秦皇

岛株柔嫩艾美耳球虫对克球粉产生中度抗药性,因此该药在秦皇岛地区应慎用。18

西北农林科技大学学报(自然科学版)第36卷

球敌有效成分为地克珠利,地克珠利是20世纪80年代研制的一种三嗪类抗球虫药物,大量试验表明,该药能有效地控制鸡球虫病的发生,并具有广谱、用量小、成本低、安全范围大等优点

[11]

[10]

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。然而李

佩国等对柔嫩艾美耳球虫秦皇岛分离株耐药性的检测结果表明,球虫对球敌呈轻度耐药性。本试验发现,球敌组的RLS、ROP、ACI3项指标均为阳性,表明秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对球敌呈完全抗药性。因此,进一步说明球虫产生抗药性很快,应引起足够重视。提示该药在秦皇岛地区不能再作为一种高效抗球虫药继续推广应用。

本试验检测了秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对7种抗球虫药物的抗药性,基本反映了该地域鸡球虫的抗药性情况,为生产上抗球虫药物的合理使用提供了重要依据。从总体上看,秦皇岛地区鸡球虫对本试验所选的7种药物均有不同程度的抗药性,结果提示养鸡者,应正确选择高效抗球虫药,建议应注意制定合理的轮换或穿梭用药方案,以延缓秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对抗球虫药物抗药性的产生。[参考文献]

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