氨基醇酰化方法[发明专利]

[12]发明专利申请公开说明书

[21]申请号99800748.X

[51]Int.CI7

C07H 15/10C07C 233/02A61K 7/00A61K 31/70

[43]公开日2000年11月1日[22]申请日99.5.7

[21]申请号99800748.X

[11]公开号CN 1272112A

[74]专利代理机构中国国际贸易促进委员会专利商标

事务所

代理人周中琦

[30]优先权

[32]1998.05.14 [33]EP [31]982017.9[86]国际申请PCT/EP99/03250 1999.05.07[87]国际公布WO99/582 EN 1999.11.18[85]进入国家阶段日期[71]申请人DSM公司

地址荷兰海尔伦

[72]发明人P·G·韦伯 E·迪沃鲁姆

2000.01.14

权利要求书 2 页 说明书 11 页

[]发明名称

氨基醇酰化方法

[57]摘要

本发明公开了使用酰基卤素形式有机酸的改进的氨基醇N－酰化方法,其中酰化作用在另外存在水的情况下在有机溶剂中发生。

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权 利 要 求 书

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1.一种制备N-酰化氨基醇的方法，包括用具有化学式R-100H的有机酸使氨基醇或其盐N-酰化，

其中R是氢；选择性地非饱和的、选择性地取代的、选择性地含有一个或多个杂原子的有低于55个碳原子的直链或支链烷基；选择性地非饱和的、选择性地取代的、选择性地含有一个或多个杂原子的C5-8环烷基；选择性地取代的芳基或杂芳基；或选择性地取代的苯甲基， 有机酸以酰基卤素形式存在，其中连接(N-酰化作用)在另外存在水的情况下在有机溶剂中发生。

2.根据权利要求1所述的制备N-酰化氨基醇的方法，包括以下步骤：

在相对于1倍体积有机溶剂存在0.01-10倍体积水的情况下，将氨基醇或其盐悬浮或溶解于有机溶剂。

将有机酰基卤素以纯化合物或者以溶液或悬浮液形式加入用于悬浮氨基醇的有机溶剂中，同时将pH保持于5-12范围内的数值， 搅拌所形成的混合物直至氨基醇转化为N-酰化化合物， 从有机相回收N-酰化氨基醇。

3.权利要求2的方法，其中将pH保持于6-11的数值。 4.权利要求1-3的方法，其中酰基卤素在有机溶剂中原位形成。 5.权利要求1-4的方法，其中酰基卤素是酰基氯。

6.权利要求1-5的方法，其中通过有机酰基卤素R基因上的相应卤素取代基提供N-酰化氨基醇的N-酰基上的烃基取代基，上述卤素取代基在连接后转化成氧功能基团，而所述氧功能基团随后转化成烃基取代基。

7.权利要求1-6的方法，其中有机溶剂是卤代烃、酯、醚、酮、链烷、芳香烃或芳香醇。

8.权利要求7的方法，其中有机溶剂是不以任何混合比与水混溶的溶剂。

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9.权利要求7或8的方法，其中有机溶剂是甲酸、乙酸或丙酸的烷基酯，烷基是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或异丁基。 10.权利要求9的方法，其中有机溶剂是乙酸乙酯、乙酸异丙酯或乙酸丁酯。

11.权利要求1-10的方法，其中氨基醇是具有以下化学式的鞘氨醇碱：

R′-A-CH(OR)-C(NH2)-CH2-OR″ 其中：

R′是有10-22个碳原子的直链或支链烷基，可以选择性地包含一个或多个双键和/或可以选择性地用一个或多个羟基取代，优选地是有12-18个碳原子的直链烷基，更优选地是有13个碳原子是直链烷基，并且

R″是氢或烃如己糖或戊糖部分(选择性地与另一烃部分连接)，优选地是氢或葡萄糖或半乳糖部分， A是CH2-CH2，CH＝CH或CH2-C(H)OR R

，并且

是氢或有1-3个碳原子的酰基，优选地是氢或乙酰基。

12.权利要求11的方法，其中鞘氨醇碱是二氢鞘氨醇、鞘氨醇或植物鞘氨醇。

13.用权利要求11或12的方法制备的N-酰化氨基醇的用途，用于化妆品或药物组合物。

14.根据权利要求13所述的用途，其中药物组合物是皮肤学组合物。

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说 明 书

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氨基醇酰化方法

发明领域

本发明涉及氨基醇酰化作用领域。 发明背景

神经酰胺(ceramide)是皮肤上层角质层的主要脂成分。此皮肤层有重要的屏障功能，即外界化合物通常被挡在外面同时控制了皮肤的水分丢失。神经酰胺例如因为其对皮肤的保湿效应而应用于化妆品。 通常，用于化妆品的神经酰胺从天然来源得到，或者通过化学合成途径或借助发酵和化学合成结合的方法得到，优选后一种途径，因为潜在有害的感染因子可能存在于哺乳动物来源中。

各种合成神经酰胺的方法在本领域已知。最频繁使用的方法涉及鞘氨醇碱(sphingoid base)和适当脂肪酸成分作为起始材料。由此将脂肪酸成分通过酰胺键与鞘氨醇碱的氨基连接。

WO 93/20038描述了氨基醇的酰化作用，其中脂肪酸与作为混合酐的氨基连接。对于此反应，必须使用在基本上无水条件下形成的混合酐。

Philippe等(Int.J.Cosm.Sci.17，133-146，1995)描述了一种酰化方法，其中使用四氢呋喃(TNF)作为溶剂并使用三乙胺作为有机碱将脂肪酸与作为酰基卤素(acid halogenide)的氨连接。在此方法中，连接反应也在非水环境下发生。

在那些一种或两种起始化合物作为含水物质传递的情况下，对非水条件的需求是重要的缺点。例如，在鞘氨醇碱包含在源于微生物发酵方法的湿晶体饼内的情况下就是这样。

上述方法的另一缺点是它们只产生中等产量。

也已知另一种使用溶剂系统的酰化方法，其中THF与等体积50％NaAc溶液混合(见EP 212400)。尽管水存在于此系统中，但也需

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要高盐浓缩液的存在。高盐溶缩液是不利的，因为它是昂贵的并且增加废料。

因此，因此需要应用一种酰化方法，其中鞘氨醇碱反应不需要在基本上不含水的条件下进行，另外不需要高盐浓缩液，并且此方法能得到比目前已知方法更高的产量。 发明描述

本发明公开了使用酰基卤素形式脂肪酸的氨基醇酰化方法，其中连接反应在另外存在水的情况下在有机溶剂中发生。

水存在于反应物中的事实有几个重要优点。例如，不必须在将氨基醇用于酰化过程之前干燥氨基醇。在氨基醇如鞘氨醇碱借助微生物发酵得到或作为水性环境中发生的反应产物得到时，这一点尤为有利。另外，操作的pH可以使用简单矿物碱如NaOH有效地控制，而不需要潜在有害的有机碱。

本发明方法也不需要象EP 212400中公开的方法那样使用高盐浓缩液，更不需要象WO 93/20038中公开的方法那样使用化学计量数量的辅助化学品。另一重要优点是通过用水简单洗有机相然后通过共沸去除水并结晶从有机相回收酰化反应产物。出乎意料地，本发明方法以比WO 93/20038中或Phlilippe等得到的产量高得多的产量提供酰化氨基醇。另外，产品纯度高，即不含有不利的副产品，因为O-酰化仅有非常小程度的发生。

在本发明方法中，用具有化学式RCOOH的有机酸酰化氨基醇，有机酸以酰基卤素形式存在，所述方法包括以下步骤：

在相对于1倍体积有机溶剂存在0.01-10倍体积水的情况下，将氨基醇或其盐悬浮或溶解于有机溶剂中。

将有机酰基卤素以纯化合物或者以溶液或悬浮液形式加入用于悬浮氨基醇的有机溶剂中，同时将pH保持于约5-12范围内的数值， 搅拌所形成的混合物直至氨基醇转化为N-酰化化合物， 从有机相回收N-酰化氨基醇。

在具有化学式RCOOH的有机酸中，R是氢；选择性地非饱和

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的、选择性地取代的、选择性地含有一个或多个杂原子的有低于55个碳原子的直链或支链烷基；选择性地非饱和的、选择性地取代的、选择性地含有一个或多个杂原子的C5-8环烷基；选择性地取代的芳基或杂芳基；或选择性地取代的苯甲基。

在本发明优选实施方案中，烷基中选择性地插入氧原子或内部酯基。在本发明另一优选实施方案中，烷基有1-50个碳原子、更优选地10-50个碳原子、最优选地15-45个碳原子。 上述基团的优选取代基是羟基，特别是α-羟基。

在本发明优选实施方案中，具有化学式RCOOH的有机酸是己酸、辛酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、27-硬脂酰氧-二十七碳酸、27-亚油酰氧-二十七碳酸、α-烃基硬脂酸、乳酸、视黄酸。水杨酸或阿魏酸。

任意烃基的保护基团在本领域内众所周知，并且可以从Greene，T.(1981)有机合成中的保护性基团(John Wiley&Sons；New York)中公开的适当基团中选取。在本发明的一个实施方案中，羟基以乙酯或甲氧基甲酯形式得到保护。

在本发明的另一实施方案中，通过首先连接在对应于未来烃基处含有卤素基团的酰基卤素，随后在连接后将卤素基团转化为氧功能基团(oxygen function)如乙酸基提供羟基。卤素基团向氧功能基团的转化和随化氧功能基团向羟基的转化使用常用方法方便地实现。优选地，卤素基团是溴基团。

本发明也包括使用相关有机酸的混合物的选择，例如带有具不同链长和/或不同非饱合程度的烷基的脂肪酸混合物。

在本发明另一优选实施方案中，氨基醇是具以下化学式的鞘氨醇碱或其盐：

R′-A-CH(OR)-C(NH2)-CH2-OR″ 其中：

R′是有10-22个碳原子的直链或支链烷基，可以选择性地包含一个或多个双键和/或可以选择性地用一个或多个羟基取代，优选地是

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有12-18个碳原子的直链烷基，更优选地是有13个碳原子是直链烷基，并且

R″是氢或烃如己糖或戊糖部分(选择性地与另一烃部分连接)，优选地是氢或葡萄糖或半乳糖部分， A是CH2-CH2，CH＝CH或CH2-C(H)OR R

，并且

是氢或有1-3个碳原子的酰基，优选地是氢或乙酰基。

用于本发明方法的鞘氨醇碱优选地是二氢鞘氨醇(sphingosine)、鞘氨醇(sphinganine)或植物鞘氨醇(phytosphingosine)。更优选地，鞘氨醇碱是植物鞘氨醇。

在本发明特别优选的实施方案中，植物鞘氨醇通过来自微生物发酵例如酵母Pichia ciferri的四乙酰植物鞘氨醇的脱乙酰化得到。也可以使用通过四乙酰植物鞘氨醇的部分脱乙酰化得到的乙酰植物鞘氨醇。本发明有利地允许植物鞘氨醇或部分脱乙酰化的乙酰植物鞘氨醇直接用于本发明的酰化方法，而不需使用中间的回收和/或干燥步骤。 对于鞘氨醇碱的盐类，优选的是盐酸或硫酸盐类。 用于连接反应的有机溶剂可以是任何引起氨基醇充分溶解的溶剂，即完全溶解或溶解到使氨基醇随后与酰基卤素充分反应。优选地，有机溶剂是卤代烃、酯、醚、酮、链烷、芳香烃或芳香醇。更优选地，有机溶剂是不引起过氧化物形成的溶剂。甚至更优选地，有机溶剂是不以任何混合比与水混溶的溶液。甚至更优选地，有机溶剂是甲酸、乙酸或丙酸的烷基酯，烷基是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或异丁基。最优选地，有机溶剂是乙酸乙酯、乙酸异丙酯或乙酸丁酯。使用乙酸的熔基酯有优点，即这些溶剂容易从操作中回收并选择性地再利用，它们是廉价的并且无过氧化物前体。

在本发明方法中，将氨基醇在另外存在水的情况悬浮于有机溶剂中。水可以在将氨基醇悬浮于有机溶剂的过程中或之后加入或可以源于氨基醇来源，或者两种情况都可。可以存在于氨基醇在有机溶剂中的悬浮液或溶液中的水量可以是有机溶剂体积的0.01-10倍。优选地，水量是有机溶剂体积的0.1-0.5倍。水量的上限通常将根据技术原理

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决定，例如根据反应容器体积决定。

氨基醇存在于有机溶剂-水混合物中的浓度可以是1-900g/l，优选地25-250g/l。

在本发明方法随后的步骤中，在搅拌的情况下将酰基卤素加入氨基醇-有机溶剂-水混合物中，其中酰基卤素可以以纯化合物或以溶液或悬浮液形式加入用于悬浮氨基醇的有机溶剂中。

在本发明优选实施方案中，酰基卤素是酰基氯(acid chloride)。 本发明也包括通过使上述适当有机酸与卤化剂反应原位制备酰基卤素的选择。适当卤化剂是三氯化磷或亚硫酰氯。

通常以摩尔等量或比氨基醇量稍过量的摩尔量将酰基卤素加入氨基醇-有机溶剂-水混合物中。

当将酰基卤素加入氨基醇-有机溶剂-水悬浮液时，反应混合物的pH通过有地加入碱保持于5-12范围内、优选地6-11范围的数值。本发明有利地允许使用简单矿物碱如NaOH进行pH的控制。为了在连接过程中将pH保持在稳定水平，也可以加入诸如碳酸钠或碳酸钾的部分碱。

连接反应过程中的温度可方便地保持在允许混合物充分搅拌的数值。连接过程中的温度也可能取决于所用溶剂的沸点。沸点越高，可以使用的温度越高。通常，对于制备具有低溶解度的N-酰化氨基醇如某些神经酰胺，温度保持在40-80℃的数值。

对反应混合物进行足够时间的搅拌以使氨基醇基本上完全地转化为N-酰化化合物。转化程度可用本领域众所周知的方法如薄层层析、NMR光谱、HPLC等检测。通常基本上完全的转化在约30-60分钟时间后得到。在没得到完全转化的情况下，可以加入额外的酰基氯。 在本发明的一个实施方案中，将在连接步骤后、在与用于连接阶段的溶剂相同的有机溶剂中将存在于有机酸RCOOH的R基团上的卤素取代基转化为氧功能基团。

使用标准技术从有机相回收本发明方法中制备的N-酰化氨基醇。回收过程通常是简单的过程，包括用水洗有机相并蒸馏出水-溶

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剂共沸物。

简而言之，完成反应后，将反应混合物的温度增加到正好在混合物沸点下的数值。除去水层并选择性地用水洗有机层。蒸馏出水-溶剂共沸物。选择性地，可以采用热过滤步骤以除去固体颗粒和/或采用活性碳处理以脱色。通过冷却和结晶产物过滤从有机相回收产物。 用本发明方法制备的N-酰化氨基醇优选地是神经酰胺、脑苷脂、视黄酰基-鞘氨醇碱、水杨酰基-鞘氨醇碱或短链α-羟基酰基-鞘氨醇碱。这些化合物优选地应用于化妆品或皮肤学组合物。 实施例1  N-硬脂酰基-植物鞘氨醇的制备

在装有机械搅拌器、pH电极、回流浓缩器和氮入口的加套1L反应器中于氮气条件下对50g植物鞘氨醇(纯度95.4％)、700ml乙酸异丙酯和100ml水的悬浮液进行搅拌，同时通过将50℃水泵过套中使反应混合物保持在50℃。用9.5ml 36％的盐酸将pH调节至7.1。在连接过程中，如果需要，可借助pH控制系统和电子管通过加入25％氢氧化钠将pH保持在7+/-0.2。 在小时时期内，在将温度保持在50℃的同时，从滴液漏

斗加

入55ml(48.42g)硬脂酰氯和50ml乙酸异丙酯的混合物。得到悬浮液。用25ml乙酸异丙酯洗滴液漏斗。于50℃连续搅拌0.5小时。TLC(使用氯仿/甲醇：9/1作为洗脱液，乙醇中的5％phosphormolybdenicacid用于脂类检测)表明不存在植物鞘氨醇。

通过将水温提高到80℃将混合物加热至77℃，并且停止搅拌以使之分层。移出水层以及一些中间层。用100ml水于77℃搅拌有机层并使之分层。将水层与开始的水层混合并用50ml乙酸异丙酯热抽提。将有机层加入开始的有机层并蒸馏出混合物，同时在移出水层之后将蒸馏物返回反应器。在约0.5L蒸馏物后，液体温度变为82℃(蒸气72℃)并且移出26ml水。

在轻轻搅拌的同时让混合物过夜冷却至19℃，然后通过玻璃(G4)滤器过滤。在用于放回滤饼的部分中用200ml乙酸异丙酯洗反应器。用另外100ml乙酸异丙酯洗滤饼，并且在35℃气流下干燥湿滤

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饼(198g)。于40℃真空下进一步干燥，得到87.5g N-硬脂酰基-植物鞘氨醇。产率是91％。实施例2  N-硬脂酰基-植物鞘氨醇的制备

在装有机械搅拌器、pH电极、回流浓缩器和氮入口的加套1L反应器中于氮气条件下对50g植物鞘氨醇、750ml乙酸异丙酯和100ml水的悬浮液进行搅拌，同时通过将50℃水泵过套中使反应混合物保持在50℃。在连接阶段，如果需要，可借助pH控制系统和电子管通过加入25％氢氧化钠将pH保持在7。 在小时时期内，在将温度保持在50℃的同时，从滴液漏

斗加

入55ml(48.42g)硬脂酰氯和50ml乙酸异丙酯的混合物。在加入约40ml混合物时，pH下降到7并且开始pH控制。用5ml乙酸异丙酯洗滴液漏斗。于50℃连续搅拌0.5小时并且TLC表明不存在植物鞘氨醇。 通过将水温提高到80℃将混合物加热至76℃，并且停止搅拌以使之分层。移出水层以及一些中间层。用100ml水于80℃搅拌有机层并使之分层。用100ml乙酸异丙酯热抽提水层。将有机层加入开始的有机层并蒸馏出混合物，同时在移出水层之后将蒸馏物返回反应器。在约0.4L蒸馏物后，液体温度变为84℃并且移出了2ml水。 在轻轻搅拌的同时让混合物过夜冷却至19℃(于78℃开始结晶)，然后通过玻璃(G3)滤器过滤。在用于放回滤饼的部分中用乙酸异丙酯洗反应器(共300ml)。35℃气流下干燥湿滤饼(156g)。真空下进一步干燥，得到88g纯度98％的N-硬脂酰基-植物鞘氨醇。产率是98％。实施例3 N-油酰基-植物鞘氨醇的制备

在装有机械搅拌器、pH电极、回流浓缩器和氮入口的加套1L反应器中于氮气条件下对50g植物鞘氨醇、750ml乙酸异丙酯和100ml水的悬浮液进行搅拌，同时通过将50℃水泵过套中使反应混合物保持在50℃。用10ml 36％的盐酸将pH调节至7。在连接阶段，如果需要，可借助pH控制系统和电子管通过加入25％氢氧化钠将pH保持在7。 在1.25小时时期内，在将温度保持在50℃的同时，从滴液漏斗

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加入55ml油酰氯和50ml乙酸异丙酯的混合物。用5ml乙酸异丙酯洗滴液漏斗。于50℃连续搅拌0.5小时并且TLC表明不存在植物鞘氨醇。 通过提高水温将混合物加热至76℃，并且停止搅拌以使之分层。移出水层以及一些中间层。用100ml水于76℃搅拌有机层并使之分层。蒸馏出混合物，同时将蒸馏物的有机层返回反应器。在液体温度变为84℃后，在轻轻搅拌的同时使混合物冷却至12℃(于46℃开始结晶)，然后通过玻璃(G3)滤器过滤。在用于放回滤饼的部分中用乙酸异丙酯洗反应器(共300ml)。

在35℃气流下干燥湿滤饼(224g)。于40℃真空下进一步干燥，得到81.5g纯度98％的N-油酰基-植物鞘氨醇。产率是91％。实施例4 N-α-羟硬脂酰基-植物鞘氨醇的制备

在将反应混合物保持在71℃的同时在装有机械搅拌器、pH电极、回流浓缩器和氮入口的1L3-颈瓶中于氮气条件下对50g硫酸植物鞘氨醇、500ml乙酸正丁酯和25ml水的悬浮液进行搅拌。

在连接阶段，如果需要，借助Mettler DL21滴定器通过加入25％氢氧化钠将pH保持在8.5。用11ml 25％NaOH对混合物进行预滴定以将pH从约3.2变成约8。然后加入2.7g碳酸钠并且将pH变为约9。

在约55分钟时间内从滴液漏斗加入50ml(60g)2-溴硬脂酰氯/溴和50ml乙酸正丁酯的混合物，使温度变成75℃。加到一半时开始形成沉淀，将温度提高到80℃以增加溶解度。在添加快结束时，形成更多的沉淀，并将温度提高到85℃。用20ml乙酸正丁酯洗滴液漏斗中。于85℃持续搅拌1小时。

然后在用Dean-Stark设备分离水层的同时，对混合物回流加热，并且在温度变到130℃时分离到78ml水层。在冷却到116℃之后，加入25g无水乙酸钾，并对混合物进行回流加热2小时，温度约129℃。放置过夜到室温之后，再持续回流加热1.5小时。

在将混合物冷却到100℃之后，加入200ml水，并且直到液体温度达到106℃才开始蒸馏出混合物。在蒸馏过程中，加入50ml水，同

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时收集到500ml蒸馏物。蒸馏物含有165ml水层和460ml有机层。加入500ml丁醇之后，又加入100ml水，并将混合物加热到约88℃。停止搅拌后，通过抽吸移出水层，用100ml水于约90℃洗有机相两次。最后的水层pH为5.7(体积分别为150、60和80ml)。接着通过加25％NaOH将pH保持在11-12。PH一直下降。约2小时后，共用去12ml25％NaOH，温度保持于约70-80℃。停止搅拌，通过抽吸移出40ml水层。蒸馏出有机层。在蒸馏期间，加入2部分丁醇。收集到总共190ml有机层和60ml水层蒸馏物。液温达到108℃。

使混合物冷却，并且于约46℃开始沉淀。持续搅拌和冷却2小时，最终温度是2℃。

过滤出沉淀，并且用250ml冷丁醇取出滤饼并吸干(总约20分钟)。

在500ml甲醇中加热湿滤饼，边加热(70℃)边通过滤纸过滤并用25ml甲醇洗。使滤液冷却并于约26℃开始结晶。进一步冷却到0℃。在0℃搅拌1小时之后，过滤出沉淀并250ml冷甲醇取出滤饼，快速过滤。湿滤饼在真空下于45℃干燥以得到60g产物。实施例5 N-辛酰基-植物鞘氨醇的制备

在通过将70℃水泵过套中使反应混合物保持在70℃的同时，在装有机械搅拌器、pH电极、回流浓缩器和氮入口的加套1L反应器中于氮气条件下对50g硫酸植物鞘氨醇、525ml乙酸异丙酯和75ml半水(demiwater)的悬浮液进行搅拌。

在连接阶段，如果需要，借助Mettler DL21滴定器通过加入25％(w/w)氢氧化钠将pH保持在8.5。用25％KOH将约4.5的起始pH变成约7.5并加入3.16g无水碳酸钾将pH变为约8.1。

在约3/4小时时间内，在温度保持在70℃的同时，从滴液漏斗加入20.55g辛酰氯和37ml乙酸异丙酯的混合物。用10ml乙酸异丙酯洗滴液漏斗中。于70℃持续搅拌。在搅拌0.5小时后，通过TLC检测到少量植物鞘氨醇，并且加入1ml辛酰氯。0.5小时后，植物鞘氨醇仍然存在并加入另外1ml辛酰氯。10分钟后停止反应并将混合物于室温放

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置放夜。

将混合物加热到70℃并加入另0.5ml辛酰氯。搅拌15分钟后，停止搅拌使之分层，固体存在于水层中并在加入100ml水之后溶解。10分钟后移出水层。用100ml水于71℃搅拌有机层并使之分层。移出水层。蒸馏出有机层，同时将蒸馏物的有机层返回反应器(Dean-stark设备)。当温度达到82.6℃时，水层是20ml。混合物含有13.3mg H2O/g。 持续搅拌的同时在约3/4小时内冷却至8℃，于约52℃开始结晶。于8℃持续搅拌0.5小时并使悬浮液通过玻璃滤器(G3，宽度10cm)过滤。在用于放回滤饼的3部分中用乙酸异丙酯洗反应器(共180ml)并将滤饼吸干直至几乎干燥。湿滤饼在真空下干燥以得到55g产物。实施例6  N-己酰基-植物鞘氨醇的制备

在通过将70℃水泵过套中使反应混合物保持在70℃的同时，在装有机械搅拌器、pH电极、回流浓缩器和氮入口的加套1L反应器中于氮气条件下对50g硫酸植物鞘氨醇、525ml乙酸异丙酯和75ml半水(demiwater)的悬浮液进行搅拌。

在连接阶段，如果需要，借助Mettler DL21滴定器通过加入25％(w/w)氢氧化钠将pH保持在8.5。用25％KOH将约4.5的起始pH变成约7.5并加入3.16g无水碳酸钾将pH变为约8.1。

在约3/4小时时间内，在温度保持在70℃的同时，从滴液漏斗加入19.26己酰氯和40ml乙酸异丙酯的混合物。用10ml乙酸异丙酯洗滴液漏斗中。于70℃持续搅拌。搅拌0.5小时后TLC表明无植物鞘氨醇，停止搅拌使之分层，固体存在于水层中并在加入50ml水之后溶解。10分钟后移出水层。用100ml水于71℃搅拌有机层并使之分层。移出水层。蒸馏出有机层，同时将蒸馏物的有机层返回反应器(Dean-stark设备)。当温度达到82.6℃时，水层是20.5ml。在保持温度的同时将溶液过滤并用40ml热乙酸异丙酯洗。滤液含有11.8mg H2O/g。这在室温下保持一周。

搅拌的同时将混合物加热至60℃以得到溶液。持续搅拌的同时冷却，于35℃开始结晶。在约1小时内连续搅拌并冷却到1℃。于1℃

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持续搅拌1小时后使悬浮液通过玻璃滤器(G3，宽度10cm)过滤。在用于放回滤饼的3部分中用冷乙酸异丙酯洗反应瓶(共200ml)并将滤饼吸干直至几乎干燥，完全过滤花费2.5小时。湿滤饼在真空下于49℃干燥以得到51g产物。

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