不同理化因素对重组人成纤维细胞生长因子21蛋白纯度的影响_王长文

第４１卷　第３期

２０１５年５月吉　林　大　学　学　报　（医　学　版）

）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ　　　　ｙ（

Ｖｏｌ．４１Ｎｏ．３　

Ｍａ０１５　２ｙ

）文章编号］５８７２０５００４６７１０１５０３６　　［－－－Ⅹ（　　１

：／７１２０１５０３１４．１６５８７ｘ．ＤＯＩ１０．１３４８１－ｊ

不同理化因素对重组人成纤维细胞生长因子２１蛋白纯度的影响

王长文１，刘　敏１，刘　磊２，姜　勇２，张　磊２，李　艳２，王会岩２

（吉林医药学院公共卫生学院营养与食品卫生学教研室，吉林吉林１３２０１３；２．吉林医药学院检验学院生物１．

）技术教研室，吉林吉林１３２０１３

［摘　要］　目的：研究重组人成纤维细胞生长因子２１（ｒｈＦＧＦ２１）在不同保存条件下的稳定性，阐明温度、Ｈ值、缓冲溶液和反复冻融因素对ｒｈＦｈＦＧＦ２１稳定性的影响，进一步完善纯化ｒＧＦ２１的工艺。ｐ

、不同ｐ醋酸－醋酸钠缓冲液ｐ方法：ＧＦ２１在不同温度（５℃）Ｈ值缓冲液（．０、ｈＦ－２０℃、４℃和２Ｈ４．０和ｐＨ５ｒ　　柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液ｐ．０、磷酸氢二钠－磷酸二氢钠缓冲液ｐ．５和ｐＨ７．０，ＴｒｉｓＨ５．０和ｐＨ６Ｈ６．０、ｐＨ６　　　　　－）中及反复冻融条件下分别保存，采用高效液相色谱法（ｌ缓冲液ｐ．５和ｐｈＦＧＦ２１Ｈ７Ｈ８．０ＨＰＬＣ）检测ｒＨＣ　　纯度，同时观察外观性状。结果：于－２０℃和４℃分别保存时，ｒｈＦＧＦ２１的各项性质在观察期内均无明显变化；）；在ｐＰ＜０．０５．２５℃时，１００．００±０．００％下降至（２０±０．１４）％（１）Ｈ４．０ｒｈＦＧＦ２１存放１４ｄ纯度由０ｄ时（１　，溶液出现浑浊；在ｐ，溶和ｐ５℃条件下保存７ｄＨ５．０和ｐ．０缓冲液中２５℃条件下保存７ｄＨ５．０缓冲液中２Ｈ６　　　液出现浑浊；在ｐｌ缓冲液中，溶液澄清透明；Ｈ６．５和ｐＨ８．０磷酸盐和ＴｒｉｓｒｈＦＧＦ２１原液反复冻融后其纯－ＨＣ　　）。结论：度变化差异有统计学意义（５ｒｈＦＧＦ２１在低温和ｐＨ６．５～８．０磷酸盐和ＴｒｉｓＰ＜０．０ｌ缓冲液中溶液　－ＨＣ较稳定，反复冻融处理对ｒｈＦＧＦ２１稳定性也有明显影响。

［关键词］　重组人成纤维细胞生长因子２１；纯度；稳定性；理化因素［文献标志码］　Ａ中图分类号］　Ｑ７８　　［

ｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｈｓｉｃａｌａｎｄｃｈｅｍｉｃａｌｆａｃｔｏｒｓｏｎｕｒｉｔＥｆｆ　　　　　　　　ｐｙｐｙ

ｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ２１　　　　　　ｇ

１１２２２２２

，Ｌ，Ｌ，ＷＡＮＧ　ＷＡＮＧＩＵ　ＭＩＵＬＩＡＮＧＨＡＮＧＩＹａＣｈａｎｗｅｎｉｎｅｉＹｏｎＬｅｉｎＨｕｉａｎ　　　　，Ｊ　　　，Ｌｇｇ，Ｚｙ

，Ｓ，Ｊ，（ｅａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｕｔｒｉｔｉｏｎａｎｄＦｏｏｄＨｉｅｎｅｃｈｏｏｌｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈｉｌｉｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｅ１．Ｄ　　　　　　　　　　ｐｙｇｇ，Ｓ，Ｊ；２．ｉｌｉｎＭｅｄｉｃａｌＪｉｌｉｎ１３２０１３，ＣｈｉｎａＤｅａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒ　　　　　　　ｙｐｇｙ

，Ｊ）Ｃｏｌｌｅｅｉｌｉｎ１３２０１３，Ｃｈｉｎａ　ｇ

：Ｏｔｈｅｓｔａｂｉｌｉｔｉｅｓｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ２１（ｒｈＦＧＦ２１）Ａｂｓｔｒａｃｔｂｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｓｔｕｄ　　　　　　　　　ｇｙｊ　，ａ，ｂｄｅｏｓｉｔｅｄａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｎｄｔｏｅｌｕｃｉｄａｔｅｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｔｅｍｅｒａｔｕｒｅｕｆｆｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎｓａｎｄｒｅｅａｔｅｄｆｒｅｅｚｅ　　　　　　　　　　　　　ｐｐｐｉｎｔｈｅｓｔａｂｉｌｉｔｏｆｒｈＦＧＦ２１．ＭｅｔｈｏｄｓｈＦＧＦ２１ｗａｓｄｅｏｓｉｔｅｄａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｓｕｃｈａｓｔｅｍｅｒａｔｕｒｅｓｔｈａｗｉｎ　　ｒ　　　　　　　　　ｐｐｙｇ　　

（，ｂｓｏｄ－２０℃，４℃，２５℃）ｕｆｆｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（ａｃｅｔａｔｅｓｏｄｉｕｍａｃｅｔａｔｅｂｕｆｆｅｒＨ４．０ａｎｄＨ５．０，ｃｉｔｒｉｃａｃｉｄｉｕｍ－　　　　　　　　　ｐｐｃｉｔｒａｔｅｂｕｆｆｅｒＨ５．０ａｎｄＨ６．０，ｄｉｓｏｄｉｕｍｈｄｒｏｅｎｈｏｓｈａｔｅａｎｄｓｏｄｉｕｍｄｉｈｄｒｏｅｎｈｏｓｈａｔｅｂｕｆｆｅｒＨ６．０，　　　　　　　　　　　　　　ｐｐｙｇｐｐｙｇｐｐｐ），Ｈ６．５ａｎｄＨ７．０，Ｔｒｉｓ－ＨＣｌｂｕｆｆｅｒＨ７．５ａｎｄＨ８．０ａｎｄｒｅｅａｔｅｄｆｒｅｅｚｅｔｈａｗｉｎｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌ．Ｔｈｅｕｒｉｔ　　　　　　　　　　　ｐｐｐｐｐｇｐｙｐｙｏｆｒｈＦＧＦ２１ｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂＨＰＬＣ，ａｎｄｔｈｅａｅａｒａｎｃｅｗａｓａｌｓｏｏｂｓｅｒｖｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓｌｌｒｏｅｒｔｉｅｓｏｆｒｈＦＧＦ２１　　　　　　　　　Ａ　　　ｙｐｐｐｐ　ｗｅｒｅｎｏｔａｌｔｅｒｅｄｄｕｒｉｎｔｈｅｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｅｒｉｏｄａｔ－２０℃ａｎｄ４℃；ｔｈｅｕｒｉｔｏｆｒｈＦＧＦ２１ｄｅｏｓｉｅｄｆｏｒ１４ｄｗａｓ　　　　　　　　　　　ｇｐｐｙｐ　　））５．ＴｈｅａｃｅｔａｔｅｓｏｄｉｕｍａｃｅｔａｔｅＰ＜０．０ｒｅｄｕｃｅｄｔｏ（１５．２０±０．１４％ｃｏｍａｒｅｄｗｉｔｈ０ｄ（１００％±０．００％）ａｔ２５℃（　　　　　　　ｐ［收稿日期］　２０１４０９０２－－［；吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题（；基金项目］　国家自然科学基金资助课题（８１２７３４２１）２０１１６０４４）

吉林省教育厅科研基金资助课题（３６１号）

［，男，吉林省松原市人，副教授，农学博士，主要从事食品营养与食品卫生方面的研究。作者简介］　王长文（１９６６－）［，Ｅ－ｍ：０：通信作者］　王会岩，副教授（Ｔ６４５６０３２４ａｉｅｌ４３２ｌｚｓｗｈ５１８＠１６３．ｃｏｍ）－ｙ

王长文，等．１蛋白纯度的影响　不同理化因素对重组人成纤维细胞生长因子２

５０７

ｆｅｒＨ４．０ａｎｄＨ５．０ａｎｄｃｉｔｒｉｃａｃｉｄｓｏｄｉｕｍｃｉｔｒａｔｅｂｕｆｆｅｒＨ５．０ａｎｄＨ６．０ｗｅｒｅｔｕｒｂｉｄｉｔｕｎｄｅｒｔｈｅｂｕｆ　　　　　　　　　　　　　　　ｐｐｐｐｙ　；ｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆ２５℃ｆｏｒ７ｄｈｅｄｉｓｏｄｉｕｍｈｄｒｏｅｎｈｏｓｈａｔｅａｎｄｓｏｄｉｕｍｄｉｈｄｒｏｅｎｈｏｓｈａｔｅｂｕｆｆｅｒＨ６．５ａｎｄ　　　　　　　　　　　　　ｙｇｐｐｙｇｐｐｐＨ７．０，ａｎｄＴｒｉｓｕｆｆｅｒＨ７．５ａｎｄＨ８．０ｗｅｒｅｃｌｅａｒｔｒａｎｓａｒｅｎｔｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆ２５℃ｆｏｒ７ｄ．Ｔｈｅｌｂ　　　　　　　　　　　　　　－ＨＣ　ｐｐｐｐ．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｈＦＧＦ２１ｉｓｕｒｉｔｏｆｒｈＦＧＦ２１ｈａｄｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｃｈａｎｅａｆｔｅｒｒｅｅａｔｅｄｗｉｔｈｆｒｅｅｚｅｔｈａｗｉｎＰ＜０　ｒ　　　　　　　　ｐｙｇｇｐｇ（　

，ａｓｔａｂｌｅｗｈｅｎｄｅｏｓｉｔｅｄａｔｌｏｗｔｅｍｅｒａｔｕｒｅａｎｄＨ６．５－８．０ｎｅｕｔｒａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｈｉｈｔｅｍｅｒａｔｕｒｅｃｉｄｉｃａｎｄｂａｓｉｃ　　　　　　　　　　　　ｐｐｐｇｐｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｒｅｈａｒｍｆｕｌｆｏｒｔｈｅｓｔａｂｉｌｉｔｏｆｒｈＦＧＦ２１．ＩｔｉｓｒｏｆｉｔｆｏｒｒｈＦＧＦ２１ｓｔａｂｉｌｉｔｉｎｓｏｄｉｕｍｄｉｈｄｒｏｅｎ　　　　　　　　　　　　ｙｐｙｙｇ　　ｈｏｓｈａｔｅｂｕｆｆｅｒ．ＴｈｅｒｅｉｓｉｍａｃｔｏｎｒｈＦＧＦ２１ｓｔａｂｉｌｉｔａｆｔｅｒｆｒｅｅｚｅｔｈｒａｗｉｎｒｅｅａｔｅｄｌ．　　　　　　　ｐｐｐｙｇｐｙ　　

：；ｓ；ｐＫｅｗｏｒｄｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ２１；ｐｕｒｉｔｔａｂｉｌｉｔｈｓｉｃａｌａｎｄｃｈｅｍｉｃａｌｆａｃｔｏｒｓ　　　　　　　　ｇｙｙｙｙ

ｂｒｏｂｌａｓｔｒｏｗｔｈ１（ｆｉ　　成纤维细胞生长因子２　ｇ

）是最新被发现的一个成纤维细ｆａｃｔｏｒ２１，ＦＧＦ２１　胞生长因子家族的成员，属于成纤维细胞生长因子ｂｒｏｂｌａｓｔｒｏｗｔｈａｃｔｏｒ９，ＦＧＦ１９）亚１９（ｆｉ　ｆ　１　ｇ

］３１－。Ｆ族［ＧＦ２１作为ＦＧＦ家族的新成员，其具有

］４］５６－。研究［显示：Ｆ多种内分泌功能［ＧＦ２１的

０．５ｇ·Ｌ－１，醋酸－醋酸钠缓冲液ｐＨ４．０和ｐＨ　

．０、柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液ｐ．０、Ｈ５．０和ｐＨ６５　　磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液ｐ．５Ｈ６．０、ｐＨ６　　和ｐｌ缓冲液ｐＨ７．０及ＴｒｉｓＨ７．０，．５和ｐＨ８－ＨＣ　　　分别于每７ｄ取３支样品观察ｒＧＦ２１原液的外ｈＦ观性状变化并对其纯度进行测定。

ＧＦ２１纯度检测　将一定ｈＦ１．４　反复冻融处理后ｒ数量ｒＧＦ２１原液于－２°Ｃ冻存，每日固定时间０ｈＦ将其融化，然后置于－２°Ｃ冻存，如此重复持续０，每３ｄ观察ｒｈＦＧＦ２１原液外观性状的变化并１２ｄ

对其纯度进行测定。

Ｓ１３．０统计软件进行ＰＳ１．５　统计学分析　采用Ｓ　

数据处理。ｓ表示，ＧＦ２１纯度检测结果以ｘ±ｒｈＦ多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用单因素方差分析。２　结　果

５０×４．６ｍｍ，２．１　色谱条件　色谱柱为Ｃ１８柱（２

；流动相：Ａ相为０５μｍ）．１％三氟乙酸－注射用水；Ｂ相为Ａ甲醇，Ｃ和Ｄ相均为水；流速

－１

；检测波长２Ｌ·ｍｉｎｍ；平衡用１０．５ｍ８０ｎ００％

Ａ泵液体至基线稳定，洗脱采用不同浓度梯度

功能主要表现在糖脂代谢的调节上，其可以不依赖于胰岛素而使血糖降低，同时可以调节脂质代谢，缓解脂肪肝动脉粥样硬化。近年来在国际上２１已成为糖尿病、脂肪肝、肥胖症和代谢综ＦＧＦ

合征等代谢疾病研究的热点药物，未来有可能替代

］７９］８－。最新研究［表胰岛素成为治疗糖尿病的新药［

明：ＦＧＦ２１能够保护心肌细胞免受氧化应激带来的损伤。美国Ｌｌ２１的Ⅱ期临床ｉｌＧＦｙ公司已开展Ｆ

１０］

。但对重组人Ｆ观察［２１（ｒｈＦＧＦ２１）的稳定ＧＦ

性研究目前未见报道。本实验利用已构建的高表达

２１蛋白基因工程菌株，经发酵纯化后，获得ＦＧＦ

［１］１２－，对其稳定性做进一步纯度大于９５％的蛋白１观察和测定，以便为制定ｒＧＦ２１的质量标准提ｈＦ供依据，也可为其他蛋白质类药物的开发和生产提供有益参考。１　材料与方法

１．１　主要试剂和仪器　三氟乙酸和乙腈均为色谱

纯；其他试剂均为分析纯；ｒＧＦ２１原液由吉林ｈＦ医药学院王会岩博士提供，纯度＞９９％。高效液相色谱仪（９５，紫外检测器，美国Ｗｅｒｓ公Ｅ２６ａｔ

。司）

１．２ＧＦ２１纯度检测　将一定数量ｈＦ　不同温度时ｒ的样品放置于２０℃下保存，对４℃５℃、４℃和－２和２５℃样品每周取样品若干支进行外观形状观察和ＨＰＣ法检测ｒＧＦ２１纯度，－２０℃样品保存ＬｈＦ１２个月，每６个月取样品３支进行检测，同时观察外观性状。

ＧＦ２１纯度检测１．３　不同缓冲体系和ｐＨ值时ｒｈＦ

·Ｌ－１，蛋白水平为ｏｌ０ｍｍ　缓冲体系终浓度为２

ＦＧＦ２１原液Ａ泵逐级洗脱，进样量１０μＬ。ｒｈ

ＨＰＬＣ色谱图见图１。ＧＦ２１的纯度　２２．２　不同温度时ｒｈＦ５℃时，存放

１５．２０％±０．１４％）较０ｄ１４ｄ时ｒｈＦＧＦ２１纯度（时（１００．００％±０．００％）下降，两者比较差异有统。４℃时，存放３计学意义（Ｐ＜０．０５）５ｄ时ｒｈＦＧＦ２１纯度下降至（３０±０．３９）％，与对照８９．

。－２组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）０℃时，存放６个月时ｒＧＦ２１纯度下降至（１０±９９．ｈＦ

）Ｐ＞０．３９％，与对照组比较差异无统计学意义（）；存放１０．０５２个月时ｒＧＦ２１纯度下降至ｈＦ

）（３０±０．３９％，与对照组比较差异有统计学意９５．）。义（Ｐ＜０５．０

５０８

医学版）　第４吉林大学学报（１卷　第３期　２０１５年５月

３　讨　论

随着基因工程技术的发展，在临床治疗上蛋白质药物已得到大量应用，然而由于蛋白质稳定性不好，易失去活性，了部分蛋白质药物的应用。众所周知，蛋白质在水溶液中稳定性较差，这是由于蛋白质在水溶液中容易发生物理或化学方面的某些变化。某些物理因素如温度、离子强度、涡流、表面吸附和化学降解及修饰作用等均会增加疏水表面积从而影响蛋白质的聚合行为，导致蛋白质的活性降低甚至消失、溶解性的降低和免疫原性的改

］１５１３］１４－。最新研究［表明：聚乙二醇变［

图１　ｒｈＦＧＦ２１原液ＨＰＬＣ色谱图

Ｆｉ．１　ＨＰＬＣｃｈｒｏｍａｔｏｒａｍｏｆｒｈＦＧＦ２１ｏｒｉｉｎａｌｆｌｕｉｄ　　　　ｇｇｇ

，Ｐ（ｌｃｏｌＥＧ）修饰、ｐＨ值敏感型ｈｌｅｎｅｏｌｅｔ　ｇｙｙｐｙ

聚合物水凝胶等均可提高蛋白质的稳定性。

虽然温度是影响蛋白质和多肽稳定性最重要的因素，但其影响机理尚未明确。通常认为：温度越高，蛋白质的稳定性越差。本研究中ｒＧＦ２１在ｈＦ水溶液中随着温度的升高稳定性下降，可能是由于高温使其化学降解过程加速。由于蛋白质在胞内处于中性环境中，非常稳定。但当纯化后在水溶液中稳定性较差。本研究结果显示：ｒＧＦ２１的稳定ｈＦ性在ｐ．０溶液中优于酸性或碱性溶液，Ｈ６．５～８　

而且表现出酸性越强其稳定性越差的趋势，极端的Ｈ值会降低盐桥的形成能力，从而导致其稳定性ｐ

上的降低。

１６］

。本一些蛋白质对溶液的反复冻融很敏感［

２．３　不同缓冲体系和ｐＧＦ２１纯度　Ｈ值时ｒｈＦ２５℃条件下ｒＨ值的缓冲体系中ＧＦ２１在不同ｐｈＦ

保存７ｄ后，ｐ０和ｐＨ５．０的醋酸－醋酸钠缓Ｈ４．　　冲液出现浑浊，ｒＧＦ２１纯度分别下降至ｈＦ）（６０±０．１２％和（４５．６０±０．３０）％；ｐＨ５．０３０．　和ｐＨ６．０柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液出现浑浊，纯度　））降至（９０±０．９０％和（６５．９０±０．８２％；ｐＨ５５．

Ｈ７．０磷酸氢二钠和磷酸二氢钠６．０、ｐＨ６．５和ｐ　　缓冲液中，ｐ１０±Ｈ６．０缓冲液浑浊，纯度为（７１．　

）Ｈ７．０磷酸氢二钠和磷酸二０．６５％，ｐＨ６．５和ｐ　　氢钠缓冲液澄清透明，纯度为（１０±０．４５）％７５．和（Ｈ８．０Ｔｒｉｓ８０．５０±０．０２）％；ｐＨ７．５和ｐ－　　ＨＣｌ缓冲液中，ｐＨ７．５缓冲液澄清透明，纯度为　

）（５０±０．２２％和（７８．４０±０．３７）％。以上不同８１．Ｈ值的缓冲液保存后，与对照组ｐ

（比较，ｒ．００％±０．００％）ｈＦＧＦ２１纯度差异均１００）。有统计学意义（Ｐ＜０．０５２．４　反复冻融后ｒＧＦ２１的纯度　ｒＧＦ２１原ｈＦｈＦ液反复冻融后，肉眼观察的结果和纯度检测一样，０～３ｄ瓶内液体仍澄清，无不溶物出现，反复冻

）融３ｄ后，ＦＧＦ２１纯度［（９０．８０±０．０１％］与ｒｈ，（对照组［０ｄ．００±０．００）％］比较差异无统１００

；６～１计学意义（Ｐ＞０．０５）２ｄ时，发现肉眼可见的不溶物；反复冻融６、９和１ｈＦＧＦ２１２ｄ后ｒ纯度分别为（８０±０．０１）％、（８２．５±０．０２）％９０．

））比较差异有和（７０．６±０．０２％，与对照组（０ｄ）。统计学意义（Ｐ＜０．０５

研究中ｒＧＦ２１对冻融非常敏感，在以后的生产ｈＦ中要尽量避免反复冻融。

综上所述，ｒＧＦ２１于低温和ｐ．０Ｈ６．５～８ｈＦ　接近中性条件下呈现出较好的稳定性。而高温、偏酸性和偏碱性条件对ｒＧＦ２１的稳定性不利。磷ｈＦ酸盐缓冲液对ｒＧＦ２１稳定性呈现出较好的作用。ｈＦ反复冻融处理对ｒＧＦ２１稳定性具有明显的影响。ｈＦ本实验结果将为ｒＧＦ２１纯化工艺的研究、ｈＦＧＦ２１质量标准制定和蛋白质药物制剂开发提ｒｈＦ

供依据。

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ａｄｄｉｔｉｖｅｓｆｏｒｔｈｅｒｅｖｅｎｔｉｏｎｏｆｒｏｔｅｉｎａｒｅａｔｉｏｎ［Ｊ］．　　　　　　ｐｐｇｇｇ，２）：ＢｉｏｈｓＪ００４，８７（３１９．１６３１６３　－ｐｙ

［］Ｓ１４ｏｎＬＴ，ＺｈｕＬ，ＨｕａｎＦ，ｅｔｌ．Ａｏｌｉｄｅｈａｓ－　Ｙ　ａ　ｓｇｇｐ　　Ｚ

ＰＥＧｌａｔｉｏｎｓｔｒａｔｅｆｏｒｒｏｔｅｉｎｔｈｅｒａｅｕｔｉｃｓｕｓｉｎａｐｏｔｅｎｔ　　　　ｙｇｙｐｐｇ　　］，２）：ＦＧＦ２１ａｎａｌｏＪ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ０１４，３５（３５５．５２０６２１－ｇ［［］Ｈ１５ｕａｎＺＦ，ＮｉＣＹ，ＺｈｏｕＸ，ｅｔａｌ．ＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＨ　　　　　　ｇｐ　

ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｏｌｍｅｒｉｓｔｅｄｒｏｔｅｉｎｒｅｆｏｌｄｉｎａｎｄｉｔｓａｌｉｃａｔｉｏｎａｓｓ　　　　　　－ｐｙｐｇｐｐ　，２ｉｎＴＧＦｂ２［Ｊ］．ＢａｎｄＦｏｔｅｃｈｎｏｌｒｏ００９，ｅｔｉ　－－　ａ　ＫＧ　Ｐｇ）：１３９２５（５１３８７５．－［］冯小黎，金业涛，苏志国．一个新的代谢调节因子－成纤维细１６

）：］胞生长因子２７０，２０（３６７１［Ｊ．生物工程进展，２００１．－ｉｖｉａｒｏｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ２１ｏｎｃｅｌｌｄａｍａｅｎｉｔｎｎｄａ　　　　　　　　　ｇｇ

］，２：９Ｊ．Ｃａｖｏ［ｎＪＰｈｓｉｏｌＰｈａｒｍａｃｏｌ０１４，９２（１１）２７ｖｉ－　　　ｙ９３５．

［］Ｆ，ｅ７ｉｓｈｅｒＦＭ，ＣｈｕｉＰＣ，ＡｎｔｏｎｅｌｌｉｓＰＪｔａｌ．Ｏｂｅｓｉｔｉｓａ　　　　　ｙ　

ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ２１（ＦＧＦ２１）－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｓｔａｔｅ［Ｊ］．　　　　ｇ，２）：９．Ｄｉａｂｅｔｅｓ０１０，５９（１１２７８１２７８－［］Ｚ，Ｌ８ｈａｎＪｉＹ．Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ２１，ｔｈｅｅｎｄｏｃｒｉｎｅ　　　　　ｇｇ　

ＦＧＦａｔｈｗａｎｄｏｖｅｌｒｅａｔｍｅｎｔｓｏｒｅｔａｂｏｌｉｃ　ｐ　ｎ　ｔ　ｆ　ｍｙ　ａ］，２）：ｓｎｄｒｏｍｅ［Ｊ．ＤｒｕＤｉｓｃｏｖＴｏｄａ０１４，１９（５５７９５８９．　－ｙｇｙ　［］韩苗苗，王文飞，任桂萍，等．Ｆ９２ＦＧ１对Ｈ２Ｏ－２诱导的大鼠

］心肌细胞Ｈ２氧化应激损伤的保护作用［Ｊ．药学学报，９ｃ）：４，４９（４４７０２０１４７５．－［］杜　娟，陈汝贤．成纤维细胞生长因子２１０１在动脉粥样硬化