黄秋葵种子中生物碱类化合物抗疲劳活性研究

黄秋葵种子中生物碱类化合物抗疲劳活性研究　徐明　，郑鸿雁　，王巍　，陈玉娟２　７邙巍。　（１．吉林农业大学食品科学与工程学院，吉林长春１３０１１８；２．长春理工大学生命科学技术学院，吉林长春１３００２２；３．德惠市达家沟镇人　民政府，吉林长春１３０３００）　摘要：目的：研究黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠的抗疲劳作用。方法：将健康雄性小鼠随机分成４组，黄秋葵种子生物碱提取物高　剂量组［８毫升／（公斤・天）］、中剂量组［４毫升／（公斤・天）］、低剂量组［２毫升／（公斤・天）］和蒸馏水空白对照组，各实验组连续灌胃给　药３０天后，测定小鼠负重游泳时间、血清尿素氮、血乳酸、肝糖原含量等指标。结果：黄秋葵种子中生物碱提取物能增强小鼠负重游泳时　间，耐力增强，能够降低血液中血清尿素氮含量、血乳酸含量，黄秋葵种子中生物碱提取物能显著提高肝糖原含量。结论：黄秋葵种子生物　碱提取物对小鼠有一定的抗疲劳作用，且高剂量组效果最显著。　关键词：黄秋葵；种子；生物碱；抗疲劳　基金项目：吉林省科技发展重点项目（２０１２０９４９）　中图分类号：Ｒ２８４１１１　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７４—０４３２（２０１４）一０５—３０—３　黄秋葵（Ａｂｅｌｍｏｓｃｈｕｓ　ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｓ（Ｌ．）Ｍｏｅｎｃｈ），又名秋葵、　小鼠负重游泳时间，血液中血清尿素氮、血乳酸含量、肝糖原　含量。　１．４方法　补肾草等，原产于印度，为锦葵科Ｍ￣ｖａｃｅａｅ秋葵属Ａｂｅ１一　ｍｏｓｃｈｕｓ一年生草本植物，英文名Ｏｋｒａ，广泛栽培于热带、亚热　带。２０世纪９０年代引入我国ｌ１＿３】。黄秋葵果实可供食用，具有　显著的保健作用，欧美等国都把黄秋葵列入２１世纪最佳绿色　食品名录。此外，黄秋葵还被许多国家定为运动员的首选蔬菜　　ｌ６＿　保健效果好，绿色、安全。　目前，国内外都在加强对黄秋葵的研究，涉及保健、医药、　，１．４．１小鼠体质量的测定首次灌胃前记录各实验组小鼠体质　量，并观察小鼠精神状态、皮毛色泽变化、末次给药后游泳前　再次记录各组小鼠体质量，对比实验前后体质量变化情况。　１．４．２负重游泳实验各实验组连续灌胃３Ｏ天，末次给药３Ｏ分　钟后，给小鼠负重铅皮（体重５％），放入水温３０￣１２、水深为３Ｏ　厘米的游泳箱中游泳，当小鼠头部沉入水中１Ｏ秒仍不能返回　食品等领域，黄秋葵种子的研究则鲜见报道，仅有少数是关于　其化学成分及药理作用的研究Ｉｎ，１２１。黄秋葵的种子中脂肪和　蛋白质含量较高，还含有较多铁、钾、钙、锰等矿物质元素　　ｌ９＿ｍ】具有很强的药用价值。所以本次试验重点研究黄秋葵种　，水面视为力竭，记录小鼠从放人泳池到力竭的时间＿１７】。　１．４．３血清尿素氮、血乳酸、肝糖原含量的测定各实验组小鼠　负重游泳力竭后取出，１５分钟后摘眼球取血，试剂盒法测定　血清中尿素氮、乳酸和肝糖原的含量【ｌ８】。　１．５统计学处理　子中生物碱类提取物的抗疲劳作用，根据文献［１３－１５】，本次试验　重点关注黄秋葵种子中的生物碱类物质，对其进行研究，以期　找到黄秋葵种子中抗疲劳作用的物质基础。　１材料与方法　１．１材料、试剂与仪器　采用ＳＰＳＳ　１９．０软件对实验数据进行统计分析，实验数据　记为均值±标准差（　±ｓｄ），实验结果采用单因素方差分析及　ｓｔｕｄｅｎｔ’Ｓ　ｔ－ｔｅｓｔ，差异显著性以Ｐ＜０．０５表示［１９】。　２结果与分析　２．１黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠体质量的影响　黄秋葵种子由长春市昌达天然植物开发有限公司提供，　以下用水除特殊说明外均为ＧＢ／Ｔ　６６８２－２００８中规定的三级　水；昆明种雄性小鼠，购自吉林大学动物实验中心。等级：清　洁级，２０±５克，实验动物生产许可证号ＳＣＸＫ（吉）　首次灌胃前记录各实验组小鼠体质量，并观察小鼠精神　状态、皮毛色泽变化，末次给药后游泳前再次记录各组小鼠体　质量，对比实验前后体质量增加情况，结果见表１。　表１黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠体质量的影响（　±Ｓ，ｎ＝ｌＯ）　ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｇｒｏｕｐｓ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ｇｒｏｕｐｓ　ｇｒｏｕｐｓ　２００７—０００３；游泳箱（４０×５０×５０厘米）自制，水槽中控制水深　３Ｏ厘米，水温控制在（３０±２）℃。　１．２黄秋葵种子中生物碱提取物的制备　黄秋葵种子中生物碱提取物由长春理工大学新药研发中　心提取，使用前用蒸馏水１：５混匀。　１．３实验动物分组　Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ—　Ｌｏｗ—ｄｏｓｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　将小鼠随机分为４组，每组１０只，分别为黄秋葵种子生　物碱提取物高、中、低剂量组和空白对照组。各组给予受试　物剂量分别为（以体质量计）：高剂量组黄秋葵种子生物碱　体质量上升／ｇ　１２．２５±３．０９　１１．１７±３．１２　ｌ３．３２±３．１９　１０．９８±３．８０　注：★与空白对照组相比，存在显著差异（Ｐ＜０．０５），★★极　显著性差异（Ｐ＜０．０１）。　提取物８毫升／公斤；中剂量组黄秋葵种子生物碱提取物４　从表１可以看出，与空白对照组相比，黄秋葵种子生物碱　毫升／公斤；低剂量组黄秋葵种子生物碱提取物２毫升／　提取物高剂量组、中剂量组和低剂量组小鼠的体质量变化情　公斤；空白对照组给予蒸馏水８毫升／公斤。各实验组连续　况并不明显，说明给药组并未对小鼠体重产生影响，在统计学　灌胃给药３０天，观察记录小鼠的皮毛颜色及情绪，之后测定　上没有显著性差异（Ｐ＞０．０５）。　２．２黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠负重力竭游泳时间的影　响　黄秋葵种子生物碱提取物可显著抑制小鼠运动引起的血乳酸　升高，有助于缓解运动负荷引起的疲劳，从而延长小鼠力竭游　各组小鼠负重（铅皮）游泳致力竭，记录并统计从开始致　泳时间。　其力竭的游泳时间，结果见表２。　表２黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠负重力竭游泳时间　血清尿素氮是评价机体耐受力的重要指标，各国对此共　识相同　。结果显示黄秋葵种子生物碱提取物各剂量组的　的影响（±ｓ，ｎ＝ｌＯ）　　ｌＧｒｏｕｐｓ　ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ　Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ－　Ｌｏｗ—ｄｏｓｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐｓ　Ｏｏｓｅ　ｇｒｏｕＰｓ　ｇｒｏｕｐｓ　ｇｒｏｕｐｓ　ｌ游泳时间／ｓ　１３３．１２±４．７５扣　１１８．２３±３．８８扣ｋ　９０．４５±２．７６轴Ｉ　８１．２１±２．４５　注：★与空白对照组相比，存在显著差异（Ｐ＜０．０５），★★极　显著性差异（Ｐ＜０．０１）。　从表２可以看出，黄秋葵种子生物碱提取物各剂量组的　小鼠负重力竭游泳时间均明显长于空白对照组，在统计学上　具有显著性的差异（Ｐ＜０．０１）。　２．３黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠运动后血清尿素氮、血　乳酸和肝糖原的影响　各实验组小鼠游泳力竭后取出，１５分钟后摘眼球取血测　定血清尿素氮、血乳酸和肝糖原含量变化，并统计各组小鼠运　动后血清中尿素氮、乳酸和肝糖原的含量，结果见表３。　表３黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠运动后血乳酸、血　清尿素氮、和肝糖原的影响（±Ｓ，ｎ＝ｌＯ）　组别　血乳酸含量　血清尿素氮含量／　肝糖原含量／　／（ｒｍｏｌ／Ｌ）　（ｍｇ／Ｌ）　（ｍｇ／ｇ）　高剂量组　１７．４５±２．０７扣　４５．８９±５．４１　１５．２６±１．７７扣　中剂量组　１９．３７±２．９７牺　６０．５８±６．２１扣　ｌ１．２９±１．３５＊　低剂量组　２２．３５±２．６６　７２．４４±５．０６　１０．０Ｏ±１．３２＊　空白对照组　２５．６８±２．１５　８０．１９±８．０６　７．９６±１．７３　注：★与空白对照组相比，存在显著差异（Ｐ＜０．０５）；★★有　极显著性差异（Ｐ＜０．０１）。　从表３可以看出，游泳运动后，黄秋葵种子生物碱提取物　高、中剂量组与空白组相比血清尿素氮和血乳酸的含量均明　显降低，具有统计学意义，有显著的差异（Ｐ＜０．０１）；并且具有　显著差异（Ｐ＜Ｏ．０５）。各项检测指标中，各给药组呈现出明显　的量效关系。　３讨论　３．１黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠体质量的影响　灌喂黄秋葵种子生物碱提取物后对小鼠体质量变化无显　著影响，属于正常体重变化。对实验不产生复杂影响。　３．２黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠负重力蝎游泳时间的影　响　运动耐力的下降最直观的表现为疲劳。而力竭游泳时间　是测试运动耐力的最明显的指标　】。生物碱类化合物多具有　抗疲劳作用，研究结果也显示，黄秋葵种子生物碱提取物的小　鼠明显增长负重力竭游泳时间，具有极显著性差异（Ｐ＜　０．ｏ１），说明黄秋葵种子生物碱提取物确实能提高小鼠的抗疲　劳能力。　３．３黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠血清尿素氮、血乳酸、肝　糖原的影响　黄秋葵种子生物碱提取物各剂量组小鼠经过运动后，其　血液中乳酸含量比空白对照组降低很多，具有统计学意义，且　有极显著性的差异（Ｐ＜０．０１）。各实验组呈现量效关系，说明　小鼠运动后血清尿素氮含量显著降低，其中高剂量组血清中　尿素氮含量最低，数据具有统计学意义，且具有极显著性差异　（Ｐ＜０＿（）１），说明黄秋葵种子生物碱提取物确能提高小鼠对运　动负荷的承受能力，从而提高其抗疲劳能力。　运动导致的体力衰竭总是伴随肌糖原的降解代谢，机体　为了维持正常的血糖水平，必将将代谢肝糖原，以补充消耗，　因此肝糖原是反映疲劳程度的一项重要指标　１。本研究结果　显示，黄秋葵种子生物碱提取物各剂量组小鼠肝糖原含量均　明显高于空白对照组，具有统计学意义，且有显著性差异　（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。　４结论　通过本次实验测定血乳酸、血清尿素氮、肝／肌糖原生化　指标为阳性，可判定黄秋葵种子生物碱提取物具有一定的抗　疲劳作用，存在深入开发价值。　参考文献　［１】于英杰．黄秋葵的栽培技术Ｕ】．农村新技术，２００４，（３）：　１０—１１．　【２】龚衍兰，戴雪花．黄秋葵高质优产栽培技术Ｕ】．特种经　济动植物，２００４，７（５）：４０．　【３】李庆林，王成永，彭代银，等．黄蜀葵花总黄酮对心肌缺　血再灌注损伤的保护作用研究Ｕ】．中国实验方剂学杂志，　２００６，１２（２）：３９—４２．　【４】谭业华，陈珍，顾种宜．中草药黄蜀葵的研究现状与展　望Ｕ】．海南师范学院学报（自然科学版），２００６，１９（２）：１６３－１６７．　【５】范丽，袁丽萍，陈志武，等．黄蜀葵花总黄酮药理性预适　应对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用Ｕ】＿中国药学杂志，　２００５，４０（１１）：８３６—８３９．　【６董彩文，６】梁少华．黄秋葵的功能特性及综合开发利用　［Ｊ］．食品研究与开发，２００７，２８（５）：１８０—１８２．　［７】高雷，张平，程刚．黄蜀葵花的研究进展Ｕ】．安徽医药，　２００８，１２（３）：１９８—２００．　［８】Ａｎｗａｒ　Ｆ，Ｒａｓｈｉｄ　Ｕ，Ａｓｈｒａｆ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｏｋｒａ（Ｈｉｂｉｓｃｕｓ　ｅｓ—　ｃｕｌｅｎｔｕｓ）ｓｅｅｄ　ｏｉｌ　ｆｏｒ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｌＪ］．Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｅｎｅｒｇｙ，　２０１０，８７：７７９—７８５．　［９】黄阿根，陈学好，高云中，等．黄秋葵的成分测定与分析　［Ｊ］．食品科学，２００７，２８（１０）：４５１—４５５．　［１０】Ａｄｅｌａｋｕｎ　Ｏ　Ｅ，Ｑｙｅｌａｄｅ　Ｏ　Ｊ，Ａｄｅ—ｏｍｏｗａｙｅ　Ｂ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｎｉｇｅｒｉａｎ　Ｏｋｒａ　ｓｅｅｄ（Ａｂｅｌｍｏｓｃｈｕｓ　ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｓ　Ｍｏｅｎｃｈ）ｆｌｏｕｒ．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ　Ｔｏｘｉｃｏｌ，２００９，４７（６）：１１２３—１１２６．　【１１】李建华，陈珊．黄秋葵水提液抗疲劳的药效学观察［Ｉ］．　中国运动医学杂志，２００４，２３（２）：１９６—１９７．　【１２】茅国夫．黄秋葵的特征特性及栽培技术［Ｉ］．浙江农业　科学，２００４，（６）：３５３．　【１３】孙宏，张宏波，谷振华．茶叶中提取咖啡碱实验方法比　较［Ｊ］．高师理科学刊，２００７，２７（１）：４０—４１．　【１４】刘军红，廖国玲．生物碱提取、分离和纯化的研究进展　［Ｊ］．时珍国医国药，２００７，１８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