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miRNA的功能研究-Luciferase报告基因表达载体的构建与检测

来源:华佗健康网
miRNAs与靶基因的3’UTR结合后,主要抑制mRNA的翻译,可以WesternBlot检测靶蛋白的表达水平;也有部分表现为对标靶mRNA的降解,可以采用qRT-PCR进行检测。但无论那一种方法,都不能有效说明是miRNAs直接作用的结果。直接的证据在于Sensor reporter的构建与活性检测,我公司的技术人员利用Promega特有psiCHECK质粒,对miRNAs与靶基因3’UTR的关系作出准确判断。

服务特点

(1)采用Promega公司特有psiCHECK质粒;

(2)所采用的Luciferase双荧光报告系统,可以获得宽泛的线性定量范围与极高的灵敏度;(3)采用瞬时转染技术,操作简便、快速,周期短,适用于绝大多数细胞类型。

服务内容

(1)PCR扩增靶基因的3’UTR,或直接合成结合位点序列; (2)将上述DNA片段克隆至报告载体psiCHECK质粒; (3)合成miRNA模拟物;

(4)将报告载体与miRNA模拟物共转待检细胞; (5)多功能酶标仪检测报告基因的表达水平。

客户提供

miRNA与靶基因的信息,相应检测细胞株。

我们提供

克隆含有靶基因3’UTR或结合位点序列的报告质粒,检测结果与完整的实验报告。

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