一种坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 1013636 A(43)申请公布日 2018.11.30

(21)申请号 201810928086.2(22)申请日 2018.08.15

(71)申请人 山东泰诺药业有限公司

地址 262200 山东省潍坊市诸城市相州镇

郭家屯村(72)发明人 戴宝　徐景超　李纪顺　窦立志　

邱德文　徐文浩　刘永红　(74)专利代理机构 潍坊正信致远知识产权代理

有限公司 37255

代理人 刘新子(51)Int.Cl.

C12N 1/20(2006.01)C12R 1/07(2006.01)

权利要求书1页 说明书4页

()发明名称

一种坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法

(57)摘要

本发明公开了一种坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤：一、实验室操作：（1）环境灭菌、（2）培养基制作、（3）灭菌、（4）接摇瓶、（5）培养；二、车间操作：（1）空消、（2）上料、（3）实消、（4）冷却接种、（5）发酵培养、（6）检测、（7）喷雾干燥。本发明具有以下有益效果：通过该步骤制备的菌粉降低了作物的病死率，降低了病发率，并提高了作物的产量。

CN 1013636 ACN 1013636 A

权　利　要　求　书

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1.一种坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：一、实验室操作（1）环境灭菌：将无菌室以及无菌操作台紫外杀菌灯打开灭菌2小时；（2）培养基制作：制作液体培养基，用于摇瓶培养基的制作；（3）灭菌：将培养基等放入灭菌锅内灭菌，冷却后取出；（4）接摇瓶：在无菌环境下将斜面上的菌种用接种环接到摇瓶内；（5）培养：将摇瓶放入摇床内，在29±0.5℃情况下培养16-18h；二、车间操作（1）空消：将刷洗干净的发酵罐用高温蒸汽进行消毒45分钟；（2）上料：将准确称量的培养基倒入发酵罐内，加入适量的水；（3）实消：再用高温蒸汽进行灭菌；（4）冷却接种：当发酵罐温度冷却到28±0.5℃时，用火焰保将摇瓶内的菌种接入到发酵罐内；（5）发酵培养：在转速90-110r/min，6-7PH的条件下，进行培养24-36小时；（6）检测：从第18小时开始用显微镜检测细菌形态、细菌个数、芽孢形成率；（7）喷雾干燥：加入适量吸附载体，搅拌，喷雾干燥出菌粉。2.根据权利要求1所述的一种坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法，其特征在于，所述培养基由以下重量份的原料制成：玉米粉15-25份、葡萄糖2-6份、豆饼粉18-24份、鱼粉2-6份、轻质碳酸钙7-11份、硫酸铵1-2份、磷酸氢二钾0.4-0.6份、七水硫酸镁0.05-0.15份、氯化钠0.05-0.15份。

3.根据权利要求2所述的一种坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法，其特征在于，所述培养基由以下重量份的原料制成：玉米粉20份、葡萄糖4份、豆饼粉21份、鱼粉4份、轻质碳酸钙9份、硫酸铵1.5份、磷酸氢二钾0.5份、七水硫酸镁0.1份、氯化钠0.1份。

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说　明　书

一种坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法

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技术领域

[0001]本发明涉及一种菌粉的制备方法，具体说是一种坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法。背景技术

[0002]重茬也叫连作，是指在一块田地上连续栽种同一种作物。不少作物如豆科植物、瓜类、蔬菜、草莓及某些中草药等，都因重茬造成植物根部病菌，导致植物枯萎病，叶枯病，病毒病等危害，严重影响作物生长。[0003]目前，采用益生菌原液中的多种有益微生物来消灭这些病菌，并补充因重茬被作物带走的微量元素，以防治因连作造成的病害。其中的微生物是筛选自土壤中，对大多数病原菌都具有拮抗作用，而它们自身具有互惠共生关系，因此，不仅其定殖能力强，而且微生物间又可以相互促进，并分泌对植物具有多种促生长作用的因子，所以，在克服作物重茬的同时，对作物健康生长和丰收有着显著的影响。但是，该种现有的对抗重茬的效果还有待进一步的提高，降低病变率。[0004]为此，申请人提供了一种新的技术方案，并提供了一种坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法。

发明内容

[0005]本发明所要解决的技术问题是提供坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法。[0006]为解决上述技术问题，本发明的技术方案，包括以下步骤：

一、实验室操作（1）环境灭菌：将无菌室以及无菌操作台紫外杀菌灯打开灭菌2小时；（2）培养基制作：制作液体培养基，用于摇瓶培养基的制作；（3）灭菌：将培养基等放入灭菌锅内灭菌，冷却后取出；（4）接摇瓶：在无菌环境下将斜面上的菌种用接种环接到摇瓶内；（5）培养：将摇瓶放入摇床内，在29±0.5℃情况下培养16-18h；二、车间操作（1）空消：将刷洗干净的发酵罐用高温蒸汽进行消毒45分钟；（2）上料：将准确称量的培养基倒入发酵罐内，加入适量的水；（3）实消：再用高温蒸汽进行灭菌；（4）冷却接种：当发酵罐温度冷却到28±0.5℃时，用火焰保将摇瓶内的菌种接入到发酵罐内；

（5）发酵培养：在转速90-110r/min，6-7PH的条件下，进行培养24-36小时；（6）检测：从第18小时开始用显微镜检测细菌形态、细菌个数、芽孢形成率；（7）喷雾干燥：加入适量吸附载体，搅拌，喷雾干燥出菌粉。[0007]进一步的，所述的一种坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法，所述培养基由以下重量份的原料制成：玉米粉15-25份、葡萄糖2-6份、豆饼粉18-24份、鱼粉2-6份、轻质碳酸钙7-11

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份、硫酸铵1-2份、磷酸氢二钾0.4-0.6份、七水硫酸镁0.05-0.15份、氯化钠0.05-0.15份。[0008]进一步的，所述的一种坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法，所述培养基由以下重量份的原料制成：玉米粉20份、葡萄糖4份、豆饼粉21份、鱼粉4份、轻质碳酸钙9份、硫酸铵1.5份、磷酸氢二钾0.5份、七水硫酸镁0.1份、氯化钠0.1份。[0009]由于采用了上述技术方案，本发明具有以下有益效果：通过该步骤制备的菌粉降低了作物的病死率，降低了病发率，并提高了作物的产量。具体实施方式

[0010]下面结合具体实施例对本发明做进一步地说明。[0011]实施例1

一种坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤：一、实验室操作（1）环境灭菌：将无菌室以及无菌操作台紫外杀菌灯打开灭菌2小时；（2）培养基制作：制作液体培养基，用于摇瓶培养基的制作；（3）灭菌：将培养基等放入灭菌锅内灭菌，冷却后取出；（4）接摇瓶：在无菌环境下将斜面上的菌种用接种环接到摇瓶内；（5）培养：将摇瓶放入摇床内，在29±0.5℃情况下培养16-18h；二、车间操作（1）空消：将刷洗干净的发酵罐用高温蒸汽进行消毒45分钟；（2）上料：将准确称量的培养基倒入发酵罐内，加入适量的水；（3）实消：再用高温蒸汽进行灭菌；（4）冷却接种：当发酵罐温度冷却到28±0.5℃时，用火焰保将摇瓶内的菌种接入到发酵罐内；

（5）发酵培养：在转速90-110r/min，6-7PH的条件下，进行培养24-36小时；（6）检测：从第18小时开始用显微镜检测细菌形态、细菌个数、芽孢形成率；（7）喷雾干燥：加入适量吸附载体，搅拌，喷雾干燥出菌粉。[0012]其中，培养基由以下重量份的原料制成：玉米粉15份、葡萄糖2份、豆饼粉18份、鱼粉2份、轻质碳酸钙7份、硫酸铵1份、磷酸氢二钾0.4份、七水硫酸镁0.05份、氯化钠0.05份。[0013]实施例2

一种坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤：一、实验室操作（1）环境灭菌：将无菌室以及无菌操作台紫外杀菌灯打开灭菌2小时；（2）培养基制作：制作液体培养基，用于摇瓶培养基的制作；（3）灭菌：将培养基等放入灭菌锅内灭菌，冷却后取出；（4）接摇瓶：在无菌环境下将斜面上的菌种用接种环接到摇瓶内；（5）培养：将摇瓶放入摇床内，在29±0.5℃情况下培养16-18h；二、车间操作（1）空消：将刷洗干净的发酵罐用高温蒸汽进行消毒45分钟；（2）上料：将准确称量的培养基倒入发酵罐内，加入适量的水；

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（3）实消：再用高温蒸汽进行灭菌；（4）冷却接种：当发酵罐温度冷却到28±0.5℃时，用火焰保将摇瓶内的菌种接入到发酵罐内；

（5）发酵培养：在转速90-110r/min，6-7PH的条件下，进行培养24-36小时；（6）检测：从第18小时开始用显微镜检测细菌形态、细菌个数、芽孢形成率；（7）喷雾干燥：加入适量吸附载体，搅拌，喷雾干燥出菌粉。[0014]其中，所述培养基由以下重量份的原料制成：玉米粉20份、葡萄糖4份、豆饼粉21份、鱼粉4份、轻质碳酸钙9份、硫酸铵1.5份、磷酸氢二钾0.5份、七水硫酸镁0.1份、氯化钠0.1份。

[0015]实施例3

一种坚强芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括以下步骤：一、实验室操作（1）环境灭菌：将无菌室以及无菌操作台紫外杀菌灯打开灭菌2小时；（2）培养基制作：制作液体培养基，用于摇瓶培养基的制作；（3）灭菌：将培养基等放入灭菌锅内灭菌，冷却后取出；（4）接摇瓶：在无菌环境下将斜面上的菌种用接种环接到摇瓶内；（5）培养：将摇瓶放入摇床内，在29±0.5℃情况下培养16-18h；二、车间操作（1）空消：将刷洗干净的发酵罐用高温蒸汽进行消毒45分钟；（2）上料：将准确称量的培养基倒入发酵罐内，加入适量的水；（3）实消：再用高温蒸汽进行灭菌；（4）冷却接种：当发酵罐温度冷却到28±0.5℃时，用火焰保将摇瓶内的菌种接入到发酵罐内；

（5）发酵培养：在转速90-110r/min，6-7PH的条件下，进行培养24-36小时；（6）检测：从第18小时开始用显微镜检测细菌形态、细菌个数、芽孢形成率；（7）喷雾干燥：加入适量吸附载体，搅拌，喷雾干燥出菌粉。[0016]其中，所述培养基由以下重量份的原料制成：玉米粉25份、葡萄糖6份、豆饼粉24份、鱼粉6份、轻质碳酸钙11份、硫酸铵2份、磷酸氢二钾0.6份、七水硫酸镁0.15份、氯化钠0.15份。

[0017]坚强芽孢杆菌对抗重茬作用实验

实验目的：

验证坚强芽孢杆菌对因大棚中多年连续栽种草莓而造成的死棵、白粉病发病率、生长缓慢的防治效果。[0018]实验地点：

山东省寿光市吕留镇实验步骤：1、选取因重茬死棵烂苗严重，草莓生长缓慢的大棚作为实验与对照棚；2、大棚一分为三，东边为实验组，西边为对照组，中间隔离带。在栽种草莓苗前，在实验组随水将含量为50亿/克坚强芽孢杆菌1公斤冲施，对照组冲等量的水；

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3、一周后实验组、对照组各栽种100棵草莓苗；4、实验组栽种草莓苗之后每隔15天叶面喷施坚强芽孢杆菌，对照组喷施等量清水；5、三个月后观察死棵数量，白粉病发病棵数。测量栽种三个月后草莓苗生长高度。[0019]实验数据： 死棵数量白粉病发病棵数生长高度实验组21210cm对照组32466cm

数据分析：实验组：死棵率为2%，白粉病发病率为12%，三个月生长高度为10cm。[0020]对照组：死棵率为32%，白粉病发病率为46%，三个月生长高度为6cm。[0021]实验结论：

通过实验数据可以看出，实验组与对照组对比明显，坚强芽孢杆菌对因重茬造成的草莓苗死棵、白粉病发病率、生长缓慢具有良好的防治效果。[0022]本发明中用到的设备均为本领域的常用设备，在此不再赘述。[0023]以上所述仅为本发明示意性的具体实施方式，并非用以限定本发明的范围。任何本领域的技术人员，在不脱离本发明的构思和原则的前提下所作出的等同变化与修改，均应属于本发明保护的范围。

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