中国美容医学２０１０年４月第１９卷第４期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ａｐｒ．２０１０．Ｖｏ１．１９．Ｎｏ，４ ６１ １ ［２８］Ｂｌａｔｚ ＭＢ，Ｓａｄａｎ Ａ，Ｋｅｒｎ Ｍ Ｒｅｓｉｎ—ｃｅｒａｍｉｃ ｂｏｎｄｉｎｇ：ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ 影响［Ｊ］．口腔医学研究，２００３，１９（６）：４３６—４３８． ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ［Ｊ］＿Ｊ Ｐｒｏｓｔｈｅｔ Ｄｅｎｔ，２００３，８９（３）：２６８—２７４． ［３５］Ｍａｔｉｎｌｉｎｎａ ＪＰ，Ｌａｓｓｉｌａ ＬＶ，Ｏｚｃａｎ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ｓｉｌａｎｅｓ ［２９］Ｋｏｃａｄｅｒｅｌｉ Ｉ，Ｃａｎａｙ Ｓ，Ａｋｃａ Ｋ．Ｔｅｎｓｉｌｅ ｂｏｎｄ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ｏｆ ｃｅｒａｍｉｃ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｄｅｎｔｉｓｔｒｙ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｐｒｏｓｔｈｏｄｏｎｔ， ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ ｂｒａｃｋｅｔｓ ｂｏｎｄｅｄ ｔｏ ｐｏｒｃｅｌａｉｎ ｓｕｒｆａｃｅｓ［ＪＪ．Ａｍ Ｊ Ｏｒｔｈｏｄ ２００４，１７（２）：１５５—１６４． Ｄｅｎｔｏｆａｃｉａｌ Ｏｒｔｈｏｐ，２００１，ｌ１９（６）：６１７－６２０． ［３６］Ｆｅｒｒａｒｉ Ｍ，Ｃａｇｉｄｉａｃｏ ＭＣ，Ｖｉｃｈｉ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｂｏｎｄｉｎｇ ｏｆ ａｌｌ—ｐｏｒｃｅｌａｉｎ ［３０］Ｗｈｉｔｌｏｃｋ ＢＯ，Ｅｉｃｋ ＪＤ，Ａｃｋｅｒｍａｎ ＩＬｌ，ｅｔ ａ１．Ｓｈｅａｒ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ｏｆ ｃｅｒａｍｉｃ ｃｒｏｗｎｓ：ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ［ＪＪ．Ｄｅｎｔ Ｍａｔｅｒ， ｂｒａｃｋｅｔｓ ｂｏｎｄｅｄ ｔｏ ｐｏｒｃｅｌａｉｎ［ＪＪ．Ａｍ Ｊ Ｏｒｔｈｏｄ Ｄｅｎｔｏｆａｃｉａｌ Ｏ￣ｈｏｐ， ２００１，ｌ７（２）：１５６—１６４． １９９４，１０６（４）：３５８－３６４． 【３７］Ｓｚｅｐ ｓ，Ｓｃｈｍｉｄ Ｃ，Ｗｅｉｇｌ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｉｌｉｃｏｎｅ ｄｉｓｃｌｏｓｉｎｇ ［３ １］Ｌｕｏ ＸＰ，Ｓｉｌｉｋａｓ Ｎ，Ａｌｌａｆ Ｍ，ｅｔ ａｌ ＡＦＭ ａｎｄ ＳＥＭ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｏｎ ｔｈｅ ｓｈｅａｒ ｂｏｎｄ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ｏｆｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｃｅｍｅｎｔｓ ｔｏ ｏｆ ｅｔｃｈｉｎｇ ｏｎ ＩＰＳ—Ｅｍｐｒｅｓｓ２ Ｄｅｎｔａｌ ｃｅｒａｍｉｃｓ［Ｊ］ｌＳｕｒｆａｃｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ｃｅｒａｍｉｃ ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｊ Ｐｒｏｓｔｈｅｔ Ｄｅｎｔ，２００３，８９（１）：６０－６５ ２００１：３８８～３９４． ［３８］Ｆｉｌｈｏ ＡＭ，Ｖｉｅｉｒａ ＬＣ，Ａｒａｕｊｏ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｅｒｍｉｃ ［３２］Ｙｉｐ ＫＨ，Ｓｍａｌｅｓ ＲＪ，Ｋａｉｄｏｎｉｓ ＪＡ．Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｗｅａｒ ｏｆ ｔｅｅｔｈ ａｎｄ ｓｕｒｆａｃｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｏｎ ｒｅｓｉｎ ｍｉｃｒｏｔｅｎｓｉｌｅ ｂｏｎｄ ｓｔｒｅｎ【ｔｇｈ［Ｊ］． ｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ：ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ＬＪＪ．Ｉｎｔ Ｊ Ｐｒｏｓｔｈｏｄｏｎｔ， ＪＰｒｏｓｔｈｏｄｏｎｔ，２００４，１３（１）：２８—３５． ２００４，ｌ７（３）：３５０．３５６． ［３９］Ａｎｄｒｅａ￣ａ Ｆｉｌｈｏ ＯＤ，Ｂｏｔｔｉｎｏ ＭＡ，Ｎｉｓｈｉｏｋａ ＲＳ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ［３３］Ｋａｔｏ Ｈ，Ｍａｔｓｕｍｕｒａ Ｈ，Ｉｄｅ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｂｏｎｄｉｎｇ ｏｆ ａｄｈｅｓｉｖｅ ｔｈｅｒｍｏｃｙｃｌｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｂｏｎｄ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ｏｆ ａ ｇｌａｓｓ—ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅｄ ｃｅｒａｍｉｃ ｒｅｓｉｎ ｔｏ ｓｉｎｔｅｒｅｄ ｐｏｒｃｅｌａｉｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｉｄ ｅｔｃｈｉｎｇ ａｎｄ ａｎｄ ａ ｒｅｓｉｎ ｌｕｔｉｎｇ ｃｅｍｅｎｔ［Ｊ１．Ｊ Ａｐｐｌ Ｏｒａｌ Ｓｃｉ，２００３，１ １（１）：６１—６７． ａ ｔｗｏ—ｌｉｑｕｉｄ ｓｉｌａｎｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｒ ＥＪ］．Ｊ Ｏｒａｌ Ｒｅｈａｂｉｌ，２００１，２８（１）： ｌ０２—１Ｏ８． ［收稿日期］２０１０—０２—２６ 【修回日期］２０１０—０４—０６ ［３４］王迎捷，陈吉华，赵桂文，等．不同偶联剂对瓷和树脂化学黏接的 编辑／李阳利 软骨组织工程研究进展 Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｔｉｓｓｕｅ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ 姜疆 孙杨 综述，郭树忠 审校 （１．第Ｑ－Ｖ－医大学西京医院全军整形外科研究所陕西西安７１ ００３２；２．兰州军区机关门诊部） 软骨组织工程的基本原理是从机体获取少量活组织，将 细胞来源的种子细胞不存在免疫排斥反应，有利于临床应 功能细胞从组织中分离出来，并在体外进行培养、扩增，然后 用。但自体软骨细胞体外培养传代会发生“去分 与可降解吸收的支架材料按一定比例混合，植入病损部位， （ｄｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）化”现象 ，丧失增殖和分泌基质的 生物材料在体内逐渐降解和吸收，植入细胞在体内增殖和分 能力，生长缓慢，不能达到组织工程软骨的需要数量。且取自 泌ＥＣＭ，最后形成所需的组织或器官，以达到创伤修复和功能 患者来源有限、对个体造成二次创伤、增加了手术费用和患 重建的目的口］。目前软骨组织工程的研究内容主要集中在以 者痛苦等，这严重了其作为种子细胞的应用。 下几个方面：①种子细胞；②支架材料；③细胞因子；④基因 １．１．２异种和同种异体软骨细胞：异种软骨细胞来源充足， 修饰。本文就软骨组织工程的研究现状及其进展作一综述。 短时间可大量获取、增殖，但植入受体后免疫排斥反应严重， 故应用较少。虽然该类种子细胞也存在免疫反应，但随着移 １软骨种子细胞 植时间推移其免疫反应逐渐减弱，并且随着免疫抑制剂研究 理想的软骨种子细胞应具有以下特点：①取材方便，对 的快速发展，较严重的免疫反应己基本消除。然而，该软骨细 机体创伤小：②植入受体后对机体免疫排斥反应小；③在体 胞来源于其他健康个体，在获取的同时又对其他个体造成创伤， 外培养时有较强的增殖能力；④能稳定保持软骨细胞表型。 增加二次手术费用，故也不是最理想的软骨种子细胞来源。 １．１软骨种子细胞来源：目前，报道的软骨组织工程种子细胞 １．１｜３干细胞在体外培养时可无限增殖并保持其多分 主要包括：自体软骨细胞、异体软骨细胞、基因修饰的永生化 化潜能，且干细胞源性的软骨细胞具有获得稳定表型的优点 。 软骨细胞及各种来源的干细胞。 目前体外证实具有软骨分化潜能的干细胞包括：①骨髓来源 １．１．１白体软骨细胞：软骨细胞是终末分化细胞，可以合成 的问充质干细胞；②脂肪来源的间充质干细胞；③胚胎干细 ＥＣＭ，如ＩＩ型胶原和蛋白多糖聚合物等，是组织工程软骨研究 胞；④其他来源的问充质干细胞。 最早，也最常采用的软骨种子细胞，通过胶原酶直接消化关 １．１．３．１骨髓来源的问充质干细胞：１９７６年，Ｆｒｉｅｄｅｎｓｔｅｉｎ［５３将 节软骨、骺板软骨、肋软骨和耳软骨组织等获得 ］。自体软骨 利用骨髓贴壁培养的方法分离的具有多向分化的细胞命名 鱼 中国美容医学２０１０年４月第ｌ９卷第４期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ａｐｒ．２０１０．Ｖｏ１．１９．Ｎｏ．４ 为骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）。骨髓可取自骨干、髂骨、肋骨，来源相对充足， 肌肉源性基质干细胞诱导成了成熟的软骨；Ｆｕｃｈｓ等［１２ 以羊 脐血干细胞构建出了与天然软骨具有相似组织学特性的三 获取方法简便易行。ＢＭＳＣｓ在诱导因子作用下可向软骨细胞 分化，已被公认有可能成为软骨组织工程理想的种子细胞来 维软骨。Ｗａｋｉ—ｔａｍ等［１３１培养兔胫骨膜细胞，修复兔股骨髁全 层软骨缺损，２４周时软骨下骨完全形成，新生软骨组织无骨 化现象。目前，国内尚有学者对外周血来源的干细胞在软骨 方面的分化加以研究。 ｌ＿１．３．６ ＢＭＳＣｓ与软骨细胞共培养：基于ＢＭＳＣｓ和软骨细胞 均不能完全满足组织工程对种子细胞的要求，那么将两种细 胞优势互补，进行共培养来优化和扩大软骨组织工程的种子 细胞源就成为可供选择的方式。周广东等［１４１将软骨细胞与 源。目前，用于ＢＭＳＣｓ分离的方法主要有：贴壁筛选法、密度 梯度离心法、细胞表面分子标记分选法和细胞筛选法，以Ｉ 型胶原凝胶为载体材料复合骨髓ＭＳＣｓ修复全骺软骨缺损， 证实正常关节软骨形成。活体实验表明，诱导分化的软骨细 胞植入体内可获得软骨缺损的修复［６１。 １．１．３．２胚胎干细胞（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌＳ，ＥＳＣｓ）：主 要来源于受精卵发育成的早期胚胎，也可从体细胞核移 ＢＭＳＣｓ混合培养，能诱导ＢＭＳＣｓ在体内非软骨形成部位向软 骨分化，并形成软骨组织，整个过程无需另外添加细胞因子。 植发育的胚胎获得。是胚胎发育早期胚泡内细胞团中未 分化的细胞，具有以下特点：①具有受精卵的某些特性， 可多向分化、无限增殖，可以分化成胎儿和成体内各种类 因此，ＢＭＳＣｓ和软骨细胞共培养对优化和扩大种子细胞源可 能是一种实用的策略。 ２支架材料 生物支架材料不仅提供软骨细胞生长依附的空问架构、 力学需求和几何形状，更重要的是它作为细胞外基质之一， 可以协调生物活性因子和细胞之间的相互作用，增进细胞的 型的组织细胞；②可以在体外增殖并保持未分化二倍体 的状态，具有全能性和形成嵌合体动物的能力；⑧可以在 体外培养条件下建立稳定的细胞系，长期培养并保持未 分化二倍体的状态，具有全能性和形成嵌合体动物的能 力；③可以在体外培养条件下建立稳定的细胞系，长期培 养并保持高度未分化状态和发育潜能性。因此，胚胎干 细胞有望成为软骨组织工程中新的种子细胞的理想来 源。白上世纪８Ｏ年代初，有学者［７１Ｎ用早期胚胎的内细胞 团或上胚层细胞建立ＥＳＣｓ系后，Ｋｒａｍｅｒ等研究证实ＥＳＣｓ 在ＢＭＰ一２及ＢＭＰ一４作用下可分化为软骨细胞。 附着，潜在地影响细胞表面因子受体的表达和细胞的分化。 ２．１根据支架空间结构的不同，可分为二维支架和三维支 架。大量实验证明，在二维支架平面培养的条件下，软骨细胞 易受细胞接触抑制的影响，出现去分化，表现为成纤维细胞 样形态学改变，不能表达特定的软骨蛋白，如ＩＩ型胶原、氨基 葡聚糖等，而大量表达Ｉ型胶原“ 。在三维支架培养的条件 下，三维环境更近似体内微环境，软骨细胞可以再分化，表达 ＩＩ型胶原，合成ＥＣＭ。 １．１．３．３脂肪来源的问充质干细胞：２００１年，Ｚｕｋ等Ｅ １从人吸 脂术抽取的脂肪组织悬液中，第一次分离取得了多向分化干 细胞，命名为ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ １ｉｐｏａｓｐｉｒａｔｅ（ＰＬＡ）。Ｏｇａｗａ等 ］ 将脂肪干细胞传代２次后，加入软骨诱导ＤＭＥＭ培养液，应用 微球培养的方法培养４周，可以检测到ａｇｇｒｅｃａｎ和ｃｏＩ—ＩＩ、 ｃｏＩ—Ｘ等基因表达，组织学染色可以发现阿丽辛蓝（ａｌｃｉａｎ— ｂｌｕｅ）染色阳性细胞，这些都证明脂肪干细胞可以向软骨细 胞分化。因ＡＤＳＣｓ来源充足、获取方便、对培养基的要求低、 ２．２按其应用形态可分为：凝胶类、微球类、海绵类及人工高 分子聚合物支架材料。 ２．３支架根据生物材料的差异，可分为天然生物材料、人工 合成高分子材料和复合材料“ 。 ２．３．１天然生物材料：主要包括胶原、明胶、纤维蛋白、壳聚 体外扩增能力强等优点，引起了学者们的广泛关注，目前分 离常用贴壁筛选法。 １．１．３．４人脐带问充质干细胞：大量研究表明脐带间充质干 细胞具有多向分化潜能，它在体内外可以分化为骨细胞、软 骨细胞、肝细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞以及神经元细胞等。 侯克东等“ 研究发现人脐带ＭＳＣｓ具有向软骨自然分化的特 糖、琼脂、糖胺多糖（如：透明质酸、硫酸软骨素等）、藻酸 盐、蚕丝蛋白 １、几丁质、松质骨骨基质、脱细胞基质等，天然 生物支架材料来源于生物体本身，具有组织相容性较好，毒 性较小，易降解，且降解产物易被人体吸收而不产生炎症反 应等优点，所以在组织工程中作为细胞培养的支架材料具有 人工合成材料所不可比拟的优势。 点。此外脐带ＭＳＣｓ天然表达Ｓｏｘ一９和Ｃｏｌ一２Ａ１，其中Ｓｏｘ一９ 基因能够结合软骨细胞特征性的ＩＩ型胶原、ａｇｇｒｅｃａｎ蛋白 增强子基因使其活化表达，对于软骨的分化、发育、起着 重要作用，从分子水平揭示了人脐带ＭＳＣｓ具有与软骨细胞 相似的特性，表明它可能更适合于构建工程软骨组织。 ２．３．２人工合成高分子材料：人工合成高分子材料的微结 构、机械性能以及材料的降解时间等都可以预先设计和调 控，包括有机合成材料和无机合成材料。无机材料以羟基磷 灰石、磷酸三钙为代表，有机材料以聚乳酸、聚羟基乙酸、聚 羟基乙酸／聚乳酸复合物（ＰＬＧＡ）、聚己内酯、聚环氧乙烯、聚 乙烯醇、聚氧化乙烯等高分子聚合物为主。人工合成材料不 １．１．３．５其他来源的间充质干细胞：其他来源的间充质干细 胞在软骨组织工程方面的应用也被诸多学者加以研究，其他 来源的间充质干细胞在软骨组织工程方面的应用也被诸多 学者加以研究，如Ｎａｗａｔａ等Ｅｕ１用取自第１９天的胎鼠大腿的 受来源的，容易加工成形，可根据需要调整物理、化学、 生物力学和降解性能。生长因子和其他一些药物刺激因子可 以涂于支架上面以刺激细胞进行增殖和分化。但是在运用中也 通讯作者碍口树忠，第四军医大学西京医院全军整形外科研究所主任、教授、主任医师、博士生导师；Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈｕｚｈｏｎｇ＠ｆｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 中国美容医学２０１０年４月第１９卷第４期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ａｐｒ．２０１０．Ｖｏ１．１９．Ｎｏ．４ ６１３ 发现了不少缺点，如其亲水性不够，对细胞的粘附性较弱，降解 产物偏酸性可引起炎症反应等，并且有一定的免疫原性 。 ２．３．３复合材料：复合材料是目前研究的热点，即将两种或 两种以上具有互补特征的生物相容性可降解材料按一定比 例和方式组合，可设计出结构与性能优化的三维材料，以弥 补单用人工合成或天然生物材料的缺陷。复合材料的制备不 仅包括同一类生物材料的复合，还包括不同类别生物材料之 间的交叉复合。目前主要有：天然生物材料之间的复合、人工 合成高分子材料之间的复合、天然生物材料与人工合成高分 子材料之间的交叉复合。 ２．４根据支架制作的特征，可将支架分为预制支架和可注射 型支架两类。可注射型支架具有微创的优点，并能为细胞的 增殖与分化提供更为接近于天然细胞外基质的化学和物理 环境。目前可注射型支架是以水凝胶为基础，常用的有纤维 蛋白凝胶、藻酸钙凝胶、透明质酸、聚氧化乙烯酸、二甲基丙 烯、聚丙烯延胡索酸复合乙烯凝胶、聚氧化丙烯等。 ２．５纳米材料：纳米材料由于结构上的特殊性，具有一些独 特效应，如表面效应和体积效应等。它主要是支架材料制作技术 上的创新，而非新出现的物质。纳米尺寸的粗糙表面能够适度地 细胞粘附、增殖、分化和凋亡。Ｈｏｎｇ等 研究提示羟基磷灰 石（ＨＡＰ）纳米微粒的加入有助于软骨细胞在支架上的粘附和 扩增，也可提高材料的生物相容性。 ３细胞因子 对软骨种子细胞有明显调节作用的细胞因子主要有转 化生长因子一１３（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ１３， ＴＧＦ—Ｂ）、骨形态发生蛋白（ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐ ｒｏｅｔｅｉｎ，ＢＭＰ）、胰岛素样生长因子（ｉｎｓｕｌｉｎ—ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＩＧＦ）、成纤维细胞生成因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＦＧＦ）、肿瘤坏死因子（ｔｕｍｏｕｒ ｎｅｅｒｏｓ ｉ Ｓ ｆａｃｔｏｒ， ＴＮＦ）、甲状旁腺激素相关蛋白（ｔｒＦＨｒＰ）、肝细胞生长因子（ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＨＧＦ）以及近几年新发现的软 骨调节素（ｃｈｏｎｄｒｏｍｏｄｕｌ ｉｎ）等 。 ３．１转化生长因子：转化生长因子１３（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ—Ｂ，ＴＧＦ—Ｂ）是一种细胞生长和细胞外基质合成的多 功能调节器，它可以促进软骨细胞增殖，增加蛋白多糖和ＩＩ 型胶原合成。可能通过增强软骨转录因子Ｓｏｘ９的表达，促进 细胞聚集，达到软骨分化的必需条件。ＴＧＦ—Ｂ包括ＴＧＦ— 、 ＴＧＦ一１３ ２、ＴＧＦ— ３及ＴＧＦ—Ｂ ４种形式 ］。ＴＧＦ— 是诱导 ＢＭＳＣｓ向软骨细胞分化的主要细胞因子，能刺激软骨细胞分 泌蛋白聚糖和ＩＩ型胶原，并保持软骨细胞表型稳定。ＴＧＦ－Ｂ。 的生物学功能与ＴＧＦ—Ｂ。相似，对软骨和成骨分化具有调节 作用。ＴＧＦ—Ｂ 通过调节甲状旁腺激素相关蛋白的分泌，促进软 骨细胞分化成熟［２２／。ＴＧＦ Ｂ。是Ｔ促软骨形成的重要细胞因子， 它通过增强Ｓｏｘ９表达，促进蛋白聚糖和ＩＩ型胶原合成［２３３。 Ｇｏｅｓｓｌｅｒ等 报道ＴＧＦ一１３ 基因在软骨去分化过程中表 达，提示其在软骨去分化过程中发挥作用。 ３．２骨形态发生蛋白（ｈｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐ ｒｏｃｔｅｉｎ， ＢＭＰ）：骨形态发生蛋白家族成员有４０多个，其中ＢＭＰ一２、 ＢＭＰ一３、ＢＭＰ一７与软骨组织的形成和修复密切相关。ＢＭＰ可以 刺激ＭＳＣｓ向软骨细胞分化，并能较长时间地维持软骨细胞 表型 。根据序列同源性分析，可分为几个亚群，其中属于 ＢＭＰ一２／ＢＭＰ一４亚群和成骨蛋白１（ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ １， ＯＰ一１）亚群的ＢＭＰ，大多数能在体内诱导骨及软骨形成。 ３．３胰岛素样生长因子（ｉｎｓｕｌｉｎ一１ｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ， ＩＧＦ）：ＩＧＦ一１在软骨发育过程中可促进软骨基质合成，刺激增 殖，调节细胞程序性死亡，诱导软骨细胞表面标记物的表达［２６ 。 Ｌｏｎｇｏｂａｒｄｉ等［２７１发现ＩＧＦ ｌ刺激软骨形成是于 ＴＧＦ—Ｂ信号系统，本身具有强大诱导软骨分化的潜力，与 ＴＧＦ— 合用有协同效应。 ３．４血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）：血小板源性生长因子最初 被认为是纤维细胞生长的促进因子，血浆中大量存在，但细 胞浆内微量存在。现在发现还具有促进结缔组织、胶质与平 滑肌细胞的增殖等功能 ］。 ３．５成纤维细胞生成因子：由多种不同结构的相关多肽组 成，碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）是有代表性的细胞因 子，单独应用ｂＦＧＦ作用于体外培养的单层软骨细胞，可强烈 刺激软骨细胞增殖，并维持细胞表型 ］。 ３．６软骨调节素（ＣｈＭ）：软骨调节素（ｃｈｏｎｄｒｏｍｏｄｕｌｉｎ）是一 组软骨特异性生长因子，分为Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ ３种。Ｈｉｒａｋｉ等 证 实并克隆了２５ＫＤ的糖蛋白ｃｈｏｎｄｒｏｍｏｄｕｌｉｎ一１，并报道了它 的结构和生物学活性。ＣｈＭ２１在体内和体外均能够刺激软骨 细胞培养体系中软骨细胞的生长及集落形成，并抑制新生组 织血管形成的作用。 ４基因修饰 多种细胞因子有促进软骨修复的作用。通过基因重组技 术，将细胞因子基因导入软骨细胞或相关细胞，使之在病损 部位分泌生长因子并维持所需的浓度和时间，有效促进软骨 的修复，这就是基因修饰的组织工程技术（ｇｅｎｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）。与外源性给予生物因子相比，内源性诱导的生 物活性因子表达更加稳定、持久及可靠。 ４．１软骨组织工程中转染的目的基因主要有：ＴＧＦ—Ｂ因子、 胰岛素样生长因子、成纤维细胞生长因子和骨形态发生蛋白 因子、Ｓｏｘ９、ｂＦＧＦ、ＴＮＦ受体、ＩＬ—ｌ０、ＩＬ一４、ＩＬ一３等 ，对种子 细胞增殖、分化具有重要影响的生物活性因子基因。 ４．２基因转染载体：载体是基因修饰的关键，目前基因转染 载体分为病毒载体和非病毒载体两大类。病毒载体包括逆转 录病毒、腺病毒、杆状病毒等，非病毒载体包括脂质体、 ＦｕＧｅｎｅ６。 ４．３基因治疗的方法分为：直接转移技术、间接转移技术。直 接转移技术的常用手段有组织内直接注射质粒ＤＮＡ、重组病 毒载体等，主要缺点是基因表达期相对短暂，转基因效率低。 间接转移技术是从患者体内收集靶细胞，体外培养，经过体 ６１４ 中国美容医学２０１０年４月第１９卷第４期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａ１ ０ｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅ由ｃｉｎｅ．ＡＤｒ．２０１０．Ｖｏ１．１９．Ｎ０．４ 外基因转染后，再重新用于患者体内，可以避免病毒载体的 危害，但操作较复杂，需具备良好的组织细胞培养技术和再 植入技术 ］。 ［参考文献］ ［１］ｔｉＥｌ￣．再生医学．机遇与挑战［Ｊ］．中华创伤杂志，２００６，２２（１）：ｌ一４． ［２］陈书军，计宁综．软骨组织工程种子细胞研究进展ｆＪ］．实用医学杂 志．２００６．２２（６）：７２４—７２６． ［３］Ｓａａｄｅｈ ＰＢ，Ｂｒｅｎｔ Ｂ，Ｍｅｈｒａｒａ ＢＪ，ｅｔ ａ１．Ｈｕｍａｎ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ： ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｐｌａｓｔ Ｓｕｒｇ．１９９９．４２（５）：５０９—５ ｌ３． ［４］Ｈｅｇｅｒｔ Ｃ，Ｋｒ Ｊ，Ｈａｒｇｕｓ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ ｏｆ ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｍｏｕｓｅ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］ｌＪ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ， ２００２，１ １５（２３）：４６１７－４６２８． ［５］Ｆｒｉｅｄｅｎｓｔｅｉｎ ＡＪ．Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｍｅｃｈａｎｏｃｙｔｅｓ【ＪＪ．Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｃｙｔｅｌ， １ ９７６，４７：３２７—３５９． ［６］粱丽玲，杨庭树．骨髓间充质干细胞研究进展［Ｊ］．中国误诊学杂志， ２００６，６（６）：１０２６－１０２８． ［７］Ｅｖａｎｓ ＭＪ，Ｋａｕｆｍａｎ ＭＨ．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｍｏｕｓｅ ｅｍｂｒｙｏｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９８ｌ，２９２（５８ｌ９）：１５４－１５６． ［８］Ｚｕｋｐａ，Ｚｈｕ Ｍ，Ｍｉｃｕｎｏ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｍｕｌｔｉｌｉｎｅａｇｅ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｃｅｌｌ－ｂａｓｅｄ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ［Ｊ］．Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇ，２００１，７（２）： ２１１ ２２８． ［９］Ｏｇａｗａ Ｒ，Ｍｉｚｕｎｏ Ｈ，Ｗａｔａｎａｂｅ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｃｈｏｎｄｒｏｇｅｎｉｃ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｂｙ ａｄｉｐｏｓｅ—ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｅｎ ｃｅｌｌｓ ｈａｒｖｅｓｔｅｄ ｆｒｏｍ ＧＦＰ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ［Ｊ］ｌＢｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ，２００４，３ ｌ ３（４）： ８７１—８７４． ［１０］Ｈｏｕ Ｋｅ—ｄｏｎｇ，Ｘｕ Ｗｅｎ－ｊｉｎｇ，Ｚｈａｎｇ Ｌｉ，ｅｔ ａ１．Ｔｏ ｓｕｔｄｙ ｃｈｏｎｄｒｏｇｅｎｉｃ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ Ｗｈａｒｔｏｎ ｉｅｌｌｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｊ Ｏｒｔｈｏｐａｅｄ，２００７，２７（１２）：９３０—９３５． ［】】］Ｎａｗａｔａ Ｍ，Ｗａｋｉｔａｎｉ Ｓ，Ｎａｋａｙａ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｕｓｅ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ２ ａｎｄ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｃｈａｍｂｅｒｓ ｔｏ ｅｎｇｉｎｅｅｒ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｔｉｓｓｕｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｅｐａｉｒ ｏｆ ｄｅｆｅｃｔｓ ｉｎ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｔｉｌａｇｅ［Ｊ】．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ，２００５，５２ （１）：１５５—１６３． ［１２］Ｆｕｃｈｓ ＪＲ，Ｈａｎｎｏｕｃｈｅ Ｄ，Ｔｅｒａｄａ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｆｒｏｍ ｏｖｉｎｅ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｐｒｏｇｅｎ—ｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ】．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ，２００５，２３（７）：９５８—９６４． ［１３］Ｗａｋｉｔａｎｉ Ｓ，Ｇｏｔｏ Ｔ，Ｐｍｅｄａ ＳＪ，ｅｔ ａ１．Ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ａｄｕｌｔ ｒａｂｂｉｔｓ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ［Ｊ］－Ｊ Ｂｏｎｅ Ｊｏｉｎｔ Ｓｕｒｇ （Ａｍ），２００４，７６（３）：５７９—５９２． ［１４］廿口，刘霞，周广东，等．软骨细胞与骨髓基质细胞构建软骨的体内 评价【ＪＪ．中华医学杂志，２００７，８７（２７）：１９２９—１９３３． ［１５】林绵辉，彭程基因强化软骨组织工程研究进展［Ｊ］．国际骨科学杂 志，２００７，２８（１）：５８—６２． 【１ ６ＪＢｒａｄｈａｍ ＤＭ，Ｈｏｒｔｏｎ ＷＥ．Ｉｎ ｖｉｖｏ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｍｏｄｕｌａｔｅｄ ａａｉｃｕｌａｒ ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ［Ｊ１．Ｃｌｉｎ Ｏｎｈｏｐ，１９９８，３５２： ２３９—２４９． ［１７］Ｗａｎｇ Ｙ，Ｂｌａｓｉｏ／ｉ ＤＪ，Ｋｉｍ ＨＪ，ｅｔ ａ１．Ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ｓｉｌｋ ｓｃａｆｆｏｌｄｓ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ［Ｊ】．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ， ２００６，２７（２５）：４４３４—４４４２． ［１８］郭忠鹏，蒋电明．新型组织工程软骨支架材料及其构建技术的改 进［Ｊ］．中国组织工程研究与临床康复，２００８，１２（３６）：７０７６—７０８０． ［１９］Ｈｏｎｇ ｚ，Ｚｈａｎｇ Ｐ，Ｈｅ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｎａｎｏ—ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｏｆｐｏｌｙ（１－／ａｃｔｉｄｅ）ａｎｄ ｓｕｒｆａｃｅ ｇｒａｆｔｅｄ ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ：Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］＿Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２００５，２６（３２）：６２９６—６３０４． ［２０１何劫，赵建宁．软骨组织工程中细胞因子功能的研究进展［Ｊ］．中国 骨伤杂志，２００７，２０（１２）：８７２—８７５． ［２１］Ｆｕｒｕｍａｔｓｕ Ｔ，Ｔｓｕｄａ Ｍ，Ｔａｎｉｑｕｃｈｉ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｓｍａｄ３ ｉｎｄｕｃｅｓ ｃｈｏｎｄｒｏ—ｇｅｎｅｓｉｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＯＸ９ ｖｉａ ＣＲＥＢ—ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ／ｐ３００ ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ［Ｊ］ｌＪ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００５，２８０（９）：８３４３—８３５０． ［２２］Ａｌｖａｒｅｚ Ｊ，Ｚｏｈｎ Ｐ，Ｚｅｎｇ Ｘ，ｅｔ ａ１．ＴＧＦ ｂｅｔａ ２ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｅｄｇｅｈｏｇ ｏｎ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ＰＴＨｒＰ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］． Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００２，１２９（８）：１９Ｉ３－１９２４． 【２３】许澍洽，许扬滨．ＢＭＳＣｓ构建组织工程软骨的研究进展［Ｊ］．中国 修复重建外科杂志，２００８，２２（２）：１６３—１６６． ［２４］Ｇｏｅｓｓｌｅｒ ＵＲ，Ｂｕｇｅｒｔ Ｐ，Ｂｉｅｂａｃｋ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ—ｖｉｔｒｏ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＧＦｂｅｔａ・－ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ－－ｍｅｍｂｅｒｓ ｄｕｒｉｎｇ ｃｈｏｎｄｒｏｇｅｎｉｃ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆｍｅｓｅｎｃｈ—ｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ｄｅｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｌｅｔｔ，２００５，１０（２）： ３４５—３６２． ［２５］Ｇｉｒｏｔｔｏ Ｄ，Ｕｒｂａｎｉ ｓ，Ｂｒｕｎ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｔｉｓｓｕｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ ｇｒｏｗｎ ｏｎ ｔｈｒｅｅ—ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｓｃａｆｆｏｌｄｓ ［ＪＪ＿Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２００３，２４（１９）：３２６５－３２７５． ［２６］Ｓａｘｅｒ ＲＡ，Ｂｅｎｔ ＳＪ，Ｂｒｏｗｅｒ－Ｔｏｌａｎｄ ＢＤ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－Ｉ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ ｔｈｅ ｓｙｎｏｖｉｕｍ［Ｊ］．Ｊ Ｏｒｔｈｏｐ Ｒｅｓ，２００１，１９（５）：７５９—７６７． ［２７］Ｌｏｎｇｏｂａｒｄｉ Ｌ，Ｏ’Ｒｅａｒ Ｌ，Ａａｋｕｌａ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＩＧＦ—Ｉ ｉｎ ｔｈｅ ｃｈｏｎｄｒｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｒ ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ＴＧＦ—ｂｅｔａ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ， ２００６，２１（４）：６２６—６３６． 【２８］Ｌｅｅ ＳＪ．Ｙｔｏｋｉｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ［Ｊ］．Ｙｏｎｓｅｉ Ｍｅｄ Ｊ， ２０００，４１（６）：７０４—７１９． ［２９］Ｄａｖｉｄｓｏｎ Ｄ，Ｂｌａｎｃ Ａ，Ｆｉｌｉｏｎ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ（ＦＧＦ）１８ ｓｉｎｇａｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ＦＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ３ ｔｏ ｐｒｏｍｏｔｅ ｃｈｏｎｄｒｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ＪＴ，２００５，２８０：２０５０９—２０５ｌ５． ［３０］Ｈｉｒａｋｉ Ｙ，Ｔａｎａｋａ Ｈ，ｌｎｏｕｅ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｃｌａｓｓ ｏｆ Ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍａｔｉｒｘ，ｃｈｏｎｄｒｏｍｏｄｕｌｉｎ—ｌ，ｗｈｉｃｈ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｒｇｏｗｔｈ ｏｆｃｕｌｕｔｒｅｄ ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ， １９９１．１７５（３）：９７１－９７７． ［３ ｌ】Ｅｖａｎｓ ＣＨ，Ｇｈｉｖｉｚｚａｎｉ ＳＣ，Ｈｅｍｄｏｎ ＪＨ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｉｒａｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｏｒｔｈｏｐ Ｒｅｌａｔ Ｒｅｓ，２０００，３７９（１）： ３００—３０７． ［３２］Ｓａｒａｆ Ａ，Ｍｉｋｅｓ ＡＧ．Ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ［Ｊ］．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ，２００６，５８（４）：５９２—６０３． ［收稿日期］２０１０—０２—２３ ［修回日期］２０１０—０４—０７ 编辑／李阳利
