２０１４年３月第３４卷第３期文章编号：１００１．６３２５（２０１４）０３—０３０５—０５基础医学与临床Ｂａｓｉｃ＆ＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅＭａｒｃｈ２０１４Ｖ０１．３４Ｎｏ．３研究论文无雄激素条件下表皮生长因子诱导前列腺癌细胞系增殖及雄激素受体磷酸化孙雪飞悼，赵晖硝，李扬１，钱筠１，白雪燕１，周永建３，朱红１，张勇３，刘元波１’２４（首都医科大学附属北京天坛医院１．【血液肿瘤科；２．输血科；３．泌尿外科，北京，１０００５０）摘要：目的探讨在无雄激素的条彳，｜．］：，表皮，＃长因子对前列腺癌细胞增殖及雄激素受体磷酸化的影响。方法以ＬＮＣａＰ及ＩＡＰＣ４ＡＲ为研究对象，在尢雄激素的条件下，ＥＧＦ处理后，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ力‘法测定ＬＮＣａＰ及ＬＡＰＣ４ＡＲ磷酸化状态；ｓｉＲＮＡ转染方法敲除Ｓｒｃ基阂或Ａｃｋｌ基｜大ｌ，观察对ＡＲ磷酸化的影响；ＣＣＫ－８检测细胞增殖；定时定量ＲＴ—ＰＣＲ检测前列腺特异抗原及人体激肽释放酶２ｍＲＮＡ表达。结果ＥＧＦ通过Ｓｒｃ激酶和另一未知激酶导致ＡＲＴｙｒ－５３４及ＡＲＴｙｒ一２６７特异位点磷酸化；相比朱ＨｊＥＧＦ对照组，ＥＧＦ能够促进前列腺癌细胞增殖（Ｐ＜０．０５），增加前列腺特异抗原（Ｐ＜０．０５）及人体激肽释放酶２ｍＲＮＡ表达（Ｐ＜０．０５）。结论ＥＧＦ通过细胞内１Ｆ受体酪氨酸激酶使ＡＲ特异位点磷酸化，诱导前列腺癌细胞增殖。关键词：表皮生长因子；去势抵抗性前列腺癌；雄激素受体；酪氨酸激酶；磷酸化中图分类号：Ｒ７３７．２５文献标志码：ＡＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｎｄｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒＹａｎ９１，ＱＩＡＮａｔｔｈｅａｂｓｅｎｃｅｏｆａｎｄｒｏｇｅｎＹｏｎｇ－ｊｉａｎ３，ＳＵＮＸｕｅ—ｆｅｉ㈨，ＺＨＡＯＨｕｉ斗，ＬＩＪｕｎｌ，ＢＡＩＸｕｅ—ｙａｎ‘，ＺＨＯＵＺＨＵＨｏｎ９１，ＺＨＡＮＧＹｏｎ９３，ＬＩＵＹｕａｎ—ｂｏ。’２＋（１．Ｄｅｐｔ．ｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙａｎｄＯｎｃｏｌｏｇｙ；２．Ｄｅｐｔ．ｏｆＢｌｏｏｄＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ；３．Ｄｅｐｔ．ｏｆＵｒｏｌｏｇｉｃａｌＳｕｒｇｅｒｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＴｉａｎＴａｎＨｏｓｐｉｔａｌＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａ｜Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００５０，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｃａｎｃｅｒｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｎｄｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒＬＮＣａＰａｎｄＬＡＰＣ４ＡＲｗｅｒｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｓｔａｔｅｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅａｂｓｅｎｃｅｏｆａｎｄｒｏｇｅｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓｔｏｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｓｔｕｄｙ，ａｆｔｅｒＥＧＦｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗａｓｕｓｅｄＳｒｅａｎｄＡｃｋｌｇｅｎｅｓｗｉｔｈｓｉＲＮＡｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ；ＣｅｌｌＣｏｕｎｔｉｎｇｔｏｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔＡＲｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｉｎＬＮＣａＰａｎｄＬＡＰＣ４ｃｅｌｌｓ；ｔｏｋｎｏｃｋｅｄｄｏｗｎｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｎａｎｄｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｐｈｏｓ・ＲＴ—ＰＣＲｃａｎＫｉｔ一８（ＣＣＫ一８）ｗａｓｕｓｅｄｍｅａｓｕｒｅｔｈｅｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；Ｑｕａｎｔｉｔｉｖｅｗａｓｕｓｅｄａｎａｌｙｚｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｒｏｓｔａｔｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｇｅｎａｎｄｈｕｍａｎｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ一２ｍＲＮＡ．ＲｅｓｕｌｔｓａｔＥＧＦｉｎｄｕｃｅＡＲｓｐｅｃｉｆｉｃｓｉｔｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎＴｒｙ－５３４ａｎｄＴｒｙ－２６７ｂｙＳｒｃｋｉｎａｓｅａｎｄａｎｏｔｈｅｒｕｎｋｎｏｗｎｋｉｎａｓｅ；Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃａｎｃｅｒｕｎｔｒｅａｔｅｄｃｏｎｔｒｏｌ，ＥＧＦｅｎｈａｒｃｅｄｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｓｔａｔｅｐｒｏｓｔａｔｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｃｅｌｌｓ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃａｎａｎｔｉｇｅｎ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄｈｕｍａｎｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ－２（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＥＧＦｉｎｄｕｃｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ收稿日期：２０１３—０７—０５修回日期：２０１３—０９—２６基金项目：１日家ｒｊ然科学基金（８１２７２８４２，８１３０２５９４）’通信作者（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ）：ｙｂｌｉｕｌ９５５＠１６３．ｃｏｒｎ”对本文有相同贡献万方数据３０６基础医学与临床ｃａｎｃｅｒＢａｓｉｃ＆ＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ２０１４．３４（３）ａｎｄＡＲｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｓｔａｔｅｂｙｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｎｏｎ—ｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅｓｐｒｏｓｔａｔｅＫｅｙｗｏｒｄｓ：ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ；ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃａｎｃｅｒ；ａｎｄｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ；ｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅ；ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ前列腺癌的发生及发展与雄激素有密切关系，通过外科去势（ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ）或者药物从患者体内剔除雄激素是治疗前列腺癌的有效方法之一，但是，患者最终对该治疗失去作用并逐渐进展为去势抵抗性前列腺癌（ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒ，ＣＲＰＣ），其机制尚不完全明了。有研究表明，低睾酮环境下雄激素受体（ａｎｄｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＡＲ）激活在ＣＲＰＣ发病中起关键作用。１“１。在阉割动物，ＡＲ的过度表达具有促进前列腺癌移植瘤的形成作用，ＡＲ敲除后便抑制其肿瘤源性。２ｏ。ＡＲ激活可能存在多种机理，包括ＡＲ基因扩增，ＡＲ过度表达，ＡＲ点突变，ＡＲ共激活因子的过度表达以及肿瘤自身产生的雄激素等。５Ｊ。近年来有研究发现非雄激素依赖的细胞内信号传导导致ＡＲ磷酸化是ＡＲ激活的重要途径之一。３‘４・…。表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＧＦＲ）通过增加ＡＲ与性激素受体转录介导因子２（ｔｒａｎ—ｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｒｙｆａｃｔｏｒ２，ＴＩＦ２）的相互作用而增强ＡＲ的转录活性，人表皮生长因子受体２（ｈｕｍａｎｅｐｉｄｅｒｍａｌｒｅｃｅｐｔｏｒ２，ＨＥＲ２）通过增加ＡＲ蛋白稳定性及与ＤＮＡ结合力而激活ＡＲ的转录功能＂］。有研究报道在难治性前列腺癌中，表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）能够增加ＡＲ的活性呻］。本研究旨在探讨，在无雄激素的条件下，ＥＧＦ对前列腺癌细胞增殖及雄激素受体磷酸化的影响。１材料与方法１．１试剂ＥＧＦ（Ｒ＆Ｄ公司）；ＡＲＴｙｒ一２６７位点磷酸化特异性多克隆抗体及ＡＲＴｙｒ一５３４位点磷酸化特异性抗体（美国北卡罗来那大学综合肿瘤研究中心ＹｏｕｎｇＥ．Ｗｈａｎｇ教授惠赠）；鼠抗一ＡＲ单克隆抗体（Ｂｉｏｇｅｎｅｘ公司）。Ａｃｋｌ—ｓｉＲＮＡ、Ｓｒｃ—ｓｉＲＮＡ及阴性对照ｓｃｒａｍｂｌｅｄｓｉＲＮＡ（ＤｈａｒｍａｃｏｎＲＮＡＴｅｃｈ—ｎｏｌｏｇｉｅｓ）。１．２细胞及分组雄激素依赖性前列腺癌细胞系ＬＮＣａＰ与万方数据ＬＡＰＣ４（美国菌种保藏中心）；分组为ＥＧＦ处理组；ＤＨＴ处理组；对照组。１．３ＡＲ磷酸化在无雄激素环境下，ＥＧＦ（１００ｒｉｇ／ｍＬ）处理ＬＮＣａＰ或ＬＡＰＣ－４细胞６０ｍｉｎ，提取蛋白后Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ方法测定ＡＲＴｙｒ－２６７位点及Ｔｙｒ一５３４位点磷酸化状态。１．４转染及基因敲除利用转染试剂ｓｉＰｏｒｔＬｉｐｉｄ（Ａｍｂｉｏｎ公司），将１００ｎｍｏｌ／ＬＡｃｋｌ—ｓｉＲＮＡ或Ｓｒｃ—ｓｉＲＮＡ及阴性对照ｓｃｒａｍｂｌｅｄｓｉＲＮＡ转染进入ＬＮＣａＰ或ＬＡＰＣ－４细胞，２４ｈ后，给予ＥＧＦ处理。１．５细胞增殖实验将１０４个ｓ－Ｋ，的ＬＮＣａＰ或ＬＡＰＣ－４细胞培养于９６孔培养板，给予二氢睾酮（ｄｉｈｙｄｍｔｅｓｔｏｓｔｅｍｎｅ，ＤＨＴ１０ｎｍｏｌ／Ｌ）或ＥＧＦ（１００ｒｉｇ／ｍｌ。）培养３ｄ，按照ＣＣＫ一８说明书步骤检测细胞增殖情况。１．６定时定量ＲＴ－ＰＣＲＬＮＣａＰ及ＬＡＰＣ４细胞由ＥＧＦ或ＤＨＴ处理后，使用ＲＮｅａｓｙＭｉｎｉＫｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ公司）提取细胞总ＲＮＡ，采用ＴａｑｍａｎｕｎｉｖｅｒｓａｌＰＣＲ体系（ＡＢｌ）。引物及探针序列如下：ＰＳＡｍＲＮＡ上游，５７一ＧＧＣＡＧＣＡＴＦＧＡＡＣＣＡＧＡＧＧＡＧ一３’；ＰＳＡ下游，５７。ＧＣＡＴＧＡＡＣＴＦＧＧＴＣＡＣＣｒＦＦＣＴＧ一３’；ＰＳＡ探针，５’一６一ｒＡＭ—ＡＴＧＡＣＧＴＧＴＧＴＧＣＧＣＡＡＧ。１１１ＣＡＣＣＣ—ＢＨＱ一１—３７；ｈＫ２上游，５’一ＧＣＣＴＦＡＧＡＣＣＡＧＡＴＧＡＡＧＡＣＴＣＣＡ一３７；ｈＫ２下游，５７一ＧＣＣＣＡＧＧＡＣＣＴＦＣＡＣＡＡＣＡＴＣ一３’；ｈＫ２探针，５７－６一ＦＡＭ—ＴＣＡＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＣＴＣＣＧＣＣＴＧＴ—ＢＨＱ—ｌ一３’：ＧＡＰＤＨ上游，５’一ＧＴＣＡＴＧＧＧＴＣＴＧＡＡＣＣＡＴＧＡＧＡ一３’；ＧＡＰＤＨ下游，５’．ＧＧＴＣＡＴＧＡＧＴＣＣＴＴＣＣＡＣＧＡＴＡＣ一３’；ＧＡＰＤＨ探针，５７－６一ＦＡＭ．ＣＡＧＣＣＴＣＡＡＧＡＴＣＡＴＣＡＧＣＡＡＴＧＣＣＴＣ—ＢＨＱ一１—３７。ＧＡＰＤＨ为内参。１．７统计学分析数据均采用ＳＰＳＳ１３．０统计软件分析。经过Ｋｏｌｍｏｇｏｒｏｖ—Ｓｍｉｒｎｏｖ和Ｓｈａｐｉｒａ—Ｗｉｌｋ检验为正态性分布、方差一致的数据用均值±标准差（ｉ±Ｓ）表示，两组问比较采用样本ｔ检验。孙雪飞无雄激素条件下表皮生长因子诱导前列腺癌细胞系增殖及雄激素受体磷酸化２结果２．１３０７的ＡＲＴｙｒ．２６７位点磷酸化（图２Ｂ）。因此，ＥＧＦ是通过两条不同的途径导致两个不同位点的磷酸化：１）通过细胞内Ｓｒｃ激酶导致ＡＲＴｙｒ－５３４位点磷酸化；２）通过Ａｃｋｌ以外未知的细胞内激酶导致ＡＲＴｙｒ－２６７特异位点磷酸化。２．３在无雄激素的条件下，ＥＧＦ能够促进前列腺癌细胞增殖ＥＧＦ可诱导ＡＲ特异位点磷酸化在无雄激素环境下，ＥＧＦ可诱导ＬＮＣａＰ细胞及ＬＡＰＣ－４细胞ＡＲＴｙｒ－５３４和Ｔｙｒ－２６７位点磷酸化（图１）。２．２ＥＧＦ通过两条不同的途径导致ＡＲ两个不同通过ｓｉＲＮＡ转染方法敲除ＬＮＣａＰ细胞Ｓｒｃ基因位点的磷酸化在无雄激素的条件下，ＥＧＦ和ＤＨＴ处理的ＬＮＣａＰ细胞吸光度值均明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），ＬＡＰＣ－４细胞中也得到相似结果（图３）。２．４后，可有效抑制ＥＧＦ诱导的ＡＲＴｙｒ－５３４位点磷酸化（图２Ａ）。用同样方法敲除已知的引起ＡＲＴｙｒ－２６７ＥＧＦ促进前列腺癌细胞ＰＳＡ及ｈｋ２ｍＲＮＡ位点磷酸化的Ａｃｋｌ基因Ｈ】，却不能抑制ＥＧＦ诱导ＮＣａｌ’细朐ｃｏｌｌｔｒｏｌＥＧＩ・々雌辑表达ＥＧＦ处理的ＬＮＣａＰ细胞删ｍＲＮＡ和ｈｋ２ｍＲＮＡ表达水平均较对照明显上调（Ｐ＜０．０１），椭黔Ｐ－Ｙ５３４删脚■融謦蛳ＡＲＬ趾’Ｃ－４．－Ｎ胞ｃｏｎｌｒｏＩ≥獭添卜Ⅵ６７仙ＬＡＰＣ－４细胞中也得到相似结果（图４）。■■一霸■＿蛳ＡＲ３讨论近年来国外研究报道，低或无循环雄激素环境下前列腺癌细胞ＡＲ的磷酸化在ＣＲＰＣ发生中具有重要作用阳‘４ｔ６’９Ｉ，而ＡＲ磷酸化机制尚不完全清楚。目前认为细胞外配体通过与前列腺癌细胞表面存在的ＥＧＦ受体家族，包括ＥＧＦＲ，ＨＥＲ２等结合，通过细胞内非受体激酶信号传导最终导致ＡＲ磷酸化［１’４’６］。＿ｐ－Ｙ５３ＩＡＲＥＧＦ《■謦糟麓繁ＡＲ＿獭爹豢藤…从图１Ｆｉｇ１ＥＧＦ诱导ＡＲＴｙｒ－５３４和Ｔｙｒ－２６７位点磷酸化ＡＲｉｓｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄａｔＴｙｒ－２６７ａｎｄＴｙｒ－５３４ａｆｔｅｒＥＧＦｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ∥《∥∥◇卜潮＿｜簟一Ｐ－Ｙ５３・４∥黪谚∥棚簟紫删簟搿ＩＰ－Ｙ２６７嘲麟硼斓－鬻麓鳓斓黼簟ＡＲ鬻国嘲簟Ａ懒嘲静镧脚嗍嘲嗍阀黼嘲阑静ＡＲ纂■麟霸懒謦斓黔ｍＢＳｒｃＡ．ＳｒｃｋｎｏｃｋｄｏｗｎｉｎｈｉｂｉｔｅｄＡＫｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｂｏｎ２６７ｗａｓｎｏｔｉｎｈｉｂｉｔｅｄｂｙＡｃｋｉｋｎｏｃｋｄｏｗｎａｔ７ｆｙｒ－５３４ｉｎｄｕｃｅｄｂｙＥＧｎＢ．ＥＧＩ，、－ｉｎｄｕｃｅｄＡＲｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎａｔＴｙｒ．图２Ｆｉｇ２ＳｒｃｓｉＲＮＡ沉默对ＥＧＦ诱导的ＡＲＴｙｒ－５３４及ＡＲＴｙｒ－２６７磷酸化的影响ＯＲＴｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＳｒｃｋｎｏｃｋｄｏｗｎＥＧＦ－ｉｎｄｕｃｅｄＡＲＴｙｒ－５３４ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎａｎｄＡＲＴｙｒ－２６７ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ万方数据基础医学与临床１・５Ｂａｓｉｃ＆ＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ２５２Ｏ号ｉ１‘ｏ１５乓ｏ．５ｌＯＯ５０．０ｃｏｎｔｒｏｌＯＯＤＨＴＥＧＦｃｏｎｔｒｏｌＤＨＴＥＧＦ．Ｐ＜Ｏ．０５ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌ图３在无雄激素的条件下。ＥＧＦ刺激雄激素依赖性前列腺癌细胞增殖Ｆｉｇ３ＥＧＦｓｔｉｍｕｌａｔｅｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆａｎｄｒｏｇｅｎ・ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｓｔａｔｅＥＧＦｔｒｅａｔｍｅｎｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｂｏｔｈａｌｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓｉｎｔｈｅａｂｓｅｎｃｅｏｆａｎｄｒｏｇｅｎＤＨＴａｎｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｒｏｍｕｎｔｒｅａｔｅｄｃｏｎｔｒｏｌｓ８过Ａｃｋｌ激酶导致的ＡＲＴｒｙ－２６７位点磷酸化存在不同通路ＨＪ，详细机制正在进一步研究中。在无雄激素的条件下，ＥＧＦ处理前列腺癌细胞后，仍可刺激细胞增殖，并且接近ＤＨＴ刺激下细胞的增殖水平；前期也有报道，无雄激素条件下，ｈｅｒｅｇ－ｕｌｉｎ［９】、ｂｏｍｂｅｓｉｎ【ｌ０｜、白介素６［ｔｔ］均可刺激前列腺癌６４２Ｏ细胞增殖，说明在无雄激素的条件下，非雄激素配体≯＜０．Ｏｌｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌ圈４Ｆｉｇ４ＥＧＦ促进前列腺癌细胞ＰＳＡ及ｈＫ２ｍＲＮＡ表达ＥＧＦｉｎｃｒｅａｓｅｄＰＳＡａｎｄｈ９２ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ能够激活ＡＲ进而促进前列腺癌细胞增殖。ＡＲ靶基因ＰＳＡ及ｈｋ２的表达可作为前列腺癌的肿瘤标志，与肿瘤负荷密切相关。无雄激素环境下，ＥＧＦ处理的前列腺癌细胞的ＰＳＡｍＲＮＡ及ｈｋ２ｍＲＮＡ较对照显著增高。本项研究发现ＥＧＦ通过Ｓｒｃ酪氨酸激酶和另一Ａｃｋｌ激酶以外的途径导致ＡＲＴｙｒ－５３４及Ｔｙ卜２６７位点磷酸化；在无雄激素存在环境下，促进前列腺癌细胞ＬＮＣａＰ及ＬＡＰＣ４增殖，增强前列腺癌细胞标志基因ＰＳＡ及ｈｋ２ｍＲＮＡ表达。结果提示ＥＧＦ可ＥＧＦ可能通过Ｓｒｃ激酶导致ＡＲＴｒｙ－５３４位点磷酸化怕１；Ｈｅｒｅｇｕｌｉｎ与ＨＥＲ２结合通过细胞内Ａｃｋｌ酪氨酸激酶而导致前列腺癌细胞ＡＲＴｒｙ－２６７位点磷酸化【４Ｊ。本研究发现ＥＧＦ可诱导ＡＲＴｙｒ－５３４和Ｔｙｒ－２６７位点磷酸化，当Ｓｒｃ敲除后，ＥＧＦ诱导ＡＲＴｙｒ－５３４位点的磷酸化能够被抑制，说明Ｓｒｃ激酶参与ＥＧＦ下游信号通路，结果与报道ＭＪ一致。然而，敲除引起ＡＲＴｙｒ－２６７位点磷酸化的Ａｃｋｌ基因，却不能抑制ＥＧＦ诱导的ＡＲＴｙｒ－２６７位点磷酸化，说明ＥＧＦ诱导的ＡＲＴｒｙ－２６７位点磷酸化与ｈｅｒｅｇｕｌｉｎ通能与ＣＲＰＣ发生有密切关系。通过动物实验及人体肿瘤标本的ＡＲ磷酸化研究将进一步验证本结果并将有助于最终揭示ＣＲＰＣ的发病机制。参考文献：［１］ＬａｍｏｎｔＫＲ，ＴｉｎｄａｉｌＤＪ．Ｍｉｎｉｒｅｖｉｅｗ：ＡｌｔｅｒｎａｔｉｖｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｔｅｄＣｋｉｎａｓｅ１（ＲＡＣＫＩ）ａｎｄＳｒｃｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｔｙｒｏｓｉｎｅｐａｔｈｗａｙｓｆｏｒｔｈｅａｎｄｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｐｒｏｓｔａｔｅＭｏｌＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌ。２０１１，２５：８９７—９０７．ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｎｄｒｏｇｅｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００６，６６：１１０４７一１１０５４．ｒｅｃｅｐｔｏｒ［Ｊ］．［２］ＣｈｅｎＣＤ，ＷｅｌｓｂｉｅｎａｎｔｓＤＳ，ＴｒａｎＣ，ｅｔａ／．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｅｔｅｒｍｉ—［４］ＭａｈａｊａｎＮＰ，ＬｉｕＹ，ＭａｊｕｍｄｅｒＳ，ｅｔａ／．ＡｃｔｉｖａｔｅｄＣｄｅ４２．ｃａｎｃｅｒｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏａｎｔｉａｎｄｒｏｇｅｎｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．ＮａｔＭｅｄ，ｍｓｏｃｉａｔｅｄｋｉｎａｓｅＡｃｋｌｐｒｏｍｏｔｅｓｐｒｏｓｔａｔｅｖｉａａｎｄｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ２００４．１０：３３—３９．ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ［３］ＫｒａｕｓＳ。ＧｉｏｅｌｉＤ，ＶｏｍａｓｔｅｋＴ，ｅｌａ／．Ｒｅｃｅｐｔｏｒｆｏｒａｃｔｉｖａ－ＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，２００７．１０４：８４３８—８４４３．万方数据孙雪飞无雄激素条件下表皮生长因子诱导前列腺癌细胞系增殖及雄激素受体磷酸化［５］ＳｃｈｅｒＨＩ，ＳａｗｙｅｒｓＣＬ．Ｂｉｏｌｏｇｙｏｆｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ，ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ－ｐｒｏｓｔａｔｅ’７１１９—７１３０．３０９ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃａｎｃｅｒ：ｄｉｒｅｃｔｅｄｔｈｅｒａｐｉｅｓｔａｒｇｅｔｉｎｇｔｈｅ［９］ＧｒｅｇｏｒｙＣＷ，ＷｈａｎｇＹＥ，ＭｃｃａｌｌＷ，ｅｔａ１．Ｈｅｒｅｇｕｌｉｎ－ｉｎ－ｒｅ－ａｎｄｒｏｇｅｎ—ｒｅｃｅｐｔｏｒｓｉｇｎａｌｉｎｇ２３：８２５３—８２６１．ａｘｉｓ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＯｎｃｏｌ，２００５，ｄｕｃｅｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＨＥＲ２ａｎｄＨＥＲ３ｉｎｃｒｅａｓｅｓａｎｄｒｏｇｅｎｃｅｐｔｏｒｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄＣＷＲ－Ｒｌｃｅｌｌｈｕｍａｎｒｅｃｕｒｒｅｎｔｐｒｏｓ—［６］Ｇｕｏｚ，ＤａｉＢ，ＪｉａｎｇＴ，ｅｔａ１．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆａｎｄｒｏｇｅｎａｃｔｉｖｉｔｙｂｙｔｙｒｏｓｉｎｅｒｅ—ｔａｌｅｃａｎｃｅｒｇｒｏｗｔｈ［Ｊ］．ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００５，１１：ｃｅｐｔｏｒｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ１７０４一１７１２．Ｃｅｌｌ，２００６，１０：３０９—３１９．［１０］ＬｅｅＬＦ，ＧｕａｎＪ，ＱｉｕＹ，ｅｔａ１．Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ—ｉｎｄｕｃｅｄｃａｎｃｅｒａｎ－［７］ＬｉｕＹ，ＭａｊｕｍｄｅｒＳ，ＭｃｃａｌｌＷ，ｅｔａ１．ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＨＥＲ一ａｎｄｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔｔｏｔｈｅＲｅｓ，２００５，６５：ｄｒｏｇｅｎｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅｉｎｐｒｏｓｔａｔｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓｉｏｎｃｅｌｌｓ：ｒｏｌｅｓｏｆｎｏｎ－２／ｎｅｕｋｉｎａｓｅｉｍｐａｉｒｓａｎｄｒｏｇｅｎｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ３４０４—３４０９．ｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅｓＥｔｋ／Ｂｍｘ，Ｓｒｃ，ａｎｄｆｏｃａｌａｄｈｅ－ＣｅｌｌＢｉｏｌ，２００１，２１：８３８５—８３９７．ａｎ．ｅｎｈａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒｋｉｎａｓｅ［Ｊ］．Ｍｏｌ［１Ｉ］ＵｅｄａＸ，ＰｏｎｇｕｔａＬＡ，ｅｔａ１．Ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｒｅ・Ｔ，ＢｒｕｃｈｏｖｓｋｙＮ，ＳａｄａｒＭＤ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒｅｃｅｐｔｏｒ［８］ＧｒｅｇｏｒｙＣＷ，ＦｅｉｄｒｏｇｅｎＮ－ｔｅｒｍｉｎａｌｄｏｍａｉｎｂｙｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６ｖｉａｆａｃｔｏｒｉｎｃｒｅａｓｅｓｃｏａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｎｄｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｃｕｒｒｅｎｔＭＡＰＫａｎｄＳＴＡＴ３ｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ０１Ｃｈｅｍ，２００２．２７７：７０７６—７０８５．ｐａｔｈｗａｙｓ［Ｊ］．ＪＢｉ－ｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００４，２７９：新闻点击白米饭吃太多会增加糖尿痛风险据英国《ＢＢＣ新闻》（ＢＢＣＮＥＷＳ）２０１２－０３－１６报道，研究人员表示，白米饭摄取量和患第２型糖尿病风险呈现正相关。糖尿病在某些国家非常普遍。哈佛大学公卫学院（ＨａｒｖａｒｄＳｃｈｏｏｌｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈ）的孙齐（ＳｕｎＱｉ）表示：“我们发现白米饭可能会提高患第２型糖尿病的风险，特别像是在亚洲摄取量高的地区。不过民众同时也应该仔细注意其它摄取食物。不要只看单一种食物，而是整体摄取些什么。这非常重要。”该研究团队在这篇发表在《英国医学期刊》（ＢＭＪ）的研究报告表示，结论得自已发表研究的分析，研究分剐在中国、日本、澳洲与美国进行。研究对象有３５万人，追踪时间从４年至２２年，其中有１３０００多人患第２型糖尿病。在中国与日本进行的研究发现，白米饭摄取量最多的人患第２型糖尿病的几率，比最少的人高５５％；至于白米饭摄取量远不及中日的美国与澳洲，白米摄取量最多的人患第２型糖尿病的几率，比最少的人高１２％。高果糖玉米糖浆与糖尿病有关据美国ＷｅｂＭＤ医学新闻网２０１２－１２－０８报道，最新研究显示，在加工食品和饮料中混入高果糖玉米糖浆的国家，糖尿病患者比不使用甜味剂的国家多。研究人员在全球健康（ＧｌｏｂａｌＨｅａｌｔｈ）期刊发表的研究中，比较４３个国家平均使用高果糖玉米糖浆与糖尿病比例的关联性。在研究中，大约有５０％的国家很少或根本没有在食物中添加高果糖玉米糖浆。在其它２０个国家中，德国平均每人每年使用１磅高果糖玉米糖浆；美国平均每人每年大约５５镑。研究人员发现，在使用高果糖玉米糖浆的国家中，糖尿病的比例较没有混用甜味剂的国家高了约２０％，即使考虑了体型、人口以及财富的差别之后，这些差异依然存在。但这是否代表着使用较多高果糖玉米糖浆的国家，只是吃进了更多的糖或是摄取较多热量而已？研究人员认为不是。因为不论有没有使用高果糖玉米糖浆，糖与总热量的摄取量没有整体上的差异，所以高果糖玉米糖浆和糖尿病之间是的关系。这项研究是在一个可疑、极具争议的前提下，显示高果糖玉米糖浆在生理效应上与蔗糖显著不同。结果是，任何种类的糖只要太多就不健康。有一些科学证据显示，身体处理果糖的方式与处理葡萄糖是不同的。蔗糖是５０％的果糖和５０％的葡萄糖，但高果糖玉米糖浆中的果糖比例没有标示在标签上，一般认为是４２％～５５％，可能会更高。Ｇｏｒａｎ博士在２０１１年的肥胖（Ｏｂｅｓｉｔｙ）期刊中发表，加高果糖玉米糖浆的饮料中，果糖比例从４７％一６５％不等。万方数据无雄激素条件下表皮生长因子诱导前列腺癌细胞系增殖及雄激素受体磷酸化
作者：作者单位：
孙雪飞， 赵晖， 李扬， 钱筠， 白雪燕， 周永建， 朱红， 张勇， 刘元波
孙雪飞,李扬,钱筠,白雪燕,朱红(首都医科大学附属北京天坛医院血液肿瘤科,北京,100050)， 赵晖(首都医科大学附属北京天坛医院输血科,北京,100050)， 周永建,张勇(首都医科大学附属北京天坛医院泌尿外科,北京,100050)， 刘元波(首都医科大学附属北京天坛医院血液肿瘤科,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院输血科,北京,100050)基础医学与临床
Basic & Clinical Medicine2014,34(3)
刊名：英文刊名：年，卷(期)：
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