氨基酸笔记

生化笔记

求甘氨酸等电点

将ka1和ka2相加，得：?ka1ka2=[h+]2[a-]/[a+]

甘氨酸酸性优于乙酸

甘氨酸中与羧基相邻的α-nh3+基是一个强吸引电子的基团，产生一个强场效应而稳定羧基阴离子；

α-coo-基的存有影响α-nh3+的离解，甘氨酸的α-氨基的碱基显著高于乙胺。

氨基酸的解离常数可用测定滴定曲线的实验方法求得。

标准氢氧化钠溶液展开电解，以重新加入的氢氧化钠的摩尔数对ph作图，则得电解曲线b段，在ph9.60处为一个拐点。

从甘氨酸的解离公式(2),ka2=[a-][h+]/[a0]可知，当滴定至甘氨酸的兼性离子有一半变成阴离子，即[a0]=[a-]时，则ka2=[h+]，两边各取负对数得pka2=ph，这就是曲线

b段拐点处的ph9.60。

如果用标准盐酸电解，以重新加入的盐酸的摩尔数对ph作图，则得电解曲线a段，在ph2.34处为一个拐点。

从解离公式(1)ka1=[a0][h+]/[a+]，当滴定至甘氨酸的兼性离子有一半变成阳离子，即[a0]=[a+]时，则ka1=[h+]，两边各取负对数得pka1=ph，这就是曲线b段拐点处的ph2.34。

等电点时，[a+]=[a-],因此：

[h]2=ka1ka2，两边取负对数，得pi=(pka1+pka2)/2

甘氨酸等电点=(2.34+9.60)/2=5.97

氨基酸滴定

向氨基酸比如甘氨酸溶液中重新加入过量的甲醛，用标准氢氧化钠电解时，由于甲醛与

氨基酸中的一nh2作用形成一nhch20h，一n(ch20h)2等羟甲基衍生物，而降低了氨基的碱性，滴定终点也移到ph9附近。亦即酚酞指示剂的变色区域。

总结

先解离α-cooh,随后其他-cooh；?再解离α-nh3+,随后其他-nh3+；?羧基解离度大于氨基

脂肪酸的-cooh基pka值通常4-5，脂肪胺中-nh3+基pka值通常10-11?二元酸（侧链疑惑距的中性氨基酸）：?三元酸（酸性和碱性氨基酸）：r基疑惑距的氨基酸都具备相似甘氨酸

r侧链基团不解离的氨基酸pi=（pk1+pk2）/2（一氨基一羧基的氨基酸）

一氨基二羧基的氨基酸pi=（pk1+pkr）/2二氨基一羧基的氨基酸pi=（pk2+pkr）/2

找到净电荷为零的兼性离子，将其两侧的pk求和除2即为等电点。

对于三级以上的电离均衡，远处的pk值与兼性离子两侧的pk值较之差别较小时，

不再适用。

1.在ph10的谷氨酸溶液中，以下哪一种结构占优？ea.羧基氨基都离解b.羧基氨基都疑惑距c.只α-羧基离解d.只γ-羧基离解

e.α-羧基和γ-羧基都解离

2.氨基酸等电点时，主要以（）离子形式存有，在ph大于pi的溶液中，大部分以（）

离子形式存有，在ph大于pi的溶液中，大部分以（）离子形式存有。两性阴阳

如何计算多肽的等电点和电荷情况（不同ph情况下）？

测试题：

某氨基酸溶液中，有四种氨基酸a、b、c、d，其等电点分别为10、4、7、5，如不考虑次要因素，

1）使用阳离子互换柱用盐浓度或ph梯度展开洗清，将按何种顺序被洗清？2）使用阴离子互换柱用盐浓度或ph梯度展开洗清，将按何种顺序被洗清？3)你能够用什么办法将它们分后返回答案：

1、最先流出b―d―c―a2、最先流出a―c―d―b

蛋白质搬迁依赖于它的大小和形状

变性电泳：在电泳缓冲液、凝胶中含有十二烷基磺酸钠(sds)；上样缓冲液中含有sds

和二硫键还原剂(例如巯基乙醇，二硫苏糖醇[dtt]),电泳前样品冷却煮熟通常约5分钟。该电泳英文简写：sds-page变性电泳特点?（1）sds能与蛋白质融合，引致蛋白质变性。相同蛋白质-sds复合物形状相近，

都呈椭圆状；

（2）大量sds的负电荷并使相同蛋白质本身所带电荷忽略不计，蛋白分子越大融合

的sds越多，各蛋白质-sds复合物的电荷密度（ρ）趋于一致；

（3）蛋白质-sds复合物的电泳迁移率为依赖于蛋白质（亚基）分子量的大小。

sds是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，

并使分子回去卷曲，毁坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂例如巯基乙醇，二硫苏糖醇能够并使半胱氨酸残基间的二硫键脱落。在样品和凝胶中重新加入还原剂和sds后，分子被裂解成多肽链，裂解后的氨基酸侧链和sds融合成蛋白-sds胶体，所带的负电荷大大少于了蛋白原有的电荷量，这样就消解了相同分子间的电荷差异和结构差异。

蛋白质测序策略

酸求解测量氨基酸含量?分拆蛋白质成多肽链(n/c)?断裂链内二硫键

裂解多肽链成小的片段?测定各肽段氨基酸顺序

edman化学降解法（edman，1950，fitc）?酶水解法：末端附件很少几个残基?质谱法：电喷射电离串联质谱法