胆碱酯酶的测定

一、原理：血清及组织中CHE使乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸，未被水解的剩余乙酰胆碱与羟胺作用生成乙酰羟胺，再与铁离子在酸性溶液中形成棕色复合物，根据颜色深浅推算出酶的活力。 二、试剂：

1、试剂一：溶液60ml×1瓶，室温保存。

2、试剂二：乙酰胆碱粉剂×1支，-20℃保存，稀释液5ml×1瓶，4℃保存。

80μmol/ml 乙酰胆碱底物贮备液的配制：将一支乙酰胆碱碱粉剂倒入5ml稀释液中即成，4℃。

8μmol/ml 乙酰胆碱应用液的配制：贮备液：试剂=1：9稀释。

3、试剂三：甲粉剂×1支；乙液30ml×1瓶；丙液30ml×1瓶；室温保存。

试剂三应用液的配制：每次测试前将甲粉倒入乙液中，充分摇匀，根据需要量将甲乙混合液

与丙液等量混合，充分混匀，配成试剂三应用液，现用现配。

4、试剂四：溶液30ml×1瓶，室温保存。 5、试剂五：溶液20ml×1瓶，室温保存。

6、试剂六：粉剂×1瓶，稀释液30ml×1瓶，测试前将稀释液倒入粉剂中，充分混匀，避光

4℃冷藏。

三、操作步骤： 测定管 对照管 空白管 血清 0.05 蒸馏水 0.05 0.03 8μmol/ml 乙酰胆碱应用液 0.25 0.25 试剂一 0.5 0.5 0.5 混匀，37℃水浴20分钟 试剂三应用液 1.0 1.0 1.0 试剂四 0.5 0.5 0.5 试剂五 0.25 0.25 0.25 试剂六 0.5 0.5 0.5 混匀，3000~3500转/分，离心10分钟，取上清液，于520nm，1cm光径，空白管调零， 测各管吸光度值。 四、计算：

1、定义：血清中CHE的计算：每毫升血清在37℃和底物作用20分钟，分解1μmol乙酰胆

碱为1个活力单位。

2、计算公式： 血清中CHE活力