CJCM 中医临床研究 2015年第7卷第16期 -29- 调心安神针法对室性心律失常模型兔心肌组织 β2肾上腺素能受体的影响 Effects of Tiaoxin Anshen acupunture on β2-adrenergic receptors in rabits with ventricular arrhythmia 王 锐1 郭 丽1 李永春2 崔华峰1 韩 晶1 王长春1 李承家1 安 娜2 谢 森2 （1.山东中医药大学附属医院，山东 济南，250011；2.山东中医药大学，山东 济南，250011） 中图分类号：R245.3 文献标识码：A 文章编号：1674-7860（2015）16-0029-02 【摘 要】 目的：研究调心安神针法对于室性心律失常模型兔心肌组织β2肾上腺素能受体（ADRB2）蛋白表达的影响。方法：采用兔耳缘静脉注射氯化钡的方法制作室性心律失常模型。将40只新西兰兔随机分为正常组、模型组、针刺组、药物组，针刺组施以调心安神针刺法（取穴：灵台、神道、双侧内关、百会），药物组给予心律平灌胃。实验完毕后取兔左心室，免疫印迹试验技术检测ADRB2蛋白表达水平。结果：模型组的ADRB2蛋白表达较对照组有增加的趋势，药物组及针刺组均明显低于对照组及模型组，药物组的ADRB2蛋白表达低于针刺组。结论：调节心肌组织β2肾上腺素能受体表达可能是该针法治疗心律失常的靶点之一。 【关键词】 调心安神针法；室性心律失常；β2肾上腺素能受体；免疫印迹试验 【Abstract】 Objective: To observe effects of the Tiaoxin Anshen acupuncture on the expression of β2-adrenergic receptors (ARDB2) protein in cardiac muscle of rabbits with ventricular arrhythmia. Methods: 40 rabits were randomly divided into four groups: the control group, the model group, the acupuncture group and the propafenone group. The acupuncture group were treated by the Tiaoxin Anshen acupuncture (points selected: Lingtai, Shendao, Shuangce Neiguan and Baihui). And the propafenone group were treated with the propafenone by intragastric. Left ventricle of all the rabbits were taken out to test the expression of β2-adrenergic receptors (ARDB2) protein by western blot. Results: Expression of ADRB2 proterin was increased in rabbits of the model group than the normal group, decreased in rabbits of the propafenone group and the acupuncture group than the control group and the model group. Expression of ADRB2 protein in the propafenone group was lower than the acupuncture group. Conclusion: Maybe regulating the expression of ARDB2 protein was one of the therapeutic target spots of the Tiaoxin Anshen acupuncture on ventricular arrhythmia. 【Keywords】 The tiaoxin Anshen acupuncture; Ventricular arrhythmia; β2-adrenergic receptors; Western blot test doi:10.3969/j.issn.1674-7860.2015.16.013 研究表明，交感神经系统活性升高在致命性心律失常的发生中占有重要地位[1]。β受体阻滞剂能有效控制交感神经兴奋相关的室性心律失常，多数β受体阻滞剂能有效减少室性早搏。前期研究发现，调心安神针法治疗早搏疗效满意[2]。我们采用兔耳缘静脉注射氯化钡的方法制作室性心律失常模型，观察调心安神针法对其左心室心肌组织β2肾上腺素能受体（ADRB2）的影响。 1 材料与方法 1.1 动物与主要试剂 新西兰兔40只，体重1.5～2.0kg左右，雌雄各半，由山东省农科院提供，合格证号：SCXK（鲁）20090013。beta-actin（内参）：购自北京博奥森生物技术有限公司，货号bs-0061R；ADBR2：购自北京博奥森生物技术有限公司，货号bs-0947R；Marker：购自碧云天生物科技有限公司，货号P0066。 1.2 分组与建模 将40只新西兰兔按照随机数字表法分为四组，即正常组，模型组，针刺组，药物组，每组各10只。用10%水合氯醛5mL/kg腹腔注射麻醉（心律平组给药1h后），仰位固定于兔固定台上。将针形电极插入四肢远端皮下，选择标准II导联，待心电图稳定后沿耳缘静脉注射20%氯化钡10mL/kg造成室性心律失常模型。药物组给予心律平40mg/kg灌胃，其余各组不予处理。 1.3 针刺方法 参照中国针灸学会实验针灸专业委员会制订的《动物针灸穴位图谱》，针刺组于造模后即刻给予针刺内关、百会、灵台、神道。灵台、神道穴位于背部正中线上，分别为胸椎六、七及五、六棘突间，向上斜刺5mm，用震颤法快速小幅度行针1min后起针；百会穴位于第七腰椎与第一荐椎棘突间，向后平刺5mm；内关穴位于前臂下1/6折点处内侧，桡、尺骨间隙中，双侧内关分别直刺5mm，行针1min后接电针治疗仪，疏密波，刺激强度以家兔上肢出现轻微颤动为度。各组均观察体表心电变化，留针至恢复正常心律后停止记录，拔出针电极，立即处死动物，取左心室，液氮固定。 Clinical Journal of Chinese Medicine 2015 Vol.(7) No.14-30- 1.4 Western-blot法检测ADRB2蛋白表达 电泳：提取蛋白后，将样品加入到PAGE的加样孔中，80V电泳30min左右，待溴酚蓝标记的样品带进入分离胶后，改至100V继续电泳，直至溴酚蓝出胶后卸胶。转移：用Bio-Rad 湿法转移系统将蛋白从PAGE胶转移至纤维素膜（NC），冰水浴中100V转移2h。转移后将NC膜置于丽春红染色液中染色，标记蛋白标准分子量条带，再用清水洗去染料。封闭：将膜放置于脱脂牛奶封闭缓冲液中，室温下置于摇床上孵育1h。抗体孵育：弃去封闭液，按推荐的稀释比配制针对各蛋白的一抗加到膜上，室温孵育2h或4℃过夜；用洗涤液洗膜4次，每次10min。再按推荐比例稀释HRP偶联二抗，加入到膜上，室温孵育45min；用洗涤液洗膜4次，10min/次。发光反应：配制ECL发光试剂，均匀铺于膜上，反应2min后吸去，用Fusion FX化学发光成像仪扫描图象并分析。 2 结 果 结果显示，模型组的ADRB2蛋白表达较对照组有增加的趋势，药物组及针刺组均明显低于对照组及模型组，针刺组的ADRB2 蛋白表达高于药物组。见图1、图2。 图1 图2 3 讨 论 植物神经系统是调节心脏功能的最重要因素，β2肾上腺素能受体是交感神经递质的主要靶受体。研究表明，ADRB2与心肌梗死后恶性心律失常发生关系密切[3]。有学者认为，肾上腺素可能通过作用于ADRB2，使心肌复极离散度增加[4]；延长负荷依赖的心室动作电位时限和缩短不应期[5]，从而触发心律失常。而ADRB2拮抗剂可以显著降低心室颤动发生率[6]。 静脉注射氯化钡是造成室性心律失常模型的常用方法之一[7]。我们给予兔耳缘静脉注射氯化钡的剂量为10mg/kg，发现诱发兔的心律失常主要为室性早搏和室性心动过速，且持续时间相对较长，便于针刺的实施及观察。 本实验表明，造模后心肌组织ADRB2蛋白表达有增高的趋势，这与王氏等[8]的研究是一致的，即ADRB2的表达改变往往是一个慢性的过程。调心安神针法与心律平干预后，心肌组织ADRB2的蛋白表达明显降低，且心律平的作用大于针刺。我们已知，ADRB2的激活可以刺激L-型钙通道，使L-Ca2＋电流增加[9]。而心律平的作用与ADRB2相反，可阻断心肌细胞L-型钙通道[10]，及通过对Na＋/Ca2＋交换电流的抑制，使Ca2＋内流减少[11]。我们认为，由于调心安神针法中灵台、神道穴的位置与脊神经节段性分布的密切关联，该针法作用于躯体感觉神经末梢及交感神经末梢，通过神经的轴突反射、节段反射途径作用于脊髓相应节段的植物神经中枢[12]，抑制了ADRB2的表达，以达到消除心律失常的作用。 针刺治疗心律失常是个多靶点、多层次、多途径的过程。本研究表明，调心安神针法能明显降低室性心律失常兔心肌组织ADRB2蛋白表达，这可能是该针法治疗室性心律失常的机理之一。 参考文献： [1]Low eMD, Row land E, BrownM J, et al. 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