骨内细胞凋亡与骨质疏松症

国外医学・老年医学分册２００２年３月第２３卷第２期　８　Ｌｏｒｄ　，Ｗ删ＪＡ，Ｗ址ｉａｒｍ　ｅｔ　ｃｄ　１１１ｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆａⅨｍｍⅢＩ　ｙ　ｅｘｅｒｃ　ｐｒｏｇｒａｍ　ｏｎ　ｔｒａｃｔｔａ－ｅ　ｒｉｓｋ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｉｎ　ｏｌｄｅｒ　Ｗ￣＇ｑ＇ｌｐＡ］．Ｏｐ　Ｉｎｔ，１９９６；６：３６１－３６７　１２　Ｆｕｊ／ｍｕｒａＲ　Ｅｆｆｅｃ￣ｏｆ　ｒｅｓｉｓｔｎｃｅ　ａｅｘｅｒｃｋｓｅｔｒａｉｎｉｎｇ　ｏｎ　ｂｏｎｅｆｏｒ—　ｍａｒｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｓｕｍｐｔｉｏｎ　ｉｎ　ｙｏｕｎｇ　ｎ１ａｌｅ　ｓｕｂｊｅｃｔｓ　ａｓｓｅｓｓｅｄ　ｂｙ　ｂｉｃｍａｒｋｅｒｓ　ｏｆ　ｂ。Ｄｅ．Ｊ　Ｂ０ｎｅＭｉｎｅｒＲｅｓ．１９９７；１２（４）：６５６　ａ／．Ｓｉｔｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　０ｆ　９　Ａｄａｍｉ　Ｓ．Ｇａｔｆｉ　Ｄ，Ｂｒａｇａ　Ｖ　１３王宏，李卓朝，粱旭光ｅｔ　ａｌ冬泳与老年人骨代谢．中　ｓｔｒｅｎｇｔｈ　ｔｒａ￣ｎｌｎｇ　ｏｎ　ｂｏｎｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｇｅｏｍｅｔｒｙ　ｏｆ　ｄｔｒａｄｉｓｔａｌ　国骨质疏松杂志，１９９６；２（３）：２５　ｌ４王玉昕１５徐健身运动对中老年蛆女骨矿含量的影响．广州体　山．运动及控体重对女运动员骨密　ｒａｄｉｕｓ　ｏｎ　ｐｏｓｔｍｅｒｔ￣ｐａｕｓａｌ　ｗｏｍｅｎ．Ｊ　Ｍｎａｔ　Ｒｅｓ，１９９９；１４　（１）：１２０～１２４　１０张林．杨铬让，田中．“运动＋钙剂　对绝经后蛆女骨代　谢生化标志物的影响．第三届骨质疏松国际会议论文汇　编．１９９８　院学报，１９９５；２：１６　红，隆璐娟，金度的影响．中国运动医学杂志，１９９７；１６（１）：３６　１６邵志宏．李前铎．游泳对绝经后妇女骨质疏松的影响．中　国康复医学杂志，１９９６；１１（２）：８０　（２００１—０５　２８收稿）　１１是坚　石崎朔子，山川纯ｅｌ　ａｌ女子新体操选手ｃ＝与ｃ于　６太腿骨近位部　骨密度、骨盐量　左右差忙，）０、Ｚ－．临　床天水一、ｙ医学，１９９６；１３（８）：９２５　骨内细胞凋亡与骨质疏松症　：ＩＬＹ，￣Ｚｑ：口腔医学院甑面外科（１０００８１）　高　华综述李盛琳审校　摘要骨内细胞捅亡，包括破骨细胞、成骨细胞和骨细胞的凋亡，与骨质疏松症发病机制和药物治疗有着密切的关系，本　细胞凋亡；骨质疏松症；破骨细胞；成骨细胞；骨细胞　文综述了这一研究热点的最新进展。　美键词１引言　亡而实现。本文就骨质疏松症的发病机理及防治与骨　骨质疏松症是以骨量减少、骨组织显微结构退化　内细胞凋亡的有关进展作一综述。　２破骨细胞的凋亡　１９９３年，Ｆｕｌｌｅｒ等第１次报道了０ｃ凋亡。他们　将巨噬细胞集落刺激因子（Ｍ—ＣＳＦ）从培养液中去　除，发现０Ｃ出现了细胞捅亡的特征性形态学变化，　提示Ｍ～ＣＳＦ不仅在ｏＣ的生成中起重要作用，而且　为特征，从而导致骨的脆性增高及骨折危险性增加的　一种全身性骨病。随着人均寿命的延长，越来越多的　国家步人老龄化社会，骨质疏松症的发病率增加所造　成的危害日趋严重。据美国国家骨质疏松症基金会的　报告估计，全美国１９９５年用于骨质疏松骨折的医疗　费用高达１３８亿美元＿１　Ｊ。为提高防治骨质疏松症的水　平，近些年各国学者对其基础研究也愈加重视。　早在１９６８年，就有学者利用骨矿物质放射性核　素方法和四环素标记的骨组织形态测定法揭示了骨为　对于ｏｃ的存活也是必不可少的。事实上，在早期的　研究中，已经有不少学者在各自的实验中观察到了　ｏＣ的解体，但都没有意识到这些细胞是以凋亡方式　死亡的。１９９３年以后，ｏＣ捅亡在骨质疏松发病机制　和防治的研究中逐渐成为热点。　雌激素缺乏是绝经后骨质疏松症的主要病因，并　动态变化的组织，在人一生均处在不断的转换中，周　期性地以新骨代替旧骨。这一过程称为骨再建或骨转　换，基本多细胞单位（ＢＭｕ）执行了骨再建这一功　能。ＢＭＵ是由位于前方的破骨细胞（ｏｃ）和成骨细　胞（ｏＢ）组成的。在骨再建中，ｏＣ贴附于骨面消化　且雌激素替代疗法也取得了较为满意的疗教，相应　地，对雌激素作用机制的研究也最为广泛和深入。一　方面，学者们研究了雌激素对０ｃ活性的抑制。０ｃ　中Ⅱ型碳酸酐酶（ＣＡⅡ）通过逆转ｃ　生成Ｈ　，然　后质膜上的空泡型质子将Ｈ　运转到细胞外，从而使　无机基质降解；同时ｏｃ分泌多种溶酶体酶降解有机　骨基质，其中组织蛋白酶Ｋ（Ｃａｔ　Ｋ）是降解胶原的　吸收骨质，在ｏｃ脱离骨面后ＯＢ进入吸收陷窝，分　泌娄骨质并矿化。由于骨吸收和新骨形成之间得到了　很好的平衡，正常入全身骨量和骨密度能够保持稳　定。在各种骨代谢疾病中，全身骨量和骨密度的改变　不仅与ｏＣ和０／３的生成数量相关，同时也受到两种　细胞生命周期长短的调节，这种调节可以通过细胞捅　主要成分。Ｋａｍｅｄａ等　研究了造成单个ｏｃ活性降　低的原因。发现１７／￣Ｅ２以时问和剂量依赖的方式同时　维普资讯 http://www.cqvip.com

国外医学・老年医学分册２００２年３月第２３卷第２期　一８９　使ｃＡⅡ和ＣａｔＫ两者的ｍＲＮＡ水平降低。而更多的　文章报道了雌激素诱导ＯＣ凋亡。在Ｈｕｇｈｅｓ等　ｊ的研　数量。Ｈｏｅｃｈｓｔ　３３２５８染色揭示经小檗碱处理的ｏＣＬｓ　出现了核聚缩和细胞体积缩小，提示小檗碱也是通过　ＯＣ凋亡而抑制骨吸收的。选择性雌激素受体调节剂　究中，观察到ＴＧＦ一０和１７口　均能引起混合细胞中　小牛ＯＣ凋亡，加入抗转化生长因子一０抗体则能抑　制两者的发生，提示雌激素引起ｏｃ凋亡可能由ＴＧＦ　一（　Ｍｓ）是近几年开发的抑制骨吸收药物。在Ｎｕｔ—　ｔａｌｌ等ｔｔｓｊ的实验中，ｉｄｏｘｉｆｅｎｅ引起ＯＣ凋亡，但却不　表现促子宫内膜生长活性。另外，Ｇｒａｓｓｅｒ等ｌｌ　也报　道了ｄｍｌｏｘｉｆｅｎｅ和雌激素均可抑制骨吸收，并引起体　外培养的ＯＣ　ｐ５３表达和细胞凋亡，而ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ在　０所介导。Ａｉ＇ｎｅｔｔ等＿４　０的发现不支持这一观点，在　他们的实验中，雌激素并不引起分离的新生ｏｃ凋亡。　另一部分研究则揭示了雌激素作用的受体介导机制。　近年来，不同的研究小组分别在成熟的ＯＣ　Ｊ、人巨　细胞瘤的ＯＣ和ＯＣ前体细胞系　中发现功能性雌激　素受体。Ｋａｍｅｄａ　等分离了高度纯化的ＯＣ，并观察　到１７１３Ｅ２直接抑制ＯＣ骨吸收。在抑制骨吸收有效浓　度下，Ｂ对ＯＣ凋亡具有时间和剂量依赖性。　ＩＣＩ１６４，３８４和ｔａｍｏｘｉｆｅｎ作为完全和部分拮抗剂，分　别完全和部分地阻断了１７８Ｅ２对骨吸收和ＯＣ凋亡的　诱导。这些结果提示雌激素部分通过受体介导的机制　直接　Ｉ起ＯＣ的凋亡，从而起到治疗绝经后骨质疏松　的作用。在稍早些的研究中，Ｓｈｅｖｄｅ等　７ｉ发现　ＩＣＩ１６４，３８４可以阻断雌激素减少Ｏｃ始祖细胞——　粒细胞集落形成单位（ｃＨＪ—ＧＭ）的数量．ＣＦＵ—　ＧＭ的死亡是以凋亡方式进行的，说明雌激素可通过　受体直接抑制ｏｃ始祖细胞的募集　众所周知，凋亡　的特征性形态学变化反映了某些特定的核酸内切酶的　表达，这些内切酶切割ＤＮＡ成双链寡核苷酸。越来　越多的证据表明ａｐｏｐａｉｎ／ｃａｓｐａｓｅ３的激活对引起ＤＮＡ　的片段化起核心作用ｔ８－９］。Ｚｅｃｃｈｉ等　用１７１￣Ｆ－２处理　ＦＩＧ２９．１细胞，检测到ｃａｓ　的酶活性大大增强，　从而证实了雌激素激发ｏＣ凋亡的能力。综合　上报　道，我们可以反过来推测绝经后骨质疏松的部分发病　机理：妇女在绝经之后，由于缺乏雌激素，增加的细　胞因子使ＯＣ的生成增多、凋亡减少，生命周期延长，　使ｏｃ能更长时问贴附在骨表面吸收骨质，穿通整个　骨小梁使之失去连续性，最终导致骨密度明显下降及　骨折等临床症状。　在对其它一些抑制骨吸收药物的研究中，发现　Ｏｃ凋亡也起着重要的作用。双膦酸盐是治疗骨质疏　松的有效药物，虽然小肠的吸收率低，但具有在骨定　位和储留的高选择性＿１ｌｌ。Ｈｕｇｈｅｓ等　对小鼠的体内　外实验均证明双膦酸盐可　诱导ｏＣ捅亡。Ｒｅｓｚｋａ等　＿１　最近对凋亡的途径进行了研究，ＯＣ凋亡依赖于　ｃａｓｐａｓｅ酶的激活，而且ｃａｓｐａｓｅ切割Ｍｓｔｌ激酶是这一　途径中的一部分。Ｈｕｉｙｉｎｇ等＿】４　Ｊ从一治疗骨质疏松的　中药水提液中分离出小檗碱，并研究了小檗碱对ＯＣ　和骨髓细胞共培养体系中Ｏｃ样细胞（ｏｃＬｓ）的作　用。研究发现小檗碱呈剂量依赖地掷制牙本质磨片上　吸收陷窝的形成，并且减少了ＴＲＡＰ（＋）的ＯＣＬｓ　乳腺组织却起到雌激素拮抗剂的作用，能诱导人类乳　腺癌细胞ＭＣＦ一７　ｐ５３的表达和细胞凋亡。　３成骨细胞和骨细胞的凋亡　由于在技术上较难精确检测体内ＯＢ凋亡，ｏＢ凋　亡的研究进展比ｏｃ缓慢。到达骨再建部位的ｏＢ较　最终包裹到骨基质中的骨细胞和位于骨小梁表面的衬　里细胞总和要多。Ｊｉｌｋａ等［１７　３认为这一部分消失的ＯＢ　是以凋亡方式死亡的。在体外实验中，不同的研究小　组　０　均观察到一定条件下Ｏｇ的凋亡。就在最近，　Ｓａｒｋａｒ等　利用回转器模拟太空飞行时的微重力环　境，２４ｈ后观察到大量的培养的ＯＢ样细胞ＲＯＳ　１７／　２＿８凋亡，提示Ｏ１３凋亡可能在真正太空飞行所致的　骨丢失中起重要作用。学者们对ＯＢ凋亡的机制进行　了研究。Ｋａｗａｋａｍｉ等　１　首次检测到在人的成骨细胞　系ＭＧ６３和原代培养的ＯＢ高表达Ｆａｓ抗原，并通过　抗ＦａｓＩｇＭ诱导细胞凋亡证明Ｆａｓ蛋白为功能性表达。　激活的外周血单棱细胞（ＰＢＭＣｓ）的质膜上高表达　ＦａｓＬ，在其上清中有可溶性ＦａｓＬ产生，二者均能诱　导ＭＧ６３和原代培养ＯＢ凋亡，而Ｆａｓ嵌合蛋白则可　阻断这一效应。Ｊｉｌｋａ等【”ｊ检测到撤除血清或加人肿　瘤坏死因子（ＴＮＦ）所诱导的鼠ＯＢ细胞系ＭＣ３１、３一　Ｅｌ的凋亡，而ＴＧＦ—Ｂ和白介素一６（ＩＬ一６）型细胞　因子则可对抗凋亡的发生。他们也证实了抗Ｆａｓ抗体　诱导ＭＧ６３细胞凋亡，并发现这一过程伴随着促凋亡　蛋白Ｂａｘ和抗凋亡蛋白Ｂｃｌ一２二者比率增高。Ｔｓｕｂｏｉ　等【　Ｊ研究了类风湿患者关节周骨质中ＯＢ凋亡和局部　细胞因子的可能关系。在体外实验中，他们检测到　ＭＧ６３细胞和原代培养的ＯＢ在加入ＩＬ一１Ｂ或ＴＮＦ—　ａ之后Ｆａｓ表达增高，并且显著地增加Ｆａｓ介导的细　胞凋亡，二者一起加入则具有叠加效应。结果提示：　ＩＬ一１Ｂ和ＴＮＦ一Ⅱ通过上调Ｆａｓ介导的ＯＢ凋亡减少　ＯＢ数量，可能是引起类风湿关节炎患者关节周骨质　疏松的机制之一。　上研究揭示了Ｆａｓ—ＦａｓＬ介导的　信号途径在ＯＢ凋亡的诱导中起着重要作用　糖皮质激素过量应用常能引起继发性骨质疏松　症，并且在骨质疏松症所有发病原因中列第３位。这　种骨质疏松症以弥漫性骨丢失、骨形成减少及小块骨　坏死为特征。在体外实验中，Ｊｉｌｋａ等＿】　检测到地塞　维普资讯 http://www.cqvip.com

米松可促进鼠骨髓细胞培养中ＯＢ祖细胞的凋亡，【Ｌ　一６型细胞因子可对抗凋亡的发生。在体内实验中，　Ｗｅｉｒｔｓｔｅｉｎ等【２１　Ｊ给小鼠泼尼松２７ｄ后，小鼠骨密度及　血浆中降钙素水平降低，骨小粱变窄，并伴有骨形成　减少和骨转换降低。同时观察到脊椎骨中０Ｂ凋亡增　加了３倍，干骺端皮质骨中２８％的骨细胞出现细胞凋　亡。更重要的是，在糖皮质激素应用过量导致的骨质　疏松患者中，约５％的骨细胞和３Ｏ％的０Ｂ出现细胞　凋亡，而在对照组中却未检测到。骨细胞的功能尚未　被完全了解，但有学者认为骨细胞参与局部微小损害　的“感知”，并传导信号引起骨再建修复。故Ｍａｎｏｌａ－　ｇａｓ等　２２　Ｊ认为，骨细胞凋亡增加可能是糖皮质激素过　量引起“骨坏死”的机制。Ｐｒｏｔｋｉｎ等Ｌ２３ｊ体外研究发　现，糖皮质激素能诱导鼠骨细胞系Ｍｌｏ—Ｙ４细胞和　从鼠锁骨分离培养的０Ｂ凋亡，而双膦酸盐和降钙素　均能对抗细胞凋亡的发生。在体内实验中，皮下植人　泼尼松３ｄ前注射阿伦膦酸钠可以防止骨丢失和阻断　糖皮质激素诱导的０Ｂ凋亡增加。这些体内外实验结　果提示，双膦酸盐和降钙素治疗糖皮质激素引起的骨　质疏松的部分机制在于防止ＯＢ和骨细胞的凋亡。　４结束语　细胞凋亡是当今医学研究的热点领域之一，众多　研究提示细胞凋亡异常是肿瘤、艾滋病等多种疾病发　病的重要原因。骨内细胞凋亡和骨质疏松症有着密切　关系也是毋庸置疑的。近年来，有关细胞凋亡分子调　控机理的研究取得了广泛的进展。包括ｃａｓｐａｓｅ家族　的发现，ｂｃｌ一２、ｂａｘ、ｐ５３等基因及其蛋白质调控细　胞凋亡机理的研究进展，以及线粒体在凋亡过程中的　重要作用等。所有这些进展都太大推动了骨质疏松症　发病机制的研究。尽管如此，在这一领域中仍有很多　问题需要解决，澄清和证实。例如，在早先的概念　中，认为雌激素主要通过促进ＯＣ凋亡而抑制骨丢失，　最近有研究却发现雌激素也可抑制ＯＢ和骨细胞凋亡　～　。可见，即使是雌激素，双膦酸盐及降钙素等　已被广泛应用的药物，其作用机理也未被完全阐明。　除此以外，进一步研究其它药物（如雌激素受体调节　剂及某些中草药）的作用效果及作用机理也是今后的　重点，以期筛选出作用效果好、副作用小的更有前途　的药物，从而最终有益于骨质疏松症的防治。　参考文献　１　Ｒａｙ　ＮＦ，Ｃｈａｒｔ　ＪＫ，Ｔｈａｍｅｒ　Ｍ　ｅｔ　ａ１．Ｊ　Ｂｏｎｅ　Ｍｉｎｅｒ　Ｒｅｓ，　１９９７；１２：２４～３５　国外医学ｔ老年医学分册２００２年３月第２３卷第２期　２　ＫａｍｅｄｏＴ，ＭａｎｏＨ，ＹｕａｓａＴ　ｅｔＯ１　Ｊ　ＥｘｐＭｅｄ，１９９７；Ｉ８６：　４８６～４９５　３　Ｈｕｅ．ｈ￣Ｉ）Ｆ，Ｄ　Ａ，Ｔｉｆｆｅｅ　ＪＣｅｌｏ１　ＮａｔＭｅｄ，１９９６；２：１１３２　～１１３６　４．￣－－ｎｅｔｔ　ＴＲ，Ｌｉｔｌｄｓａｙ　Ｒ，砌ｂ　ＪＭ　ｅｔ　ａ１．Ｊ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，１９９６；　１４９：５０３～５０８　５　ＯｒｅｆｆｏＲＯ，Ｋｔｔｓｅｃ　Ｖ，Ｖｉｒｄｉ　ＡＳ　．Ｈｉｓｔ￣ｃｈｅｍ　ＣＡＩ　Ｂｉｏ［，　１９９９；１１１：１２５～１３３　６　ＦｉｏｒｅｌｌｉＧ，Ｇｏｒｉ　Ｆ，ＰｅｔｉｌｌＩＭ　ｅｔ口　ＰｒｏｃＮａｄＡｃａｄ　ＳｄＵ　．　１９９５；９２：２６７２～２６７６　７　Ｓ．ｈｅｖｄｅ　（，Ｐｉｋｅ　ＪＷ．１３Ｉｏｏｄ，１９９６；８７：２６８３－－２６９２　８　Ｇｏｌｄｂｅｒｇ　ＹＰ，ＮｉｃｔｖｏｌｓｏｎＤＷ，ＲａｓｐｅｒＤＭ　ｅｌ　ｃｄ．Ｎａｔ　Ｇｅｎｅｔ，　１９９６；１３：４４２～４４９　９　Ｒｏｔｏｎｄａ　ｊ，Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ　ＤＷ，Ｆａ　ＫＭ　ｅｌ　Ｎａｔ　Ｓｔｒａｃｔ　Ｂｉ０ｌ，　１９９６；３：６１９～６２５　１０，Ｚｅｃｃｈｉ—Ｏｒｌａｎｄｉｎｌ　Ｓ．ＦｏｍｆｉｇｌｉＬ．Ｔａ血Ａ　．ＢｉｃｃｈｅｍＢｋ＞　ｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃ￣ｎｌｒｎｕｎ．１９９９；２５５：６８０～６８５　儿ＲｕｓＭｌＲＧ．ＲｏｇｅｒｓＭＪ　Ｂｉｏｐｌｘ￣ｐｈｏｔｍｔｅｓ：ｆｒｏｍｔｈｅｌａｂｏｒａｔｏ一　ｔｏ　ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃ　ａｎｄ　ｈａｃｋ　ａ　ｎ　Ｂｏｎｅ，１９９９；２５：９７～１０６　１２　ＨｕｇｈｅｓＤＥ，Ｗｒｉｇｈｔ　ＫＲ，Ｕｙ　ｅｔ　．Ｊ　Ｂｏｎｅ　Ｍ￣ｎｅｒＲｅｓ，　１９９５；１０：１４７８～１４８７　１３　ＲｅｓｚｒａＡＡ，Ｈａｌ￣ｓｙ—Ｎａｇｙ　ＪＭ，Ｍａｓａｒａｃｈｉａ　ＰＪ　ｅｌ　ａ１．Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ　ｌ９９９；２７４：３４９６７－－３４９７３　１４　Ｈｕｌｙ￣ｎｇ　Ｌ，Ｔａｔｓｕｒｏ　Ｍ，Ｙａｓｕｈｌｒｏ　Ｔ　ｅｔ　ａｌ　Ｂｉｏ　Ｐｈａｒｍ　ＢｕＵ，　１９９９；２２：３９１～３９６　１５　ＮｕｔｔａＵ　ＭＥ，Ｂｒａｄｈａｅｒ　ＪＮ，ＳｔｒｏｕｐＧＢ　ｅｌ　０２．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，　１９９８；１３９：５２２４～５２３４　１６　ＧｒａｓｓｅｒＷＡ，ＰａｎＬｃ，ＴＮ３ｍｐｓｏｎＤ０　ｅｔ　．Ｊ　ＣｏｌｌＢｉｏｃｈｅｍ，　１９９７；６５：１５９～１７１　ｌ７　ＪＩＩ１【ａ　ＲＬ，ＷｅｉｎｓｔｅｌｎＲＳ．　ｄｏＴ　ｅｔＯ１　Ｊ　ＢｏｎｅＭｉｎｅｒＲｅｓ，　１９９８；１３：７９３～８０２　１８　Ｋａｗａｋａｍ［Ａ，Ｅｇｕｃｈｔ　Ｋ，Ｍａｔｓｕｏｋａ　Ｎ　ｅｌＯ１．ＪＢｏｎｅＭｉｎｅｒ　Ｒｅｓ，１９９７；１２：１６３７～１６４６　１９　１　ｂ０ｉＭ，Ｋａｗａｋａｍｌ　Ａ．Ｎａｋａｓｈｌｍａ　Ｎ　ｅｔ　ａ１．Ｊ　Ｌａｂ　Ｃｌｉｎ　Ｍｅｄ．１９９９：１３４：２２２～２３１　２０　Ｓａｒｋａｒ　Ｄ，Ｎａｇａ￣ａ　Ｔ．Ｋｎｇａ　Ｋ　ｅｔ　ａ１．Ｊ　ＢＯｎｅ　Ｍｉｎｅｒ　Ｒｅｓ，　２Ｏ００；１５：４８９～４９８　２１　Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ　ＲＳ，Ｊｉｌｋａ　ＲＬ，Ｒａｒｌｉｔｔ　ＡＭ　ｅｔ　ｏ１．ｊ　ａｉｎ　Ｉｎｖｅｓｔ，　１９９８；１【）２：１７４～１８２　２２　Ｍｍｄａｇａｓ　ｓｃ．Ａｇｉｎｇ　Ｃｌｉｎ　Ｅｘｐ　Ｒｅｓ，１９９８；１０：１８２～１９０　２３　Ｐｒｏｔｋｉｎ　Ｌ１，Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ　ＲＳ，　ｔｔ　ＡＭ　ｅｔ　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｉｎｖｅｓｔ．　１９９９；１０４：１３６３～１３７４　２４　Ｔｏｍｋｉｎｓｏｎ　Ａ，Ｇｅｖｅｒｓ　ＦＦ，Ｗｉｔ　ＪＭ　ａＬ．Ｊ　Ｂｏｎｅ　Ｍｉｎｅｒ　Ｒｅｓ，　１９９８：１３：ｌ２４３～１２５０　２５　ＭａｎｏＤｇａｓＤＣ，ＷｅｉｎｓｔｅｉｎＲｓ，ＢｅｌｌｉｄｏＴ　ｅｌ　ａｌ　Ｊ　Ｂ。ｎｅＭ￣ｎｅｒ　Ｒｅｓ，１９９９：１４：ｓ１６９（Ａｂｓｔｒａｃｔ）　（２ｏ０１一仉一０３收碚）