２７３４ 重庆医学２０１０年１０月第３９卷第２Ｏ期 ・实验研究・ ＴＳＡ对食管癌细胞系ＥＣ９７０６细胞周期作用及分子机制的探讨 刘 霞，冯 婷，马俊芬，赵继敏，杨洪艳，黄幼田，董子明△ （郑州大学基础医学院病理生理学教研室摘 要：目的４５００５２） 研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素Ａ（ＴＳＡ）对食管癌细胞ＥＣ９７０６细胞周期的作用及机制。方法 将浓度为 ０．５、１．０、１．５“ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ作用ＥＣ９７０６细胞２４ ｈ，用ＭＴＴ观察不同浓度ＴＳＡ对ＥＣ９７０６细胞的生长抑制作用；流式细胞仪检 测细胞生长及周期；Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ检测ＴＳＡ对食管癌细胞周期相关基因的表达。结果 １．０／ｌｍｏＩ／Ｌ浓度的ＴｓＡ对ＥＣ９７０６细 胞有明显的生长抑制作用，并呈现一定的量效关系，在１．０ ｍｏｌ／Ｌ浓度之上可明显诱导食管癌细胞ＥＣ９７０６细胞周期阻滞，明显 增强ｐ２１、ｐ２７基因的表达，明显降低ＣＣＮＤ１、ＣＤＫ４Ｄ基因的表达。结论一定剂量的ＴＳＡ可抑制食管癌ＥＣ９７０６细胞的生长， 通过多个细胞周期相关基因诱导食管癌细胞细胞周期阻滞，细胞阻滞的发生与ｐ２１、ｐ２７基因表达的增加及ＣＣＮＤ１、ＣＤＫ４Ｄ 基因表达的减少相关。 关键词：曲古菌素Ａ；细胞周期；Ｐ２１；Ｐ２７；ｃｃＮＤ１；ＣＤＫ４Ｄ；’食管癌细胞 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－８３４８．２０１０．２０．０１５ 中图分类号：Ｒ７３５．１；Ｒ７３—３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１－８３４８（２０ｌ０）２０—２７３４—０３ Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＴＳＡ ｔｏ ｅｓｏｐｈａｇｕｓ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＥＣ９７０６ ｍｉｔｏｔｉｃ ｃｙｃｌｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｉ ＩＵｘｉａ，ＦＥＮＧＴｉｎｇ，ＭＡ Ｊｕｎ—ｆｅｎ，ｅｔ ａ１． （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｐｈ，ｓｉｏＬｏｇ，，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５００５２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＴＳＡ ｏｎ ｔｈｅ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ＥＣ９７０６ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｅｆｆｅｃｔ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ０．５，１．０，１．５ ｕｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ ａｃｔｉｎ ＥＣ９７０６ ｃｅｌｌｓ ２４ ｈｏｕｒｓ，ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＴＳＡ ｏｉｌ ＥＣ９７０６ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ ＭＴＴ，ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｃｙｃｌｅ；ＴＳＡ ｏｎ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ—ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ ｔｅｓｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ １．０￣ｔｍｏｌ／Ｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＳＡ ｏｎ ｔｈｅ ＥＣ９７０６ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｄｅｆｉｎｉｔｅ ｄｏｓｅ－ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ，ａｂｏｖｅ １．０／ｌｍｏｌ／Ｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｃｏｕｌｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｄｕｃｅ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ａｒｒｅｓｔ ｏｆ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ＥＣ９７０６ ｃｏｕｌｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｐ２１，ｐ２７ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ＣＣＮＤ１，ＣＤＫ４Ｄ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｄｏｓｅ ｏｆ ＴＳＡ ｉｎｈｉｂｉｔｅ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｃａｎｃｅｒ ＥＣ９ ７０６ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ—ｒｅ～ ｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ａｒｒｅｓｔ，ｃｅｌｌ ｂｌｏｃｋ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｒｅｖｅｌａｎｔ ｗｉｔｈ ｐ２１，ｐ２７ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ～ ｃｒｅａｓｅ ａｎｄ ＣＣＮＤ１，ＣＤＫ４Ｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｇｅｎｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ；ｍｉｔｏｔｉｃ ｃｙｃｌｅ；Ｐ２１；Ｐ２７；ＣＣＮＤ１；ＣＤＫ４Ｄ，ｅｓｏｐｈａｇｕｓ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ 组蛋白乙酰化酶（ｈｉｓｔｏｎｅａｃｅｔｙ１ａｓｅ，ＨＡＴ）和组蛋白去乙酰 化酶（ｈｉｓｔｏｎｅｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ，ＨＤＡＣ）是调节组蛋白乙酰化状态的 一购自美国Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ；ＥＣＬ显色试剂盒购自ｊＥ京中杉生物工程 公司，蛋白垂直电泳仪和印迹转膜仪购自美国Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司， 流式细胞仪购自ＦＡＣＳｓｏｒｔ，ＢＤ公司，食管癌细胞株ＥＣ９７０６ 由郑州大学病理生理学教研室提供。 １．２细胞培养 将ＥＣ９７０６细胞放在含１Ｏ 胎牛血清、１００ ｍｇ／ｍＬ链霉素、１００ ｍｇ／ｍＬ青霉素的ＲＰＭＩ－１６４０培养液里， 放在３７℃，５％ＣＯ 培养箱中培养。取对数生长期的细胞处 理后分组，实验组分为０．５、１．０、１．５ ｇｍｏｌ／Ｉ ＴＳＡ。对照组换 为等浓度的ＤＭＳ０同时培养２４ ｈ后收集。 对功能相互拮抗的蛋白酶，它们相互的动态平衡控制着染色 种组蛋白去乙酰化酶（ｈｉｓｔｏｎｅｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ，ＨＤＡＣｓ）抑制剂， 质的结构和基因的表达。曲古菌素Ａ（ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ，ＴＳＡ）是 一能够抑制ＨＤＡｃｓ的活性。由于它能够改变组蛋白的乙酰化 状态，从而可以选择性地肿瘤相关基因。近年来，研究提 示去乙酰化转移酶抑制剂可明显抑制肿瘤的生长，虽然目前对 其作用机制仍不十分清楚，但其中一个重要机制是通过阻滞细 胞周期来实现其细胞抑制作用的＿１］。具体的机制因去乙酰化 转移酶抑制剂药物和肿瘤的各异而不同。的相关基因也 不相同。ＴＳＡ对食管癌细胞周期影响的尚未见报道，因此，本 研究主要观察ＴＳＡ对食管癌ＥＣ９７０６细胞周期的影响，探讨 ＴＳＡ对ＥＣ９７０６细胞周期发挥作用的分子机制。 １材料与方法 １．１ 主要试剂和仪器ＴＳＡ购自Ｓｉｇｍａ（ＵＳＡ）公司，由ＤＭ— １．３ ＴＳＡ细胞生长抑制试验（ＭＴＴ法） 实验分组：实验组， 细胞分别给予０．５、１．０ １．５ ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ处理，使用不含胎牛 血清的培养基；空白对照组ＭＴＴ法检测不同浓度ＴＳＡ对细 胞生长的抑制作用，细胞经０．０５ 胰酶消化处理制成３×１０ 个／ｍＬ细胞悬液，接种在９６孔板中，每孔加入１００ Ｌ，每个浓 度设６个复孔，以未加药细胞作为对照，待细胞贴壁后，分别加 入０．５、１．０、１．５“ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ作用２４ ｈ后，加入２Ｏ ｇＬ ＭＴＴ （５ ｍｇ／ｍＬ）在５ ＣＯ 、３７℃的恒温培养箱培养４ ｈ后弃上清 液，每孔再加入１５０ Ｌ ＤＭＳＯ，待充分溶解后轻微摇床振荡１Ｏ ＳＯ溶解至１ ｍｏｌ／Ｌ，使用前按照相应浓度稀释加入培养基中。 ＲＰＭＩ一１６４０购自Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ公司，胎牛血清购自天津ＴＢＤ生 物有限公司，Ｐ２１、Ｐ２７、ＣｙｃｌｉｎＤ１鼠抗人单抗和抗ＣＤＫ４多抗 通讯作者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｄｏｎｇｚｉｍｉｎｇ＠ＺＺＵ．ｅｄｕ．ｃｎ。 ａｉｒｎ，上酶标仪检测，用波长５７０ ｎｍ比色测定ＯＤ值，计算抑制 重庆医学２０１０年１Ｏ月第３９卷第２Ｏ期 ２７３５ 率。抑制率（ ）＝（空白对照组ＯＤ５７０一实验组ＯＤ５７０）／对 照组ＯＤ５７０。 胞明显减少，并随着ＴＳＡ作用浓度的升高阻滞在Ｇ 期的细胞 显著增高（Ｐ＜０．０５）。 ２．３ ＥＣ９７０６细胞ｐ２１、ｐ２７、ＣＣＮＤ１、ＣＤＫ４Ｄ的表达变化见 １．４流式细胞仪检测细胞周期 取对数生长期的ＥＣ９７０６细 胞，以无血清的ＲＰＭＩ一１６４０培养２４ ｈ同步后，按照上述分组 作用２４ ｈ后，以ＰＢＳ洗涤，用７Ｏ 的冷乙醇在４℃以下固定 图２，０．５、１．０、ｌ＿５￣ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ作用ＥＣ９７０６细胞２４ ｈ后，与 空白对照组比较，０．５￣ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ处理组细胞ｐ２１、ｐ２７、ＣＣ— ２４ ｈ以上，然后离心弃乙醇（３ ０００ ｒ／ｒａｉｎ离心１０ ｒａｉｎ），再加入 １ ｍＬ ＰＢＳ制成细胞悬液后加入ＲｎａｓｅＡ酶（终浓度为１Ｏ ￣ｇ／ｍＬ），室温放置３０ ｍｉｎ，再用５０￣ｇ／ｍＬ的碘化丙啶（ＰＩ）染 ＮＤ１、ＣＤＫ４Ｄ蛋白的表达差异无统计学意义，而１．０￣ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ处理的细胞ｐ２１、ｐ２７蛋白的表达显著提高，并随着ＴＳＡ 作用浓度的升高而增加（Ｐ＜Ｏ．０５），ＣＣＮＤ１、ＣＤＫ４Ｄ蛋白的表 色后，用流式细胞仪分析细胞周期。 １．５ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ检测ｐ２１、ｐ２７、ＣＣＮＤ１、ＣＤＫ４Ｄ蛋白的表 达显著下降，并随着ＴＳＡ作用浓度的升高而降低（Ｐ＜Ｏ．０５）。 空白对照组０ ５ｐｍＩ儿｛０ 帕Ｉ／ｋ １ ５ 舯Ｉ／Ｌ 达参照《分子克隆实验指南》提取肿瘤细胞总蛋白，测定浓度 Ｐ２１ 后，在标准蛋白曲线下算出５Ｏ ｇ蛋白上样量，以Ｂ－ａｃｔｉｎ为内 参照，Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ检测肿瘤细胞表面各基因的表达。将蛋白 经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ后转移至ＰＶＤＦ膜，５ ＢＳＡ摇床封闭３ ｈ后加 入相应的一抗，４℃冰箱孵育过夜，ＴＢＳＴ洗涤３次，二抗孵育 １ ｈ后用化学发光法进行Ｘ线胶片曝光显影。用凝胶成像仪 进行图像定量分析。 １．６统计学方法 所得数据用ＳＰＳＳ１０．０统计软件处理，多 样本均数采用单因素方差分析。以Ｐ＜ｏ．０５为差异有统计学 意义。 ２结 果 ２．１ ＴＳＡ对ＥＣ９７０６细胞增殖影响 见表ｌ，不同浓度ＴＳＡ 处理ＥＣ９７０６细胞２４ ｈ后，与空白对照组比较，０．５“ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ处理组细胞的抑制率差异无统计学意义，而１．０ ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ处理的细胞抑制率显著增加，并随着ＴＳＡ作用浓度的升 高而升高（Ｐ＜０．０５）。 表１ 不同浓度的ＴＳＡ对ＥＣ９７０６细胞增殖的 影响（ ±Ｓ， 一６） 组别 抑制率（ ） 空白对照组 ７．８±３．７４ ｏ．５￣ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ处理组 ７．９６±０．１２＃ １．０￣ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ处理组 ２０．０３±０．２１ １．５￣ｍｏｌ／ＬＴＳＡ处理组 ２６．４０±０．５８ 与空白对照组比较， ：Ｐ＜Ｏ．０５；不同浓度ＴＳＡ处理组间两两比 较，＃：Ｐ＜０．０５。 Ｉ盛 Ｌ—▲ 图１ 不同浓度ＴＳＡ对ＥＣ９７０６细胞细胞周期的影响 ２．２ ＴｓＡ对ＥＣ９７０６细胞细胞周期的作用 见图１，０．５、 １．０、１．５￣ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ作用ＥＣ９７０６细胞２４ ｈ后，与空白对照 组比较，０．５￣ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ处理组细胞的周期无明显差异，而 １．０￣ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ处理后滞留在Ｇ 期的细胞显著增加，ｓ期细 Ｐ２７ Ａｃｔｆｎ 空白对照组０ ５ ｕＩＩｏｌ，Ｌ ｌ ０ ｕ∞ｔ／Ｌ １ ５ 釉Ｉ／Ｌ 图２叭一 一 ＥＣ９７０６细胞ｐ２１、ｐ２７、 ～ ＣＣＮＤ１、ＣＤＫ４Ｄ的表达变化 ３讨 论 组蛋白的乙酰化和去乙酰化主要是通过ＨＡＴ和ＨＤＡＣ 来实现的ｌ２］。生理状态下，它们相互的动态平衡控制着染色质 的结构和基因的表达。一旦平衡在异常状态下被破坏，ＨＤＡＣ 活性增强，原有的基因表达失衡，细胞周期和细胞增殖的 分子表达紊乱，从而导致细胞恶变。组蛋白去乙酰化抑制剂可 以使某些部位的核心组蛋白高度乙酰化，导致某些基因的启动 子激活，从而使与周期相关的蛋白得到表达，进而使肿瘤细胞 出现增生停止、分化、凋亡转移抑制等变化。ＴＳＡ是一种组蛋 白去乙酰化酶抑制剂（ＨＡＤＣＩ），能特异地抑制组蛋白去乙酰 化；使高度酰基化的组蛋白积累，改变染色体结构，抑制细胞增 殖，诱导肿瘤细胞分化和（或）凋亡，是一类具有广泛应用前景 的抗肿瘤药物之一口］。有研究表明，ＴＳＡ可以以时间和剂量 依赖性方式显著抑制多种肿瘤细胞增殖，本研究证实了ＴＳＡ 可以抑制肿瘤细胞生长，可使食管癌细胞ＥＣ９７０６细胞周期停 滞于Ｇ。／Ｇ 期。并且发现０．５￣ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ作用ＥＣ９７０６细 胞对细胞生长无明显影响，与空白对照组比较抑制率差异无统 计学意义，而１．０ ｍｏｌ／Ｌ ＴＳＡ作用ＥＣ９７０６细胞显著抑制细 胞生长，并且抑制率明显增加，并且表现出一定的剂量效应。 进一步研究表明ＴｓＡ对食管癌细胞周期的阻滞作用是通过调 控一些细胞周期相关基因的表达来起作用的，ＴＳＡ可以明显 增加ｐ２１、ｐ２７等许多细胞周期抑制基因的表达，同时降低了 ＣＣＮＤ１、ＣＤＫ４Ｄ等细胞周期促进基因的表达，并且随着ＴＳＡ 作用浓度的增加而增强。ｐ２１、ｐ２７是细胞周期中非常重 要的基因，能够与ＣＣＮＤ１形成复合物使细胞周期停滞在Ｇ 期；它还可以通过Ｃ端与ＰＣＮＡ相互作用，阻断ＰＣＮＡ活化 ＤＮＡ聚合酶的活性从而抑制ＤＮＡ的合成，使细胞周期停 滞 ４＿６＿。其主要是抑制细胞周期，参与细胞的生长、分化、衰老 及死亡过程，同时又与肿瘤发生密切相关，在细胞的生理、病理 ２７３６ 重庆医学２０１０年１０月第３９卷第２Ｏ期 杂志，２００７，１４（１５）：１１２１． 过程中发挥重要的作用。而ＣＣＮＤ１过表达与某些肿瘤的组 织类型相关，其功能主要是促进细胞增殖，是Ｇ 期细胞增殖 Ｅｓ］Ｒａｄｈａｋｒｉｓｈｎａｎ ＳＫ，Ｆｅｆｉｃｉａｎｏ ＣＳ，Ｎａｊｍａｂａｄｉ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎ— ｓｔｉｔｕｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ２Ｆ－１ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｐ２１一ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ 信号的关键蛋白质，被视为癌基因，其过度表达可致细胞增殖 失控而恶性化，但是它在不同肿瘤中阳性检出率不同，与组织 分化程度相关，在分化差的肿瘤中表达增强。ＣＤＫ则是一类 ｃｙｃｌｅ ａｒｒｅｓｔ ｉｎ Ｓ ｐｈａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ Ｅ Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ， ２００４，２３（２３）：４１７３． 重要的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，包括ＣＤＫ１～７种，主要生物 学作用是启动ＤＮＡ的复制和诱发细胞的有丝＿７＿８ｌ，以复 合物形式出现，在Ｇ 早期，ＣＣＮＤ表达并与ＣＤＫ２或ＣＤＫ４结 ［６］王振国，郭和清．膀胱癌Ｈａ—ｒａｓ基因突变、ｐ２１蛋白表达 及其意义口］．中国现代医学杂志，２００３，１３（８）：５９． ［７］Ｋａｌｐａｎａ Ｓ，Ｊｏｓｈｉ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｐｒｏ ｒｔｉｅｓ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｐ２７６一ｏｏＥＪ］．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ 合，成为始动细胞周期的启动子＿９。 ，１．０／，ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＴＳＡ 对ＥＣ９７０６细胞有明显的生长抑制作用，并呈现一定的量效关 Ｔｈｅｒ，２００７，６（３）：９１８． 系。本研究发现ＴＳＡ在１．０ Ｆｍｏｌ／Ｌ浓度之上可明显诱导食 ［８］Ｙｕ Ｑ，Ｓｉｃｉｎｓｋａ Ｅ，Ｇｅｎｇ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｆｏｒ ＣＤＫ４ 管癌细胞ＥＣ９７０６细胞周期阻滞，可明显增强ＥＣ９７０６细胞中 ｋｉｎａｓｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，２００６，９ ｐ２ｌ、ｐ２７等基因的表达，明显降低ＣＣＮＤ１、ＣＤＫ４Ｄ等基因的 （１）：２３． 表达，但是否ＴＳＡ抑制ＥＣ９７０６细胞的生长还与其它基因表 ［．９］Ｈｅｎｋｅｎｓ Ｔ，Ｐａｐｅｌｅｕ Ｐ，Ｅｌａｕｔｌ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ，ａ— 达的改变相关，具体的机制有待继续研究探讨。 ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｒａｔ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌ Ａｐｐｌ 参考文献： Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００７，２１８（１）：６４． Ｅｌｉ Ｔｉａｎ ＦＱ，Ｃｈｅｎ ＸＳ，Ｘｉｅ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ ［１Ｏ］Ｓａｃｈｓ ＭＤ，Ｒａｕｅｎ ＫＡ，Ｒａｍａｍｕｒｔｈｙ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｔｅｇｒｉｎ Ｖ ｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＨＤＡＣ１ ｉｎ Ｋ５６２ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎａ Ｊｏｕｒｎａｌ ａｎｄ ｃｏｘｓａｃｋｉｅ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００６，１６（１１）：１６４２． ｂｌａｄｄｅｒ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｕｒｏｌｏｇｙ，２００２，６０：５３１． ［２］ Ａｎｄ Ｍ，Ｈａｎｓｅｎ Ｒ，Ｄｉｎｇ ＲＸ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ３Ｄ ｔｉｓ— ［１１］Ｒａｕｅｎ ＫＡ，Ｓｕｄｉｌｏｖｓｋｙ Ｄ，Ｌｅ ＪＬ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｕｅ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ｄｅｒｅｇｕ ｌａ— ｃｏｘｓａｃｋｉｅ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｐｒｏｓｔａｔｅ ａｎｄ ｉｎ ｔｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ ａｎｄ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ ｐｒｉｍａｒｙ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｐｏｔｅｎｔｉａｌｒｅｌｅ— Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００３，１００（４）：１９４３． ｖａｎｃｅ ｔｏ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ￣Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００２，２：３８１２． ［３］ Ｓｅｏｊ Ｓ，Ｃｈｏｎ Ｙ，Ｋｉｍ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ａｒｒｅｓｔ ａｎｄ ｌｙｔｉｃｉｎ— ｒ１２］Ｋｉｔａｚｏｎｏ Ｍ，Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ ＭＥ，Ａｉｋｏｕ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｅｎｈａｎｃｅｄａｄｅ— ｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＥＢＶ－ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ Ｂ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ａ ｎｏｖｉｒｕｓ ｔｒａｎｓｇｅｎｅ ｉｎ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｃｅｌｌｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｈｉｓ— ｈｉｓ—ｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｌ ｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｉｎｈ ｉｔｏｒＦＲ９Ｏ１２２８［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， Ｒｅｐ，２００８，１９（１）：９３． ２００１，６１：６３２８． ［４］ 张梅芳．原发性肝细胞癌组织中ｐ５３和ｐ２１ ｗＡＦ／ＣＩＰ１ 及ＭＤＭ２蛋白的表达及其临床意义ＥＪ］．中华肿瘤防治 （收稿日期：２Ｏ１Ｏ一０２一Ｏ４修回日期：２０１０ ０３—０４） （ｄａ接第２７３３页） ｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｃａｌｃｉｕｍ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎ－ｉｎｓｕ— 参考文献： ｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ （Ｃｏｐｅｎｂ），１９９３，１２９（６）：５ｌ９． ［１］ Ｖａｓａｖａｄａ ＲＣ，Ｗａｎｇ Ｌ，Ｆｕｊｉｎａｋａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ［５］ Ｌｏｚａｎｏ Ｄ，ｄｅ Ｃａｓｔｒｏ ＬＦ，Ｄａｐｉａ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｐａｒａｔｈｙ Ｃ——ｚｅｔａ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｂｅｔａ－ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａ—－ ｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｔｉｏｎ：ａｎ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｉｎ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｅｔａ—ｃｅｌ１ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｅｓ—ｒｅｌａｔｅｄ ｏｓｔｅｏｐｅｎｉａ［Ｊ］．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏ— ｍｉｔｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００７，５６（１１）：２７３２． ｇＹ，２００９，１５０（５）：２０２７． ［２］ Ｌｅｇａｋｉｓ Ｉ，Ｍａｎｔｏｕｒｉｄｉｓ Ｔ．Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＴＨ—ｒｅ— ［６］ Ｌｅｇａｋｉｓ Ｉ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏ— ｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｗｉｔｈ ｇｌｕｃｏｓｅ ｉｎ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ［Ｊ］．Ｅｘｐ Ｄｉａ— ｔｅｉｎ（ＰＴＨｒＰ）ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ ｂｅｔｅｓ Ｒｅｓ，２００９，１０（１１）：８５５． ［Ｊ］．Ｍｉｎｉ Ｒｅｖ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２００９，９（６）：７１７． ［３］ Ｃｈａｎｇ—Ｃｈｅｎ ＫＪ，Ｍｕｌｌｕｒ Ｒ，Ｂｅｒｎａｌ—Ｍｉｚｒａｃｈｉ Ｅ．Ｂｅｔａ—ｅｅｌ１ ［７］ 黄荣曦，卢松，王成剑．门冬胰岛素３Ｏ联合阿卡波糖对初 ｆａｉｌｕｒｅ ａｓ ａ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｅｓ［Ｊｊ．Ｒｅｖ Ｅｎｄｏｃｒ 诊２型糖尿病胰岛功能的影响［Ｊ］．重庆医学，２００９，３８ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓｏｒｄ，２００８，９（４）：３２９． （１８）：２２７３． ［４］ Ｉｓｈｉｄａ Ｈ，Ｓｕｚｕｋｉ Ｋ，Ｓｏｍｅｙａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｅｏｍｐｅｎｓａ— ｔｏｒｙ ｒｏｌｅ ｏｆ ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ— ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｏｎ ｍａｉｎ—＿ （收稿日期：２０１０ ０２—２０修回日期：２０１０—０３—２２）
