HPLC-ELSD法测定白头翁中白头翁皂苷D的含量

西北药学杂志２０１３年１１月　第２８卷第６期　５６９　它们都是止血类药，有止血止痛、收涩止泻、祛痛的作　进展［Ｊ］．中南药学，２０１１，９（４）：２７８—２８１．　用；用于跌打损伤、外伤出血、痢疾带下。在民间草医　赵勤，郭惠玲，郭玲，等．朱砂七总蒽醌抗肿瘤的实验　处方中常出现通用、混用的现象。　研究［Ｊ］．辽宁中医杂志，２００８，３５（８）：１２２２—１２２４．　郭惠玲，赵琦，田小平，等．朱砂七抑制流感病毒Ａ的　５对陕西七药中的一药多源现象的建议　试验研究［Ｊ］．陕西中医，２００６，２７（３）：３５１－３５３．　①中药管理部门应尽快建立有关陕西七药的规　蔡少青，陈虎彪，冯毓秀，等．关注中药与原植物“同名　范标准，争取做到一药一源，使对陕西七药的研究、使　异物”现象——倡议将原植物中文名与中药名分离　用做到有典可查。　［Ｊ］．中国中药杂志，２００８，３３（６）：７２７—７３１．　孙宝惠，刘铁钢，段吉平，等．中药材同名异物与中药　②深入对陕西七药的有效成分、药理活性的研　质量［Ｊ］．中草药，２００２，３３（６）：５７０—５７２．　究。将具有相似有效成分、药理活性但来源不同的七　周丽娜，陈少锋，戴斌．瑶药中同名异物品种调查分析　药进行合并；将有效成分、药理活性有明显不同的同　［Ｊ］．中国民族民间医药杂志，２００４，１３（１）：５１—５２．　名七药进行重新命名。　郭增军．陕西七药［Ｍ］．西安：陕西科技出版社，２００３：　３．　③现阶段，应该规范使用“中药正名＼别名＼基源　宋小妹，王薇．太白七药原色图鉴［Ｍ］．上海：上海科学　植物中文名＼拉丁学名”四部分构成的药名体系，防止　技术出版社，２０１１：１５０—１５１．　药材混用现象。　陕西省革命委员会卫生局商业局．陕西中草药［Ｍ］．北　④对含有来源有异议药材的处方，不仅要写出药　京：科学出版社，１９７１：４０９—４１１．　谢宗万．全国中草药汇编［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，　材名，而且有植物来源的标示。　２０００：３５４．　参考文献：　口　Ｉ＝Ｊ　口　口　口　口　口　口　『＝１　胡　阳　力　陕西省中医研究所革命委员会．陕西草药［Ｍ］．西安：口　　［１］宋小妹，唐志书，王薇，等．太白”七药”研究进展［Ｊ］．　陕西省中医研究所，１９７０：２２．　亚太传统医药，２００９，５（２）：１２０—１２３．　广州部队后勤部卫生部．常用中草药手册［Ｍ］．北京：　［２］郭增军，王军宪，龙丽辉，等．浅谈民间药挖掘新药的思　人民卫生出版社，１９６９：５７８．　路与方法口］．中国民族民间医药，２００９，１８（Ｚ１）：３－４．　国家中医药管理局中华本草编委会．中华本草：第二分　［３］郭增军，ｂ筱茜，王军宪，等．陕西”七药”植物资源及　册［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９９９：２５１．　研究概要［Ｊ］．中国民族民间医药杂志，２００６，１５（２）：　广西壮族自治区中医药研究所．广西药用植物名录　７９—８１．　［Ｍ］．南宁：广西人民出版社，１９８６：４７５．　［４］孙静，王昌利，郭东艳，等．试析太白”七药”资源现状、　李世全．秦岭巴山天然药物志ＥＭ３．西安：陕西科学技　资源开发存在问题与应对措施［Ｊ］．中国民族民间医　术出版社，１９８７：５１２．　药杂志，２０１０，１９（３）：４２．　华山药物志编辑委员会．华山药物志［Ｍ］．西安：陕西　［５］令狐昱慰，李思锋，黎斌，等．桃儿七在西安地区的引　科学技术出版社，１９８５：３９９．　种栽培及其经济价值研究［Ｊ］．陕西农业科学，２０１１，５７　毛水龙．秦岭七药［Ｍ］．西安：西安交通大学出版社，　（６）：５－７．　２０１１：８７—８８．　［６］李晓丽，范智超，张志琪．超临界ＣＯ。萃取朱砂七游离　宝鸡市卫生局．太白山草本志［Ｍ］．西安：陕西科学技　蒽醌的研究［Ｊ］．陕西师范大学学报：自然科学版，　术出版社，１９９３：３９６．　２００８，３６（５）：４４　４７．　昆明军区后勤部卫生部．云南中草药选［Ｍ］．昆明：昆　［７］高琨，贺浪冲，杨广德．用细胞膜色谱法筛选研究红毛七　明军区后勤部卫生部，１９７０：３４５．　中的有效成分＿Ｊ］．中国药学杂志，２００３，３８（１）：１４　１６．　（收稿日期：２０１３－０６—０８）　［８］　孙静，薛瑞，刘洁琼．太白祛风湿“七”药药理作用研究　ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法测定白头翁中白头翁皂苷Ｄ的含量　饶小勇　一，尹　姗。，龚　明。，罗晓健　，张　尧　，冯育林　，ｕ，杨世林　，　（１．北京中医药大学中药学院，北京　１００１０２；　２．中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，南昌　３３０００６；３．江西中医学院，南昌　３３ＯＯＯ６）　摘要：目的　建立高效液相色谱一蒸发光检测法测定白头翁皂苷Ｄ含量的方法。方法Ｈｙｐｅｒｉｓｉｌ　ＯＤＳ２　Ｃ　柱（２５０　ｍｍ×４．６　ｍｌＴｌ，５　ｍ），柱温３Ｏ℃；流动相：甲醇水一甲酸（７２：２８：０．１）；流速ｌ　ｍＬ・ｒａｉｎ　；Ａｌｔｅｃｈ　ＥＬＳＤ　３３００检测器，雾化气流速１．３　Ｌ・ｒａｉｎ　，漂移管温度为５５℃。结果　该方法的线性范围为０．１０４　６～１．０４６　０　ｍｇ・ｍＬ　（ｒ一０．９９９　２），平均回收率（　一６）为　ｌ０１．０　（ＲＳＤ＝１．６　），不同产地药材白头翁皂苷Ｄ差异性较大。结论　该方法专属性强、准确、灵敏度高、重复性好，可用于白　头翁中白头翁皂苷Ｄ的测定，对白头翁规范性种植具有指导意义。　关键词：ＨＰＩ　Ｃ　ＥＩ　ＳＤ法；白头翁；白头翁皂苷Ｄ；含量测定　基金项目：江西省自然科学基金（编号：２０１１４ＢＡＢ２１５Ｏ４５）；江西省优势科技创新团队计划项目（编号：２０１０ＤＱＢ０１７００）　作者简介：饶小勇，男，在读博士研究生，工程师　通信作者：杨世林，男，博士，教授　ｈｔｔｐ：／／ＸＢＹＺ．ｃｂｐｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ　西北药学杂志　２０１３年１１月　第２８卷第６期　ｄｏｉ：１０．３９６９ｈ．ｉｓｓｎ．１００４—２４０７．２０１３．０６．００６　中图分类号：Ｒ２８２　文献标志码：Ａ　文章编号：１００４—２４０７（２０１３）０６—０５６９—０４　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｓａｐｏｎｉｎ　Ｄ　ｉｎ　Ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ—ＥＬＳＤ　ＲＡＯ　Ｘｉａｏｙｏｎｇ　～，ＹＩＮ　Ｓｈａｎ。，ＧＯＮＧ　Ｍｉｎｇ。，ＬＵＯ　Ｘｉａｏｊｉａｎ。～，ＺＨＡＮＧ　Ｙａｏ　，ＦＥＮＧ　Ｙｕｌｉｎ　～，ＹＡＮＧ　Ｓｈｉｌｉｎ　・　（１．Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｕｎｉ—　ｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１００１０２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｓｏｌｉｄ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｈｅｒｂａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｃｈａｎｇ　３３０００６，Ｃｈｉｎａ；３．Ｊｉａｎｇｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｃｈａｎｇ　３３０００６，　Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｓａｐｏｎｉｎ　Ｄ　ｉｎ　Ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ—ＥＩ　ＳＤ　ｍｅｔｈｏｄ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｏｎ　ａ　Ｈｙｐｅｒｉｓｉｌ　ＯＤＳ２　Ｃ１８　ｃｏｌｕｍｎ（２５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ，５“ｍ）ａｎｄ　ｍｅｔｈａｎｏｌ—ｗａｔｅｒ－ｆｏｒｍｉｃ　ａｃｉｄ（７２：　２８：０．１）ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１　ｍｌ　・ｍｉｎ一　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　３Ｏ℃．Ｔｈｅ　Ａｈｅｃｈ　ＥＬＳＤ　３３００　ｄｅｔｅｃｔｏｒ　ｗａｓ　ｕｅｓｄ　ａｓ　ａ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ａｔｏｍｉｚｅｒ　ｗａｓ　１．３　Ｌ・ｒａｉｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　ｄｒｉｆｔ　ｔｕｂｅ　ｗａｓ　５　５℃．Ｒｅｓｕｌｔ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｈａｄ　ａ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．１０４　６－１．０４６　０　ｍｇ・ｍＬ　（ｒ一０．９９９　２）ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　ｌ　０　１．０　（ｎ一６，ＲＳＤ　１．６　）．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｓａｐｏｎｉｎ　Ｄ　ｗｅｒｅ　ｍｕｃｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ａｒｅａｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｈａｓ　ａｄｖａｎｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｓａｐｏｎｉｎ　Ｄ　ｉｎ　Ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ，ｗｈｉｃｈ　ｈａｓ　ａ　ｐｉｏｎｅｅｒ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｆｏｒ　Ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｐｌａｎｔｉｎｇ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＨＰＩ　Ｃ　ＥＩ　ＳＤ；Ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ；ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｓａｐｏｎｉｎ　Ｄ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　中药白头翁始载于《神农本草经》，作为常用中药　收载于《中国药典》（２０１０年版），为毛茛科植物白头　翁Ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｂｇｅ．）Ｒｅｇｅｌ的干燥根，具有　室自制，经ＥＳＩＭＳ、　Ｈ—ＮＭＲ、。Ｃ—ＮＭＲ等光谱分析　确定结构式为常春藤皂苷元３—　ａ—Ｉ　一吡喃鼠李糖一　（１—２）［　Ｄ一吡喃葡萄糖一（１—４）］一ａ—Ｌ一吡喃阿拉伯　糖，经ＨＰＬＣ—ＥＬＳＤ面积归一法计算其质量分数为　清热解毒、凉血止痢的功效　］，临床主要用于急性菌　痢。　、溃疡性结肠炎　、抗肿瘤　］、杀精　等。近年　。来随着对其化学成分和药理作用的不断深入研究，其　皂苷类成分ｌ＿８　抗肿瘤活性已成为研究热点之一，白头　翁皂苷Ｄ（ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｓａｐｏｎｉｎ　Ｄ，ＰＳＤ）是从白头翁中　９９．６５　；甲醇，色谱纯，山东禹王实业有限公司禹城　化工厂；其余试剂均为分析纯。　２方法与结果　２．１　色谱条件Ａｇｉｌｅｎｔ　ＨＰ１２６０　ｓｅｒｉｅｓ高效液相色　分离出的一种常春藤皂苷，对ＨＬ－６０肿瘤细胞和　ＬＬＣ肿瘤细胞具有很强的抑制作用　。　。目前，国内　尚未有关于白头翁药材中活性成分白头翁皂苷Ｄ含　量测定的报道。由于白头翁皂苷Ｄ属于皂苷类成　谱仪，大连依利特Ｈｙｐｅｒｉｓｉｌ　ＯＤＳ２　Ｃ　８柱（２５０　ｍｒｎ×　４．６　ｍｍ，５　ｒｎ），流动相为甲醇一水一甲酸（７２：２８：　０．１），流速为１．０　ｍＩ　・ｍｉｎ　，柱温为３０℃；检测器　为Ａｌｔｅｃｈ　ＥＩ　ＳＤ３３００检测器，雾化气流速１．３　分，只在末端紫外有吸收，采用紫外检测时受到限制。　因此，本文采用高效液相色谱蒸发光检测法建立了白　头翁药材中活性成分白头翁皂苷Ｄ的含量测定方　法，并考察了不同产地药材中白头翁皂苷Ｄ的含量　分布，为丰富白头翁内在质量分析提供参考。　１仪器与试药　Ｉ　・ｍｉｎ　，漂移管温度为５５℃，增益值为１。　２．２溶液的制备　２．２．１　对照品溶液的制备　取白头翁皂苷Ｄ对照　品约１３　ｍｇ，精密称定，置于２５　ｍＬ量瓶中，加甲醇溶　解，定容，摇匀，即得（每１　ｍＬ含有白头翁皂苷Ｄ　５３２　ｇ）。　１．１仪器　ＺＮＨＷ型电热套（巩义市予华仪器有限　责任公司）；ＫＱ一２５０Ｅ型超声波清洗器（昆山市超声　２．２．２　供试品溶液的制备　取白头翁药材中粉约　１０　ｇ，精密称定，置于１００　ｍＬ量瓶中，加甲醇５Ｏ　ｍｉ　，　仪器有限公司）；ＴＥ６１２一Ｌ型电子天平（北京赛多利　斯仪器系统有限公司）；Ａｇｉｌｅｎｔ　ＨＰ１１２６０　ｓｅｒｉｅｓ高效　液相色谱仪，Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ化学工作站，Ａｌｔｅｃｈ　Ｅｌ　ＳＤ　３３００检测器；ＡＩ　１ｏ４／ｏｌ电子天平（梅特勒一托利多仪　器有限公司）。　超声处理（功率２５０　Ｗ，频率５０　ｋＨｚ）３０　ｍｉｎ，放冷，　加甲醇至刻度，摇匀，过０．４５　ｆｆｍ微孔滤膜，取续滤　液，即得。　２．３　方法的专属性　分别精密吸取对照品溶液、供　试品溶液与阴性供试品溶液（甲醇）各ｌＯ　Ｉ　，进样测　定，见图１。由图１可知，白头翁皂苷Ｄ分离度良好，　且阴性样品无干扰，故采用ＥＬＳＤ测定白头翁药材中　白头翁皂苷Ｄ的含量。　１．２　试药　白头翁药材经江西中医学院褚小兰教授　鉴定为毛茛科植物白头翁Ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　（Ｂｇｅ．）Ｒｅｇｅｌ的干燥根；白头翁皂苷Ｄ对照品：实验　ｈｔｔｐ：／／ＸＢＹＺ．ｃｂｐｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ　西北药学杂志　２０１３年１１月　第２８卷第６期　１　２　３　４　５　上述测定方法测定含量，分别记录相对应的白头翁皂　苷Ｄ峰面积。以峰面积（Ａ）对相应的对照品质量质　量浓度（Ｃ）的自然对数进行线性回归，得线性方程：　Ｃｕ●　＜ｕ●　＜　●　５　●　５　●　ｌｎＡ一１．０７３　２１ｎＣ＋３．８８３（ｒ一０．９９９　２）。结果表明　１　４　４　１　４　１　４　１　４　１　白头翁皂苷Ｄ对照品在ＥＬＳＤ条件下，进样质量质　量浓度在０．１０４　６～１．０４６　０　ｍｇ・ｍＬ　范围内呈良　好线性关系。　２．５　精密度实验　精密吸取０．５３２　ｍｇ・ｍＬ　白头　翁皂苷Ｄ对照品溶液１０肚Ｉ　，连续进样６次，分别记　●　４　４　６　６　７　●　●　●　●　录ＥＬＳＤ条件下峰面积，计算出ＲＳＤ为０．７１　，说　０ｕ　８　８　１　３　５　１　５　３　５　明该方法精密度良好。　２．６稳定性实验取已知含量供试品溶液，精密吸　取供试品溶液１０　Ｌ，注入液相色谱仪，分别在０，１，　２，４，８和１２　ｈ进样测定，记录ＥＬＳＤ条件下白头翁　１　●　１　●　１　●　１　●　ｌ　●　Ｏ　Ｏ　１　１　２　皂苷Ｄ的峰面积，计算出ＲＳＤ为１．８０　，结果表明，　２　９　１　８　７　Ｏ　７　５　７　４　供试品溶液在１２　ｈ内基本稳定。　０　２　５　５　７．５　ｔ／ｍｉｎ　１０　１２　５　１５　２．７　重复性实验　称取同一批次的样品约１Ｏ　ｇ’共　６份，按上述供试品溶液制备方法制备，分别进行测　定，记录ＥＬＳＤ条件下白头翁皂苷Ｄ的峰面积，计算　出ＲＳＤ为２．６８　，表明该方法重复性良好。　２．８　回收率实验４　●　Ｃ　图１　ＨＰＬＣ图　４　●　６　●　６　●　７　●　Ａ．白头翁皂苷Ｄ；对照品；Ｂ．样品；Ｃ．阴性样品；１．白头翁皂　苷Ｄ　Ｆｉｇ．１　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　８　８　７　７　２　９　３　４　３　３　称取同一批次已知含量的样品约　１０　ｇ（白头翁皂苷Ｄ质量分数为０．０５４　１％），共６份，　分成３组，置于１００　ｍＬ量瓶中，加甲醇５０　ｍＬ，分别　；Ａ．ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ＰＤＳ；Ｂ．ｓａｍｐｌｅ；Ｃ．ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｓａｍｐｌｅ；１．ＰＤＳ　２．４　标准曲线的制备　取白头翁皂苷Ｄ对照品溶　加入质量浓度为４．８３，６．１５和７．３５　ｍｇ・ｍＬ　的白　１　●　Ｏ　９　Ｏ　８　●　Ｏ　３　●　９　９　●　２　●　液液（２．０９２　ｍｇ・ｍＬ　），分别稀释成质量浓度为　０．１０４　６，０．２０９　２，０．４１８　４，０．６２７　６，０．８３６　８和　头翁皂苷Ｄ对照品溶液１　ｍＬ，超声处理（功率２５０　ｗ，频率５０　ｋＨｚ）３Ｏ　ｍｉｎ，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，　１　８　３　Ｏ　７　３　３　０　４　３　１．０４６　０　ｍｇ・ｍＬ　对照品溶液，进样１Ｏ　Ｌ。按照　表１　加样回收实验结果　Ｔａｂ．１　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔ　滤过，分别进液相色谱仪测定，结果见表１。　Ｏ　Ｏ　样品中白头翁皂苷　Ｄ的含量／ｍｇ　加入白头翁皂苷　Ｄ的量／ｍｇ　测得白头翁　皂苷Ｄ总量／ｍｇ　测得白头翁皂苷　Ｄ含量／ｍｇ　回收率　／　平均　回收率／　ＲＳＤ　／　ｌ（●　　　从表１可知平均回收率达到１０１．０　，ＲＳＤ为　１．６　，由此表明，白头翁皂苷Ｄ回收率良好。　２．９　不同批次白头翁药材中白头翁皂苷Ｄ的含量　表２不同产地白头翁药材中白头翁皂苷Ｄ含量测定结果　Ｔａｂ．２　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｐｕｌｓａｔｉｉｌａ　ｓａｐｏｎｉｎ　Ｄ　ｉｎ　Ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ａｒｅａｓ　测定　取不同产地的白头翁药材，按上述确定的供试　品制备方法制备样品，进样，分别记录峰面积，计算其　含量，结果见表２。　含量由表２可知，不同产地白头翁药材白头翁皂　苷Ｄ存在较大差异性，吉林白头翁中白头翁含量最　高，浙江白头翁中含量最低。　ｈｔｔｐ：／／ＸＢＹＺ．ｃｂｐｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ　西北药学杂志２０１３年１１月　第２８卷第６期　３讨论　定方法学实验结果表明，本测定方法操作简单，测定　结果准确，重复性好。本文选取了９个不同产地的白　头翁药材，结果表明，不同产地样品中自头翁皂苷Ｄ　３．１供试品的制备　在前期实验中，对样品的制备　方法进行了考察，主要进行了不同溶剂（水、酸水、不　同体积分数的乙醇和甲醇）及不同提取方法（超声提　取、回流提取及索氏提取法）的对比。研究发现，提取　溶剂以酸水提取效率最高，甲醇次之，由于白头翁药　含量存在较大的差别，相差１Ｏ余倍，其中吉林白头翁　含量最高，而浙江白头翁在此条件下未能检测出，说　明产地对白头翁中白头翁皂苷Ｄ含量有明显影响，　这对白头翁规范化种植具有一定的指导意义。　参考文献：　［１］　国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草：上册　ＥＭ］．上海：科学技术出版社，１９９８：５３８．　［２］　国家药典委员会．中国药典２０１０年版ＥＳ］．一部．北京：　中国医药科技出版社，２０１０：９６．　材中含有大量其他常春藤皂苷类成分ｌ＿９］，经酸水解后　可生成白头翁皂苷Ｄ，不能直接反映样品的含量，且　酸水解过程操作复杂，易对环境造成污染，所以采用　提取溶剂为甲醇。提取方法中以超声提取效率最高。　对不同超声时间（１５，３０和４５　ｍｉｎ）进行了考察，研究　发现，４５　ｍｉｎ提取率最高，但与３０ｍｉｎ没有明显差异　性，所以确定采用超声提取３０　ｍｉｎ。　［３］　韩进庭．白头翁的药理作用及临床应用［Ｊ］．现代医药　卫生，２００７，２３（１４）：２１２３　２１２４．　３．２　色谱参数的确定　白头翁皂苷Ｄ属于皂苷类　化合物，因其只有末端吸收故不采用紫外检测器检　测，蒸发光散射检测器为质量型检测器，主要用于无　紫外吸收或紫外仅有末端吸收的化合物的测定，该方　法具有无溶剂峰干扰、基线平稳、易于测定的优　点ｕ　。本文所用Ａｈｅｃｈ　ＥＬＳＤ３３００检测器是一种低　［４］　冯怀新．中药气流弥散结肠给药治疗溃疡性结肠炎６ｏ　例［Ｊ］．陕西中医，２０００，２１（１）：１．　［５］赵淑慧．中药保留灌肠法治溃疡性结肠炎临床观察　［Ｊ］．时珍国医国药，２０００，１１（９）：８２９．　［６］　王先方．白头翁醇提物的抗肿瘤作用［Ｊ］．浙江医科大　学学报，１９９８，２７（５）：２４．　温型检测器，优化了ＥＬＳＤ的漂移管温度、雾化器流　速参数，对漂移管温度考察了３５，４Ｏ，４５，５０和５５℃，　结果显示，漂移管温度太低，溶剂挥发不够完全，噪音　比较强，难以区分噪音峰和样品峰，所以最适宜的漂　移管温度为５５℃；对雾化器流速分别考察了１．０，　１．１，１．２和１．３　Ｌ・ｍｉｎ，结果显示，当雾化器流速　为１．３　Ｌ・ｍｉｎ　时，基线噪音比较小，所以选择雾化　器流速为１．３　Ｌ・ｍｉｎ。　［７］慕慧，杜俊杰．白头翁皂甙体外杀精效果研究［Ｊ］．西　北药学杂志，１９９６，¨（３）：１１９—１２Ｏ．　［８］钟邱，倪琼珠．白头翁中皂苷成分对肿瘤细胞的抑制作　用［Ｊ］．中药材，２００４，２７（８）：６０４—６０５．　［９］　Ｙｏｓｈｉｈｉｒｏ　Ｍｉｍａｋｉ．Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ａｎｄ　ｌｉｇｎａｎｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｃｙｔｏ～　ｔｏｘｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｇａｉｎｓｔ　ＨＩ　一６０　ｃｅｌｌｓ］－Ｊ］．Ｊ　Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ，ｌ９９９，　６２，１２７９－１２８３．　［１ｏ］Ｙｏｎｇ　Ｋｉｍ．Ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｓａｐｏｎｉｎ　Ｄ：ｔｈｅ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ　ｆｒｏｍ　Ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ　ｋｏｒｅａｎａ　ＥＪ］．Ａｒｃｈ　Ｐｈａｒｍ　Ｒｅｓ，２００４，　１２７（９）：９１５－９ｌ８．　３．３　流动相的确定　由于白头翁药材中含有大量的　皂苷成分ｎ。。　，难以分离，此外白头翁皂苷Ｄ为弱酸　性化合物，为使白头翁皂苷Ｄ得到有效的分离，分别　考察过多种流动相甲醇水、乙腈一水、甲醇一水一磷酸、　甲醇一水一甲酸，结果显示，流动相为甲醇一水一甲酸可以　有效改善拖尾现象，当流动相比例为甲醇一水磷酸　（７２：２８：０．】）时，样品中白头翁皂苷Ｄ可与其他皂　苷峰完全分离。　本文旨在研究建立白头翁皂苷Ｄ含量测定方　法，为制定白头翁药材的质量标准提供依据。含量测　［１１］　田景奎，吴丽敏．ＨＰＩ　Ｃ—ＥＬＳＤ测定芪休颗粒中黄芪甲　苷的含量［Ｊ］．中成药，２００４，２６（１０）：８１２　８１４．　［１２］　莫少红．白头翁的化学成分及药理作用研究进展［Ｊ］．　中药材，２００ｌ，２４（５）：３８５—３８７．　［１３］关颖丽，刘建宇．白头翁属植物三萜皂苷及生物活性　研究进展［ｊ］．沈阳药科大学学报，２００９，２６（１）：８０—８４．　（收稿日期：２０１３　０５　１９）　骨愈灵制剂质量标准统一的研究　杨培金　，罗定强　，黄　艳　，吴　芳　（１．西安交通大学第二附属医院，西安　７１０００４；２．陕西省食品药品检验所，西安　７１００６１）　摘要：目的　统一骨愈灵胶囊、片剂的质量标准。方法　增加乳香、当归、川芎显微特征及没药薄层鉴别，建立梯度洗脱ＨＰＩ　ｃ　法测定三七中三七皂苷Ｒ　、人参皂苷Ｒｇ　、人参皂苷Ｒｂ　的含量。结果　显微特征、薄层鉴别、含量测定方法专属性好。结论　骨愈灵制剂质量标准的统一，能有效地控制该产品的质量。　关键词：骨愈灵制剂；质量标准统一；薄层鉴别；梯度洗脱ＨＰ１　Ｃ法　ｈｔｔｐ：／／ＸＢＹＺ．ｃｂｐｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ