十一酸睾酮和长效醋酸甲孕酮联合应用对精子发生抑制效果的临床研究

中华男科学杂志

NationalJournalofAndrology

Vol.10　No.8

Aug.2004

・论著・

十一酸睾酮和长效醋酸甲孕酮联合应用对精子

发生抑制效果的临床研究

唐文豪1,谷翊群2,童建孙3,马鼎志3,王兴海3,

袁　冬2,陈振文2,WilliamJ.Bremner4

(1.北京大学第三医院泌尿外科,北京100083;2.国家人口和计划生育委员会科学技术研究所,北京100081;

3.江苏省计划生育委员会科学技术研究所,江苏南京210036;4.DepartmentofMedicine,UniversityofWashington,Seattle,Washington98195)

摘要:　目的:观察正常中国男性每2个月注射一次长效醋酸甲孕酮/十一酸睾酮(DMPA/TU)抑制精子发生的效果。　方法:30例年龄在25～40岁已婚的健康中国男性在体检及化验筛查合格后参加本试验,并被随机分成3组:1个TU单用组(1000mgTU)和2个DMPA/TU合用组(1000mgTU+150mgDMPA,1000mgTU+300mgDMPA),每组各10例,以8周间隔进行注射。试验共计56周:对照期8周、抑制期24周和恢复期24周。　结果:在抑制期,除了TU单用组有2例精子密度出现反跳,其余所有受试者均达到无精子状态。所有志愿者都能耐受试验,没有发生严重不良反应。　结论:在本试验条件下,TU单用能抑制精子发生但抑制效果不恒定,而DMPA/TU合用能恒定地抑制精子发生,1000mgTU+150mgDMPA是最佳剂量组合,可用于进一步的临床扩大试验或避孕有效性试验。

关键词:雄激素;孕激素;促性腺激素;精子发生

中图分类号:R977.1;R321.1　　文献标识码:A　　文章编号:100923591(2004)0820572208①

EffectofInjectionofTestosteroneUndecanoateandDepotMedroxyprogesteroneAcetate

ontheSuppressionofSpermatogenesis

TangWenhao,GuYiqun,TongJiansun,MaDingzhi,WangXinghai,

YuanDong,ChenZhenwen,WilliamJ.Bremner

DepartmentofUrology,theThirdHospitalofPekingUniversity,Beijing100083,China(TangWH);NationalResearchInstituteforFamilyPlanning,Beijing100081,China(GuYQ,YuanD,ChenZW);JiangsuFamilyPlanningRe2searchInstitute,Jiangsu210036,China(TongJS,MaDZ,WangXH);DepartmentofMedicine,UniversityofWash2ington,Seattle,Washington98195,USA(BremnerWJ)Correspondenceto:GuYiqing,E2mail:ygu90@hotmail.com

Abstract:　Objective:Toobservedepotmedroxyprogesteroneacetate(DMPA)andtestosteroneundecanoate(TU)injectedat82weekinter2valsforthesuppressionofspermatogenesisinhealthyChinesemen.　Methods:Afterscreening,30healthyvolunteerswereenrolledandran2domlyassignedto3dosage2groups(n=10/group):1000mgTU(GroupA),1000mgTUplus150mgDMPA(GroupB),1000mgTU

①收稿日期:2004202210;修回日期:2004208205基金项目:美国CONRAD资助(CIG200252)

作者简介:唐文豪(19752),男,山东莱州市人,医师,医学硕士,从事泌尿男科工作。E2mail:tangwenhao9696@hotmail.com通讯作者:谷翊群,E2mail:ygu90@hotmail.com

© 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.

第8期　　唐文豪等　十一酸睾酮和长效醋酸甲孕酮联合应用对精子发生抑制效果的临床研究・573・

plus300mgDMPA(GroupC).Alldosagesweregivenasintramuscularinjectionsat82weekintervals.Thestudyconsistedofan82weekcon2trol(baseline)period,a242weektreatmentperiodanda242weekrecoveryperiod.　Results:Consistentazoospermiaorsevereoligozoosper2miawasachievedandmaintainedinallthevolunteersduringthetreatmentperiod,except2inthemereTUgroupwhoexperienceda”re2bound”inspermconcentrations.An82weekregimenofTUplusDMPAatbothtestedcombinationdosageseffectivelysuppressedspermatogene2sistoazoospermia.Allvolunteerstoleratedtheinjections;noseriousadverseeffectswerereported.　Conclusion:Thelowercombieddosageisrecommendedforfurthertestinginanexpandedclinicaltrialorcontraceptiveefficacystudy.　NatlJAndrol,2004,10(8):5722577,581Keywords:androgen;progesterone;gonadotropins;spermatogenesis

　　下丘脑2垂体2睾丸轴系精确地调控精子发生,下丘脑脉冲式地释放促性腺激素释放激素(GnRH),GnRH刺激腺垂体分泌卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)。FSH作用于Sertoli细胞;LH作用于Ley2dig细胞并刺激其分泌睾酮(T),FSH与T是启动和维持精子发生的主要激素。给予外源性雄激素或孕激素能反馈性地抑制下丘脑2垂体2睾丸轴,从而使FSH、LH和睾丸局部的T浓度降低,引起精子发生障碍或完全停滞。

孕激素对下丘脑2垂体2性腺轴的抑制作用强于雄激素,但单用孕激素易造成症状性雄激素缺乏,如与雄激素合用则可取长补短。在孕激素与雄激素配伍中,孕激素主要起抑制下丘脑2垂体2睾丸轴的作用;雄激素则作为外周血雄激素的补充或替代,可避免症状性雄激素缺乏。长效醋酸甲孕酮(DMPA)与庚酸睾酮(TE)的联合应用开创了男性激素避孕药复合应用的先河,但在高加索男性身上抑制精子发生的效果不佳[1～3],这可能与TE清除半衰期短有关。长效雄激素制剂十一酸睾酮(TU)的出现为发展每8周肌注1次的男性避孕药提供了可能;然而1000mgTU每8周肌注1次不能持续有效地抑制促性腺激素,需要与孕激素(例如DMPA)联合应用[4]。一项研究发现,每6周肌注1次TU与每12周肌注1次DMPA联合应用,可迅速有效地抑制精子发生[5]。

基于上述研究结果,本研究旨在观察以2个月间隔注射TU/DMPA抑制人精子发生的安全性、有效性和可复性,其最终目的是使之发展成为实用的、并且安全、有效和可复的男性避孕药。1　对象和方法

1.1　试验对象和分组　本试验是由CONRAD(Con2traceptionResearchandDevelopment)资助,与美国WashingtonUniversity生殖中心合作,并且得到Wash2ingtonUniversity和国家人口计生委科研所的伦理委

运动精子(a+b级)>50%且正常形态率>30%;血清促性腺激素和T浓度在正常范围内;所有志愿者必须签定知情同意书,且配偶也同意其参加本试验。

在48例应征的志愿者中,18例不符合标准而被排除;剩下符合入选标准的30例,被随机分成3组,每组10例:A组(1000mgTU),B组(1000mgTU+150mgDMPA),C组(1000mgTU+300mgDMPA)。各组都是间隔8周肌注1次。1.2　雄/孕激素制剂　TU(125mg/ml)由中国浙江仙居药厂提供。DMPA是美国法玛西亚公司的产品,每毫升溶剂含150mgDMPA。整个试验过程中使用同一批号药物。1.3　试验方案　本试验包括对照期(8周)、抑制期(24周)和恢复期(24周)。在对照期,所有志愿者均要行2次精液分析,要求禁欲2～7d、手淫法取精且2次取精间隔2周;并且提供空腹血标本,用于以下项目的测定:血常规、激素、DMPA浓度、前列腺特异性抗原(PSA)、血脂和血生化等。所有志愿者还要进行常规体检和男科检查:如检查外生殖器和测量睾丸容积、观察有无男性乳房女性化的表现等。此外,在对照期、抑制期和恢复期结束时,还要进行经直肠前列腺超声检查。

志愿者接受第一次注射即标志着进入抑制期。在抑制期,所有志愿者每隔8周肌注1次1000mgTU;联合用药组(B组和C组每隔8周)还要分别肌注1次DMPA150mg或DMPA300mg。进入抑制期后,所有志愿者继续使用他们以前的避孕方法;志愿者每4周随访1次:进行常规和男科体检;同时提供精液标本和空腹血标本各1份。抑制期开始的前8周内,联合用药组还要连续每周提供1份血标本用来进行MPA测定。抽血时间是在下一次注射之前进行。

抑制期结束即进入恢复期。在恢复期,每隔4周,志愿者都要进行体格检查;并要提供血和精液标本,直到精液参数恢复到基线水平或正常参考值范围或恢复期结束。

员会批准。

所有入选对象都必须符合以下条件:既往身体健康;常规体检正常;精子密度>20×106/ml、前向

© 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.

・574・中华男科学杂志　　　　　　　　　　　　　　2004年8月　第10卷

1.4　实验室测量方法　精液常规分析根据《WHO

人类精液和精子2宫颈粘液相互作用实验室手册》进

行[7]。无精子状态定义为连续2次离心沉渣镜检都没有发现精子。严重少精子状态定义为精子密度≤3×106/ml。精子反跳定义为到达无精子状态或严重少精子状态后,精液中又出现精子且其密度>3×106/ml;1～2周后需再次复查精液常规来进一步证实[8]。用Prader睾丸计测量双侧睾丸容积并计算出总睾丸容积。经直肠超声测量前列腺冠状径、矢状径和前后径,并根据标准公式计算出总的前列腺体积[9]。T、雌激素(E2)、LH、FSH和PSA用Bio2Ekon(Italy)公司生产的试剂盒进行检测,试剂盒的灵敏度分别为0.3nmol/L、18pmol/L、0.2IU/L、0.3IU/L和0.1ng/L;批内变异系数分别为1.8%、4.4%、4.9%、4.6%和3.8%;批间的变异系数都小于8.6%。血清性激素结合球蛋白(SHBG)的浓度采用Euro2Diag2nostica(Sweden)公司生产的试剂盒进行检测,批内和批间变异系数分别为4.1%和8.3%。用公式可以根据总T和SHBG计算出血清游离T的浓度[10]。血清MPA的浓度采用ImmunometricsLtd.(UK)公司生产的试剂盒进行检测,试剂盒的灵敏度为150pmol/L,批内和批间变异系数分别为4.7%和4.3%。总胆固醇、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)用磷钨酸镁沉淀法进行检测,其正常范围分别为3.10～5.69、0.83～1.96、1.90～3.80mmol/L。1.5　统计学分析　数据采用双人双机录入,并记录

表1。在抑制期,3组的平均体重都轻度地增加,增

加最多者达1.4kg;停止用药后,各组平均体重逐渐恢复到基线水平。在抑制期,各组平均总睾丸容积轻度下降,最大下降幅度约为1ml;在恢复期,平均总睾丸容积恢复到基线水平。在试验过程中,各组前列腺体积保持不变(表1),并且接近于20～45岁健康中国男性的正常参考值(14.6±0.2)ml。2.1　精子密度的变化　第1针注射后各组平均精

子密度开始缓慢下降;与对照期相比,抑制期第12周精子密度已有显著性下降;抑制期的后12周,平均精子密度维持在一个很低的水平(图1)。A、B、C

(80±(83组生精抑制起效时间分别为(92±6)、5)、

±8)d,各组之间差异无显著性。在抑制期达到无精子状态或严重少精子状态志愿者的分布和所需时间详见表1。抑制期间,除了单用组有2名志愿者的精子密度出现反跳(其精子密度分别为11×106/ml和19×106/ml),所有志愿者都达到并维持无精子状态或严重少精子状态。尽管没有显著性差异,联合应用组比单用组有更持久抑制精子发生的趋势。

进入恢复期,精子发生开始恢复。与单用组相比,联合用药组对精子发生的抑制有后遗效应,在恢复期的前8周内志愿者仍维持在无精子状态或严重少精子状态(图1)。到恢复期第16周时,3组平均精子密度都恢复到正常参考值范围内,与对照期相比没有显著性差异。除了C组1例志愿者在恢复期结束时精子密度为19×106/ml,其他所有志愿者的精子密度、活力和正常形态率都恢复到基线水平或正常参考值范围内。4周之后再次随访结果表明,这名志愿者的精子密度达到56×106/ml。2.2　生殖激素水平的变化　与基础值相比,单用组平均总T浓度在第一次注射后第4周时有显著性增加;而联合用药组则在第12周才有显著增加。在抑制期注射后第4周各组血清T浓度会升高(图2A),但均在正常范围内;用药后第4周,单用组平均总T浓度明显高于联合用药组。恢复期结束时,总T浓度恢复到基线水平。本研究的一个重要发现是联合用药组的平均总T浓度在恢复期开始8周内低于正常参考值。联合用药组SHBG浓度有轻度下降;单用组则没有下降。血清平均游离T浓度也有明显的增加,增加的趋势类似于总T(图2B),但3组之间差异无显著性。整个试验期间,游离T与总T浓度的比值保持不变。

平均E2浓度也有显著性增加,变化趋势类似于

伴随疾病和志愿者中途退出的原因。组内和组间分析采用方差分析及PostHoctest(V8softwarepackage,SPSS,Inc.,Chicago,IL)。精子密度、FSH和LH在进行统计学分析之前进行log转化。结果用x±s来表示,P<0.05即认为有统计学上显著性差异。2　结果

所有志愿者都能耐受试验,没有人中途退出或失访。

整个试验过程中没有发生严重的不良反应。最常见的不良反应是注射局部的触痛或不适,常常发生在1、2次注射后,然后逐渐恢复正常。在性欲、情绪和攻击行为方面,试验前后没有明显的变化。

在恢复期早期,有两名志愿者发生了男性乳房发育症(B组和C组各1例)。对这两名志愿者抽血进行E2测定;同时进行2～3周抗雌激素治疗(他莫西芬,Tamoxifen)。这2例志愿者到恢复期结束时都恢复了正常。

试验期间各组平均体重和总睾丸容积的变化见

© 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.

第8期　　唐文豪等　十一酸睾酮和长效醋酸甲孕酮联合应用对精子发生抑制效果的临床研究・575・

图1　以8周间隔注射TU或DMPA/TU各组平均精子密度的变化

↑:注射药物时机。◆:A组;■:B组;▲:C组

Figure1.MeanspermconcentrationsineachgroupafterTUaloneorTUcombinedwithDMPAat82wintervals.

Valuesareexpressedasthemean±SEM.Arrowsindicatehormoneinjec2tions.They2axisisrepresentedasalogscale.◆:GroupA;■:GroupB;

▲:GroupC

T;并且在抑制期间,平均E2浓度超过正常参考值的上限(图2C)。

在开始注射后的第4周,各组血清LH和FSH受到明显抑制;在整个抑制期,促性腺激素维持在一个很低的水平;进入恢复期,LH和FSH开始逐渐恢复,到恢复期结束时,LH和FSH已经恢复到基线水平(图3)。研究发现单用TU间隔8周注射不能持续和有效地抑制促性腺激素的分泌;TU/DMPA联合应用则能有效地抑制促性腺激素的分泌,与单用组之间有显著性差异;促性腺激素的抑制程度与配伍中DMPA的剂量无关。

DMPA注射32周之内,B组和C组都可检测出血清MPA的浓度。所用DMPA剂量和血清MPA浓度之间有明显的剂量相关性(图4),DMPA低剂量组和高剂量组浓度2时间曲线下面积分别为107.4、146.96nmol/(L・W)(P<0.001)。

在整个试验期间,血清PSA水平稳定且在正常范围内波动。2.3　血脂及血液学参数的检测　与基础值相比,抑制期A、B和C组平均HDL水平有明显下降,分别下降了18%、19%和18%,但组间没有显著性差异。总胆固醇、LDL和甘油三酯的平均浓度在正常范围内有升高的趋势。抑制期各组血红蛋白和血细胞压积有所升高,但只有单用组血红蛋白升高有显著性差异。上述参数都在正常参考值范围内波动。在恢复期,各组血液学参数都恢复到基线水平。在试验期间,各组肝肾功能都保持在正常范围内。

图2　以8周间隔注射TU或DMPA/TU各组平均血清T浓度

(A),游离T(B)和E2(C)

↑:注射药物时机。......:中国成年男性T浓度正常参考值的上限和下限(A)以及E2浓度正常参考值的下限(C)。◆:A组;■:B组;▲:C组

Figure2.MeanserumT(A),freeT(B),andE2(C)concentra2tionsineachgroupafterTUaloneorTUcombinedwithDMPAat82wintervals

Valuesareexpressedasthemean±SEM.Arrowsindicatehormoneinjec2tions.Dottedlinesrepresenttheupperandlowerlimits(A)orupperlimits(C)oftheeugonadalreferencerangeforadultChinesemen.◆:GroupA;

■:GroupB;▲:GroupC

3　讨论

本试验是前瞻性、对照、探讨TU/DMPA最佳剂量组合的I期临床试验。

试验结果提示联合用药组抑制生精起效时间有少于单用组的趋势,但差异没有显著性,可能与本试验的样本量有关。以往试验[11]和本试验的结果表明,1000mgTU间隔8周单用不能有效地抑制中国男性精子发生,这可能与TU长间隔单用不能有效地抑制LH和FSH有关;联合用药组则能有效恒定地抑制精子发生,且生精功能恢复比单用组晚,这可能与血清MPA浓度在抑制期、甚至恢复期早期都保持效应有关提示:孕激素如果和更长效的雄激素制

© 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.

・576・中华男科学杂志　　　　　　　　　　　　　　2004年8月　第10卷

图4　以8周间隔注射TU或DMPA/TU各组平均血清MPA浓度

↑:注射药物时机。●:B组;○:C组

Figure4.MeanserumMPAconcentrationsinthetwocombinationgroupsafterTUcombinedwithDMPAat82wintervals

Valuesareexpressedasthemean±SEM.Arrowsindicatehormoneinjec2tions.●:GroupB;○:GroupC

图3　以8周间隔注射TU或DMPA/TU各组平均血清LH浓度(A)和FSH浓度(B)

↑:注射药物时机。◆:A组;■:B组;▲:C组

剂合用则可以在抑制期延长注射间隔至3个月,从

而增加激素避孕药的可接受性。

在抑制期,3组血清T浓度都维持在或高于治疗前的水平。药代动力学实验表明TU(溶解在茶籽油中)需2.6d才能达到血药浓度峰值,并能使血清T浓度维持在正常范围上限达2～3周之久[4]。TU

Figure3.MeanserumLH(A)andFSH(B)concentrationsineachgroupafterTUaloneorTUcombinedwithDMPAat82wintervals.

Valuesareexpressedasthemean±SEM.Arrowsindicatehormoneinjec2tions.◆:GroupA;■:GroupB;▲:GroupC

单用组血清T浓度在注射后4周内超过正常生理范

围。试验中的一个重要发现是:间隔8周注射的间期,单用组的血清T浓度显著高于联合用药组,可能是因为TU/DMPA联合应用可以更好地抑制促性腺激素和内源性T的分泌,LH、FSH和精子发生被抑制则支持这一推断。在恢复早期联合用药组较低的

表1　无精子症和严重少精子症发生的时相和分布

Table1.Timeanddistributionofazoospermiaandsevereoligozoospermia

Week4812162024

1000mgTU

Azoo.0/100/107/108/108/107/10

Oligo.0/102/100/100/101/101/10

3

1000mgTU+150mgDMPA

Oligo.

33

1000mgTU+300mgDMPA

33

Azoo.0/100/108/1010/1010/1010/10

Oligo.1/103/102/100/100/100/10

3

Oligo.Azoo.0/100/107/109/1010/1010/10

Oligo.0/102/102/100/100/100/10

3

Oligo.

33

0/100/101/101/101/100/10

0/101/100/100/100/100/10

0/101/100/101/100/100/10

3:精子密度在1.1～3×106/ml之间;33:精子密度<1×106/ml

3:Spermconcentrationsbetween1.1～3×106/ml;33:spermconcentrations1×106/ml

T水平,可能是由于MPA在睾丸水平干扰雄激素的

生物合成,以前的研究支持这一观点[12];也可能是

由于MPA增加了T的清除率。已有研究提示性激素结合球蛋白(SHBG)水平与T的清除率之间存在

负相关[13],TU/DMPA联合应用可以降低血清SHBG浓度;因此,可能由于联合用药组增加了血清激素的代谢清除率而降低了T浓度。MPA的长效抑制作用将会导致恢复期外源性雄激素撤退后部分男性雄激

© 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.

第8期　　唐文豪等　十一酸睾酮和长效醋酸甲孕酮联合应用对精子发生抑制效果的临床研究・577・

素缺乏,应注意雄激素的补充。

尽管关于DMPA在男性身上的药代动力学特征没有正式文献报道,但一项在前列腺增生患者身上的临床研究表明150mgDMPA一次注射可以维持有效血药浓度长达3个月[14]。另一项评估800mgT皮下埋植和300mgDMPA单次注射联合应用避孕效果的临床试验表明,两者联合应用可以显著地抑制促性腺激素和精子发生长达3个月,并且没有发生严重副作用[15];此外,单次肌注300mgDMPA可以使血清MPA浓度升高达6个月之久。本研究证实一次肌注DMPA150mg或300mg可以使血清MPA浓度维持在可检测到的水平至少4个月。因此,150mgDMPA与TU或更长效的雄激素联合应用有可能成为每2～3个月肌注一次男性避孕药的最佳组合。

TE规律用药可引起高加索男性HDL的中度抑制[16];TU也可使中国男性HDL受到抑制[17]。本试验中,在抑制期联合用药组HDL浓度有所降低。HDL浓度的缓慢降低,尤其对于HDL基础值较低的个体,将会增加冠状动脉疾病的危险性[18]。HDL浓度降低可能与血清T浓度峰值超过正常生理水平有关;T皮下埋植或TE肌注并不能降低高加索男性HDL水平,可能与其血清T浓度更接近生理水平、波动更小有关。

3组体重、血红蛋白和血细胞压积有增加的趋势。由于抑制期较短,本试验中体重增加的最大值不如以前临床试验明显[19]。由于没有监测T峰值,本试验低估了志愿者暴露的最大T浓度;因此,两次注射之间的T浓度可能超过正常生理水平,超生理水平的T可明显增加体重、血红蛋白和血细胞压积的水平。TU的这一缺陷可能促使人们开发更长效更稳定释放的雄激素制剂,使其能维持血清T于生理水平。最近的研究发现TU溶解在蓖麻油中比溶解在茶籽油中的清除半衰期更长。溶解在蓖麻油中的TU在治疗性腺功能低下的患者[19]或与孕激素庚炔诺酮联合用于避孕试验时[20],可以有更长的用药间隔。

3组平均总睾丸容积没有明显变化,而在以前类似的试验中,6个月的抑制期使中国男性平均总睾丸容积下降了2ml,这可能与本试验较短的用药时间(6个月)及较长的用药间隔有关;也可能与Prader睾丸计测量睾丸容积的相对不准确有关,在

发育症,这两名志愿者随机存在于联合用药的两组中;与单用组相比,在抑制期晚期和恢复期早期,他们血清E2浓度相对较高而T浓度相对较低。男性乳房发育症可能与联合用药时TU的吸收、分布和代谢改变所导致T/E2的比例失调有关。

总之,在本试验条件下,1000mgTU单用能抑制精子发生但不能恒定地维持精子发生的抑制;TU/DMPA合用组则不仅能恒定地抑制精子发生,而且在恢复期有长达2个月的后遗效应;联合用药组之间疗效没有差别,本着保持疗效不变减少用药总量的原则,我们推荐用小剂量组进行扩大样本量的进一步临床试验或避孕有效性的研究。

参考文献

[1]　MeloJF,CoutinhoEM.Inhibitionofspermatogenesisinmenwith

monthlyinjectionsofmedroxyprogesteroneacetateandtestosteroneenanthate[J].Contraception,1977,15(6):6272634.

[2]　Alverez2SanchezF,FaundesA,BracheV,etal.Attainmentand

maintenanceofazoospermiawithcombinedmonthlyinjectionsofdepotmedroxyprogesteroneacetateandtestosteroneenanthate[J].Contra2ception,1977,15(6):6352648.[3]　BrennerPF,MishellDRJr,BernsteinGS,etal.Studyofmedrox2

yprogesteroneacetateandtestosteroneenanthateasamalecontracep2tive[J].Contraception,1977,15(6):6792691.[4]　ZhangGY,GuYQ,WangXH,etal.Apharmacokineticstudyof

injectabletestosteroneundecanoateinhypogonadalmen[J].JAn2drol,1998,19(6):7612768.[5]　MoeloekN,PujiantoDA,AgustinR,etal.Achievingazoospermia

byinjectionsoftestosteroneundecanoatealoneorcombinedwithdepotmedroxyprogesteroneacetateinIndonesianmen(Jakartacenterstudy).Proceedingof7thInternationalCongressofAndrology,Mon2treal,2001,Poster1/22133.[6]　WorldHealthOrganization.WHOlaboratorymanualfortheexamina2

tionofhumansemenandsperm2cervicalmucusinteraction[M].3rded.Cambridge:CambridgeUniversityPress,1992.[7]　WorldHealthOrganizationTaskForcefortheRegulationofMaleFer2

tility.Contraceptiveefficacyoftestosterone2inducedazoospermiaandoligozoospermiainnormalmen[J].FertilSteril,1996,65(4):821-829.[8]　张歧山,郭应禄主编.泌尿超声诊断治疗学[M].北京:科技

文献出版社,2001.1:293.

[9]　VermeulenA,VerdonckL,KaufmanJM.ACriticalevaluationof

simplemethodsfortheestimationoffreetestosteroneinserum[J].JClinEndocrinolMetab,1999,84(10):366623672.

[10]　谷翊群,童建孙,马鼎志,等.长效雄激素与孕激素合用抑制

精子发生的剂量研究[J].生殖医学杂志,2002,11(5):2642268.

[11]　WorgulT,BakerHWG,MurryFT,etal.Directeffectofmedrox2

yprogesteroneacetateonthetestis:Possiblemechanismsexaminedbytesticularperfusion[J].IntJAndrol,1979,2(5):4082418.

[12]　PetraPH,StanczykFZ,NamkungPC,etal.Directeffectofsex

steroid2bindingprotein(SBP)ofplasmaonthemetabolicclearancerateoftestosteroneintherhesusmacaque[J].JSteroidBiochem,1985,22(6):7392746.

[13]　OnuPE.Depotmedroxyprogesteroneinthemanagementofbenign

prostatichyperplasia[J].EurUrol,1995,28(6):2292235.

[14]　HandelsmanDJ,ConwayAJ,HoweCJ,etal.Establishingthemini2

mumeffectivedoseandadditiveeffectsofdepotprogestininsuppres2sionofhumanspermatogenesisbyatestosteronedepot[J].JClinEn2docrinolMetab,1996,81(11):411324121.

将来的临床试验中,可考虑选用超声进行睾丸容积的精确测量。

在恢复期早期有2例志愿者被诊断为男性乳房

(下转581页)

© 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.

第8期　　姜　涛等　三氧化二砷对前列腺癌细胞株PC23生长影响的研究・581・

(主要成分As2O3)结合中医辨证治疗急性早幼粒细

胞性白血病32例,取得完全缓解率65.6%的极好效果后,使这古老的中药,有希望成为治疗恶性肿瘤有效药物,已成为肿瘤治疗研究的热点之一。目前,国内外正对As2O3的抗肿瘤机制进行广泛而深入的研究,已发现对多数肿瘤(包括实体瘤)有效,但对HRPCa的研究相当少,作用机制不清楚。

度(0.125～2μmol/L)As2O3作用下,1μmol/L浓度对肝癌细胞的生长有较强的抑制作用,而对正常的肝细胞生长的抑制作用最弱(P<0.01)[4,5]。朱新华等[6]报道也表明1μmol/LAs2O3明显延长Burkitt淋巴细胞的细胞周期,多数实验结果表明As2O3对肿瘤细胞的有效抑制浓度是1.0～2.0μmol/L。而本研究中发现:As2O3对PC23细胞的有效抑制浓度远高于1.0～2.0μmol/L,说明As2O3对肿瘤细胞的有效抑制浓度与细胞种类有关,本研究提示雄激素非依赖性前列腺癌细胞对以凋亡为作用机理的化疗药物的抵抗作用较强,这与临床观察到的雄激素非依赖性前列腺癌细胞对放疗、化疗不敏感一致。

前列腺癌最终的死亡原因为由雄激素依赖性细胞转变为雄激素非依赖性细胞,而雄激素非依赖细胞对多种化疗药物均耐受,本研究发现:As2O3对体外培养的雄激素非依赖性细胞PC23细胞株的生长有抑制作用,并且与剂量和作用时间相关,其对PC23细胞株抑制作用的机制是促进细胞凋亡,有可能为前列腺癌的治疗提供一种新的治疗药物,但今后尚有许多工作要做,如As2O3对前列腺癌细胞和正常细胞是否选择性,As2O3引起凋亡的作用机制,As2O3对激素依赖性前列腺癌细胞是否有作用等。

参考文献

[1]　PeterzielH,CuligZ,StoberJ,etal.Mutantandrogenreceptorsin

prostatictumorsdistinguishbetweenamino2acid2sequencerequire2mentsfortransactivationandligandbinding[J].IntJCancer,1995,63(4):5442550.[2]　CeralineJ,ErdmannE,ErbsP,etal.Ayeast2basedfunctionalas2

sayforthedetectionofthemutantandrogenreceptorinprostatecancer[J].EurJEndocrinol,2003,148(1):992110.[3]　孙洪德,李元善,马　玲,等.癌灵一号结合中医辨证治疗急

性早幼粒细胞白血病32例[J].中国中西医结合杂志,1992,12(3):170.[4]　HinoN,HigashiT,NousoK,etal.Apoptosisandproliferationof

humanhepatocellularcarcinoma[J].Liver,1996,16(2):1232129.[5]　邓志华,蔡洪培,李　石,等.三氧化二砷对正常肝细胞及肝

癌细胞株的影响[J].中华消化杂志,1999,19(4):2272229.[6]　朱新华,陈明强,蔡　循,等.三氧化二砷对恶性淋巴细胞系

的影响[J].中华血液学杂志,1999,20(6):3132314.

本研究通过不同作用时间、不同浓度的As2O3对PC23细胞作用,建立了As2O3对PC23细胞株作用的生长抑制曲线,发现As2O3对PC23细胞生长有明显的抑制作用,并且抑制作用呈时间、剂量依赖性。

本研究应用流式细胞仪AnnexinV和PI双染法对As2O3抑制PC23细胞生长作用机制进行了研究。在双变量散点图上,可见4群细胞即活细胞群(An2nexinV2/PI2)、早期凋亡细胞群(AnnexinV+/PI2),晚期凋亡细胞群(AnnexinV+/PI+)和死亡细胞群(Annex2inV2/PI+),5μmol/LAs2O3作用PC23细胞48h后凋亡率为11.6%,作用72h后凋亡率为20.7%;而50μmol/LAs2O3作用PC23细胞48h后凋亡率为69.09%,作用72h后凋亡率为93.6%,早期凋亡和晚期凋亡分别为2.62%和90.99%,提示As2O3对PC23细胞抑制作用的机制为促进PC23细胞的凋亡,其促进凋亡的作用呈时间、剂量依赖性。但当As2O3用药剂量为20μmol/L和50μmol/L,作用72h检测凋亡率分别为92.9%和93.6%,两者虽然药物剂量上有显著差异,但凋亡作用无明显变化。表明As2O3存在一个最佳用药剂量,当超过该用药剂量时,作用效果不会增加,反而可能加重As2O3的毒副作用,为今后临床合理应用As2O3提供了的理论基础。

不少学者对As2O3抑制肿瘤细胞生长的有效浓度进行实验,不同浓度As2O3与肝癌细胞株BEL27402,BEL27404,SMMC27721和正常肝细胞株L202共同孵育后,细胞生长受到抑制,这一抑制作用随As2O3浓度的升高及作用时间的延长而增强,在不同浓

(商学军　编发)

(上接577页)

[15]　MeriggiolaMC,MarcovinaS,PaulsenCA,etal.Testosteroneenan2

thateatadoseof200mg/weekdecrease2HDLcholesterollevelsinhealthymen[J].IntJAndrol,1995,18(5):2372242.[16]　GuYQ,WangXH,XuD,etal.Amulticentercontraceptiveeffica2

cystudyofinjectabletestosteroneundecanoateinhealthyChinesemen[J].JClinEndocrinolMetab,2003,88(2):5622568.

[17]　BagatellCJ,HeimanJR,MatsumotoAM,etal.Metabolicandbe2

havioraleffectsofhigh2dose,exogenoustestosteroneinhealthymen[J].JClinEndocrinolMetab,1994,79(2):5612567.

[18]　NieschlagE,BuchterD,VonEckardsteinS,etal.Repeatedintra2

muscularinjectionsoftestosteroneundecanoateforsubstitutiontherapyinhypogonadalmen[J].ClinEndocrinol(Oxf),1999,51(6):7572763.

[19]　KamischkeA,HeuermannT,KrugerK,etal.Aneffectivehormon2

almalecontraceptiveusingtestosteroneundecanoatewithoralorin2jectablenorethisteronepreparations[J].JClinEndocrinolMetab,2002,87(2):5302539.

(商学军　编发)

© 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.