检验医学与临床２０１４年２月第ｕ卷第４期Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１４，Ｖｏ１．１１，Ｎｏ．４ ・论 著・ 人脐带和骨髓源间充质干细胞对脐血单个核细胞 增殖能力的影响 张玉琳，王静文，于纪棉（宁波卫生职业技术学院人体形态学教研室，浙江宁波 ３１５１０４） 【摘要】 目的探讨人脐带间充质干细胞（ｕｃＭＳｃｓ）与骨髓间充质干细胞（ＢＭＭｓｃｓ）在体外对造血干细胞的 支持作用。方法 分别从人脐带和骨髓中分离、培养间充质干细胞，通过免疫细胞化学染色等方法对其进行表型鉴 定；采用流式细胞仪测定脐血单个核细胞的周期分布，采用甲基纤维素法测定脐血单个核细胞混合集落形成单位 （ＣＦＵ—Ｍｉｘ），比较ＵＣＭＳＣｓ和ＢＭＭＳＣｓ对脐血单个核细胞细胞周期、ＣＦＵ—Ｍｉｘ形成能力的影响。结果 成功培 养获得ＵＣＭＳＣｓ和ＢＭＭＳＣｓ，鉴定结果符合预期；与非共培养组细胞相比，ＵＣＭＳＣｓ和ＢＭＭＳＣｓ共培养均能促进 脐血单个核细胞进入增殖周期，并增加其形成ＣＦＵ—Ｍｉｘ的能力（Ｐｄ０．０５），但ｕｃＭＳＣｓ和ＢＭＭＳＯｓ共培养组之间 比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论 成功从人脐带和骨髓组织中培养获得间充质干细胞，两种来源的间充 质干细胞均能提高脐血单个核细胞的体外增殖能力及ＣＦＵ—Ｍｉｘ形成能力，均具有造血支持作用。 【关键词】脐带； 骨髓； 间充质干细胞； 体外； 脐血单个核细胞； 细胞增殖 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１４．０４．００１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２—９４５５（２０１４）０４—０４３３—０３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ａｎｄ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ＺＨＡＮＧ Ｙｕ—ｌｉｎ，ＷＡＮＧ Ｊｉｎｇ—ｗｅｎ，ｙＵ Ｊｉ—ｍｉａｎ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏＪ’Ｈｕｍａｎ Ｍｏｒｐｈｏｌｏ— ｇＹ，ＮｉｎｇｂｏＣｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｉｎｇｂｏ，Ｚｈｅｊｔａｎｇ ３１５１０４，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｓｕｐｐｏｒｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ（ＭＳＣｓ）ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｈｕ— ｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ（ＵＣＭＳＣｓ）ａｎｄ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ（ＢＭＭＳＣｓ）ｏｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＭＳＣｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａ— ｔｅｄ ｆｒｏｍ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ａｎｄ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ，ａｎｄ ｔｈｅ ｐｕｒｉｔｙ ｏｆ ＭＳＣｓ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｉｎ．Ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌ１ ｃｙｃｌｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｈａｌｆ－ｓｏｌｉｄ ｍｅｔｈｙｋｅｌｌｕｌｏｓｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔＯ ｄｅ— ｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔ—ｍｉｘｔｕｒｅ（ＣＦＵ—ｍｉｘ）ｏｆ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ＵＣＭ— ＳＣｓ ａｎｄ ＢＭＭＳＣｓ ｏｎ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ａｎｄ ｆｏｒｍｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＣＦＵ—Ｍｉｘ ａｍｏｎｇ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＵＣＭＳＣｓ ａｎｄ ＢＭＭＳＣｓ ｗｅｒｅ ｂｏｔｈ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｓ＋Ｇ２＋Ｍ ｐｈａｓｅ ａｎｄ ＣＦＵ—ｍｉｘ ａｆｔｅｒ ｉｎｔｅｒ— ｖｅｎｉｎｇ ｗｉｔｈ ＵＣＭＳＣｓ ａｎｄ ＢＭＭＳＣｓ（Ｐ＜Ｏ．０５），ｂｕｔ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ＵＣＭＳＣｓ ａｎｄ ＢＭＭＳＣｓ ｗａｓ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉ— ｃａｎｔ（Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＵＣＭＳＣｓ ａｎｄ ＢＭＭＳＣｓ ｗｅｒｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ，ｂｏｔｈ ｏｆ ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ＣＦＵ—Ｍｉｘ ｆｏｒｍｉｎ ａ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｕｍｂｉｌｉｃａ１ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ａｂｌｅ ｔＯ ｓｕｐｐｏｒｔ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ； ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ； ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ； ｉｎ ｖｉｔｒｏ； ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｅｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ；ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ 自１９８９年世界上第一例脐血移植成功治疗白血病以 来 ｊ，越来越多的研究者对造血干细胞的来源及其移植治疗进 行了深入的研究。间充质干细胞（ＭＳＣｓ）来源于中胚层，是一 胞ｌ＿３］。为探讨ＵＣＭＳＣｓ是否能代替ＢＭＭＳＣｓ用于血液系统 疾病的细胞移植治疗，本实验拟通过比较ＵＣＭＳＣｓ与 ＢＭＭＳＣ对脐血单个核细胞增殖能力和混合集落形成单位 （ＣＦＵ—Ｍｉｘ）形成能力的影响，验证和分析两种ＭＳＣｓ在造血支 群具有自我更新及多向分化潜能的一类多能干细胞，对机体的 造血功能具有一定的支持作用。目前，应用最多且技术较成熟 的是骨髓间充质干细胞（ＢＭＭＳＣｓ），但ＢＭＭＳＣｓ存在许多的 问题而了其临床应用，例如，随着移植时间的延长， 持方面的作用的优势，为将其应用于细胞移植治疗提供实验 依据。 １材料与方法 ＢＭＭＳＣｓ数量显著降低、增殖分化能力大幅衰退，其制备过程 １．１材料实验所用脐带与肋骨组织均来自于宁波某医院 也不易实现质量控制等。因此，寻找骨髓以外的ＭＳＣｓ来源极 为重要 ］。近年来，脐带间充质干细胞（ＵＣＭＳＣｓ）以其来源丰 富和生物学特性适合后续处理，已成为备受关注的成体干细 （经医院伦理委员会许可，产妇与外科手术患者均签署知情同 意书）。外科手术患者作为肋骨组织供休 均排除血液疾病。 健康产妇作为脐带供体，均为足月顺产孕妇，于胎儿娩出后剪 基金项目：浙江省教育厅科研项目课题（Ｙ２０１２２６０６８）。 作者简介：张玉琳，女，讲师，硕士研究生，主要从事肿瘤病理学研究。
