大黄麻黄方对大鼠血压及血浆肾素—血管紧张素—醛固酮系统的影响

1683

实验研究

doi：10.3969/j. issn. 1002 -2619.2016.11.020

大黄麻黄方对大鼠血压及

血浆肾素一血管紧张素一醛固酮系统的影响％

于立杰肖荷妹李凤丹1

雷新锋李炳茂2

韩卫红

(哈励逊国际和平医院综合内科，河北衡水053000)

【摘要】目的观察大黄麻黄方对大鼠收缩压、肾素活性（PHA)、血管紧张素n ( Angn )和血管紧张

只健康雄性SD大鼠随机分为2组，即正常对照组及

大黄麻黄方组,每组各32只。正常对照组予蒸馏水10 mL,大黄麻黄方组予大黄麻黄方药液10 mL,均每日2 次灌服，连续4周。2组大鼠最后一次灌胃后分别于02:00、08:00、1令00、20:00四个时间点每组分别取8只 大鼠，检测各个大鼠收缩压，然后处死大鼠,取心血，采用放射免疫分析法测定血浆PHA、Ang II和ACE,然后 应用最小二乘法进行余弦拟合法（cosine fitting),分析并比较2组血压及血浆PRA、Ang II和ACE的时间生物 学特征。结果大黄麻黄方组大鼠服药4周后02:00、08:00、14:00、20:00四个时间点收缩压及血浆PRA、 AngIKACE水平均低于正常对照组同期，比较差异均有统计学意义（P <0.05)。与正常对照组相比，大黄麻

素转换酶（ACE)的时间生物学特征的影响。方法将

黄方组大鼠收缩压及血浆人邶11、入。£曲线的中值（]\\1)均减小，有统计学意义（/3<0.05)，人1^11、收缩压入变 化明显,有统计学意义（P < 0.05),同时PRA、Ang 的峰值时间（T)明显变化，有统计学意义（P < 0.05)。大 黄麻黄方组大鼠收缩压、PRA、AngII和ACE曲线的O均发生不同程度的位移（P<0.05)。结论大黄麻黄 方可降低血压，同时对维持血压昼夜节律、改善RASS系统功能有明显影响。

【关键词】血压;昼夜节律；大黄;麻黄；肾素一血管紧张素系统;动物实验【中图分类号】

II

_;R285.5【文献标识码】A【文章编号】1002 - 2619(2016)11-1683-05

Lijie，XIAO Hemei，LI Fengdan，et al. Department of General MedicineHalison International Peace HospitalHebeiHengshui 053000

【Abstract】 Objective To observe the effects of Dahuang - mahuang formula on the chronobiology character­istic of systolic pressure (SBP) , plasma renin activity (PRA) , angiotensin II (Angll ) , angiotensin converting en­zyme (ACE) in rats. Methods healthy male SD rats were randomly divided into two groups that normal control group and Dahuang - mahuang formula group, 32 rats in each group. The normal control group received distilled wa­ter (10 mL) , the Dahuang - mahuang formula group received Dahuang - mahuang decoction (10 mL) , gavage twice daily for four weeks. We measured all the rats^blood pressure at different times in one day (02 ：00, 08 ：00, 14：00, 20 ： 00) after the last gavage, 8 rats in each timing, and the the rats were executed, adopt blood form heart. The plasma PRA, Angll and ACE were measured by radioimmunoassay, and then analyzed the blood pressure its chrono­biology characteristic of PR A, Angll and ACE in two groups by means of osine fitting in two groups. Results The SBP, PRA, Angll and ACE after treatment in Dahuang - mahuang formula group were lower than those in control group at four timing (02：00, 08：00, 14：00, 20：00) , with statistical differences (P<0. 05). As compared with normal control group, the M - value of SBP, Ang II and ACE in Dahuang - mahuang formula group were decreased,--------------------------- with statistical differences (P <0. 05) , the amplitude ( A)※项目来源:河北省中医药管理局2014年度中医药类科研 of Ang II and SBP changed obviously ( P < 0. 05 ) , and the 计划课题（编号:2014320)peak time (T) of PRA and Ang II changed obviously, with 1哈励逊国际和平医院麻醉科，河北衡水053000 statistical differences (P<0. 05). The peak phase (O) of 2哈励逊国际和平医院中医科，河北衡水053000 SBP, PRA, Ang II and ACE in Dahuang - mahuang formula 作者简介:于立杰（1976—），女，副主任医师，硕士。从事综 group had phase shift in varying degree (P <0. 05 ). Con­合内科临床诊疗工作。研究方向:心血管疾病。clusion Dahuang - mahuang formula can decrease blood

,

,

,

Effects of Dahuang — mahuang formula on blood pressure and plasma renin — angiotensin system in rats FI/

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】

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pressure, and has significant effects of maintain circadian rhythm of blood pressure and improve RASS function.【Key words Blood pressure; Circadian rhythm; Dahuang Mahuang formula Renin - angiotensin systemAnimal experiment

；

；

；

正常情况下，人体血压表现为一定的昼夜节 律，呈双峰一谷的长柄杓型[1]，即夜间血压较日 间下降10% ~20%，称之为杓型血压。这种有规 律的昼夜节律对保护心、脑、肾等器官功能有重要 作用。血压昼夜节律是于血压水平之外的心 脑血管病预测因素，血压昼夜节律消失，预示着更 1.2实验方法

1.2.1实验分组及给药方法只大鼠适应性 饲养4周后，随机分为2组，即正常对照组、大黄 麻黄方组，每组各32只。正常对照组予蒸馏水 10 mL，每日2次灌服。大黄麻黄方组予大黄麻黄 每日2次灌服。2组均连续4周。 方药液10 mL，易发生心脑血管事件，并有更严重的靶器官损害 倾向m。血压昼夜节律主要由神经内分泌系统

调节，其中肾素一血管紧张素一醛固酮（RAAS) 系统对血管张力、水钠代谢、血压等具有重要作 用[3]。报道显示，昼夜血压非杓型原发性高血压 患者血浆RAAS水平明显高于杓型组，RAAS与 血压变异及昼夜节律有关[4]。近年来，中医药用 于降低血压、恢复异常血压昼夜节律，以其毒副作 用小、多靶点发挥疗效等优点逐渐受到重 视[…6]。研究证实，分别由大黄、麻黄、仙鹤草、 甘草组成的方剂具有调节血压、改善靶器官损害 等作用[7_9]，但其作用机制还有待进一步研究。 本研究以雄性健康SD大鼠为研究对象，观察大 黄麻黄方干预对收缩压、肾素活性（PRA)、血管 紧张II (Angll)和血管紧张素转化酶(ACE)的变 化，为大黄麻黄方治疗高血压、改善RASS系统功 能及血压节律、减轻靶器官损害的影响提供实验 基础。1

材料与方法

1材料

1.1.1实验动物清洁级健康雄性10周龄SD 大鼠只（购自河北医科大学实验动物中心，动 物合格证号:1404079 )，体质量250 ~ 300 g。常规 饲养于河北省衡水市人民医院动物中心，自由进 食，室温（22±2)丈。1.1.2

药品及试剂大黄麻黄方组方:大黄6 g，

麻黄5 g，仙鹤草15 g，甘草15 g。将上述药品加 10倍量水浸泡1 h，煮沸后小火继续煎煮1 h，第2 次加8倍量水煎煮，煮沸后小火继续煎煮1 h，将 2次煎煮的药液合并，备用。PRA、Angn和ACE 测定试剂盒购自北京北方生物技术研究所有限 公司。

1.1.3主要仪器鼠尾血压仪采用RBP-1B型 光电法鼠尾测定仪，中日友好医院生产。

1.2.2检测指标及方法1.2.2.1

血压测定2组大鼠最后一次灌胃后，

采用RBP - 1B型光电法鼠尾测定仪分别于02: 00、08 :00、14:00、20:00四个时间分别测定大鼠 收缩压，2组每个时间点分别取8只进行测量。1.2.2 PRA、Ang II及ACE测定2组大鼠在 02:00、08 :00、14:00、20:00时间点测完血压后， 分别予10%水合氯醛0.5 mL/100 g腹腔注射，待 大鼠麻醉后迅速开胸，暴露心脏，10 mL注射器抽 取心室血。取血1 mL置入盛有0. 3 md/L依地 酸二钠 10 pL、0.32 md/L 二巯基丙醇 5 pL、0.34 mol/L 8 -羟基喹啉硫酸盐10卟的离心管，3 000 r/min低温离心10 min,留取血浆，-20 °C保存备 用。采用放射免疫分析法测定血浆PRA、Ang n 和ACE，按照试剂盒说明书进行操作。1.3

统计学方法实验数据应用SPSS 16. 0统 计软件处理分析，计量资料以均数±标准差（* ± O表示，不同组间各测定值用方差分析进行比

较，以P <0.05表示差异有统计学意义。应用最 小二乘法进行余弦拟合法（cosine fitting)分析并 比较2组实验动物间血压及血浆PRA、Ang II和 ACE的时间生物学特征。然后采用零振幅检验 (zero amplitude test)评价各检测指标的昼夜节律 是否确实存在，如P<〇.〇5,即拒绝曲线振幅为零 的检验假设，则说明该指标呈现昼夜节律，而非无 节律的随机分布。同时求得余弦分布曲线的各个 特征值，即中值（M)、振幅（A)及峰值相位（$)， 并计算出峰值时间（T)。2

结果

2.1 2组大鼠服药4周后收缩压及血浆PRA、AngII、ACE水平比较见表1。

由表1可见，大黄麻黄方组大鼠服药4周后 02:00、08 :00、14:00、20:00四个时间点收缩压及 血浆PRA、Ang II、ACE水平均低于正常对照组同

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期，比较差异均有统计学意义(P <〇.〇5)。

表1

2组大鼠服药4周后收缩压及血浆PRA、Ang II、ACE水平比较

组另

IJ

02:00〇 =8)

正常对照组

收缩压(mmHg)

175.71 ±7.32PRA[mg/(L • h)]1.00 ±0.07ACE [ mmol/(L - min)]1.58 ±0.76AngIH xl0_2,叫/L)10. ±2. 17大黄麻黄方组

收缩压(mmHg)167.1 ±14.0*PRA[mg/(L • h)]0.97 ±0.06 *ACE [ mmol/(L - min)]1.60 ±0.73 *Angll ( xlO _2,|j,g/L)

10. 62 ±2.45*

与正常对照组比较，* P < 〇. 05

2.2 2组大鼠收缩压及血浆PRA、Angn、ACE生物节律特征比较见表2。

表2

2组大鼠收缩压及血浆

PRA、Ang II、ACE生物节律特征比较

组另

IJ

M

A

$T

正常对照组

PRA收缩压

142.327. 82802：31ACE8105：251.50.49106：07Angll *1 3931.723315：34大黄麻黄方组

133.530. 13901：56PRA收缩压ACE024516：221.40.49706：31AngE *

1 180.3

583.1

149

09：58

注：*数据与表1相比为原始数值所得

对2组大鼠服药后收缩压血浆PRA、Ang II 和ACE进行余弦拟合法分析得出余弦拟合曲线 的特征值，对各曲线的特征值分析可见，与正常对

照组相比，大黄麻黄方组大鼠收缩压及血浆Ang n、ACE曲线的M值均减小，有统计学意义（P < 0.05 )，Ang n、收缩压A值变化明显，有统计学意 义（P < 0.05)，同时PR A、Ang II的T值明显变化， 有统计学意义(P<〇.〇5)。大黄麻黄方组大鼠收 缩压、PRA、Angn和ACE曲线的$均发生不同 程度的位移（P <0.05)。3

讨论

非杓型血压是左室肥厚、脑血管疾病、充血性 心力衰竭、心肌梗死、蛋白尿的危险因素[1°]。 研究表明，RAAS系统既参与高血压的发病机制， 也有助于逆转异常的血压节律[11]。RAAS系统 各组分的血浆水平及其活性均表现出近日节律现 象，这些物质的近日节律与其相应的mRNA表达 量密切相关，而且RAAS系统各组分的mRNA表 达也都存在近日节律[12]。RAAS系统是血压调 节的一条重要途径，对血压的时间生物学形态可

08:00〇=8)14:00〇=8)20:00〇 = 8)131.41 ±13.120.62±11.73121.31 ±10. 571. 18 ±0. 101.48 ±0. 151.02 ±0.331. ± 1.061.46 ±17.51. 19 ±0.4314.95 ±2.3214. 12 ±2. 1716.46 ±2. 32121.3 ±9.9 *113.1 ±12.9*120. 8 ±12. 5*1.00±0.1”1.02±0.19*0.74 ±0.52*1.90 ±0.56*1.25 ±0.39 *1.03 ±0.62*14. 70 ±2. 29*

17. 88 ±2. 29*

29.73 ±2.21 *

能有重要影响。在某些病理条件下，RAAS系统 昼夜节律紊乱，人体血压的近日节律也相应改变， 并与靶器官损害有着密切的关系。高血压患者常 常存在高肾素活性，而且高肾素型高血压患者存

在交感一肾上腺素系统和RAAS系统的激活。近

年来，以整体观念和辨证论治为核心思想的中医 越来越受到人们的重视，通过传统中医疗法控制 血压，能够减少药物不良反应，恢复异常的血压昼 夜节律，减少靶器官的损害。且中药的作用机制 是多途径、多环节、多靶点的，并能兼顾高血压的 其他病理环节[5_6]。

中医学认为，高血压属于眩晕、头痛等范畴， 其病理因素主要为风、火、痰、虚、瘀，病变脏腑以 肝、肾为主，涉及心、脾，病机主要与肝阳上亢、痰 浊中阻、瘀血阻滞等相关。《素问玄机原病式》 载:“风气甚而头目眩晕者，由风木旺，必是金衰 不能制木，而木复生火、风火皆属阳，多为兼化，阳 主乎动，两动相搏，则为之旋转。”指出肝阳上亢， 风火相搏为眩晕的病机。《灵枢•卫气》认为： “上虚则眩。”《景岳全书》指出：“眩晕一症，虚者 居其，而兼火、兼痰者不过一二。”《证治汇补 •眩晕》载：“以肝上连目系而应于风，故眩为肝 风，然亦有因火，因痰，因虚，因暑，因湿者。”指出

风、火、痰、虚、暑、湿6种邪气皆可导致眩晕。 《丹溪心法•头眩》载“头眩，痰挟气虚并火，治痰 为主，挟补气药及降火药。无痰则不作眩，痰因火 动”，气虚痰瘀，痰浊阻遏，升降失常，痰火气逆， 上犯清窍而成眩晕，力倡“无痰不作眩”。研究显 示，24 h平均血压与机体的正邪关系密切，更能 反映正邪盛衰;而昼夜节律和阴阳关系更密切，更 能反映机体阴阳虚实[13]。人体气血的盛衰、气机 的升降出入等一切节律性变化遵循着阴阳之道。 李洪波等[14]研究认为，高血压患者的血压昼夜节

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律与阴阳关系密切，可以以人体一日内的阳阴消 长来解释。《素问•至真要大论》曰：“平旦至日 中，天之阳，阳中之阳也；日中至黄昏，天之阳，阳 中之阴也;合夜至鸡鸣，天之阴，阴中之阴也;鸡鸣 至平旦，天之阴，阴中之阳也。故人亦应之。”《灵 枢•营卫生会》言:“夜半为阴隆，夜半后为阴衰， 平旦阴尽而阳受气矣。日中为阳隆，日西而阳衰， 日入为阳尽而阴受气矣，夜半而大会，万民皆卧， 命曰合阴。”《灵枢•顺气一日分为四时》载：“以 一日分为四时，朝则为春，日中为夏，日入为秋，夜 值时间为01:56,正常对照组峰值时间为02:31 ;2 组大鼠血浆PRA的中值、振幅相同，但两者的峰 值相位、峰值时间明显不同，大黄麻黄方组峰值时

间为16:22,对照组为05:25;大黄麻黄方组大鼠 血浆ACE浓度中值较正常对照组减小，振幅相 同，但峰值相位、峰值时间不同，大黄麻黄方组峰 值时间为06:31，对照组为06:07;大黄麻黄方组 大鼠血浆Ang n的中值较正常对照组明显减低， 振幅、峰值相位、峰值时间明显不同，大黄麻黄方 组峰值时间为09:58，正常对照组为15 :34。上述 半为冬。朝则人气生，病气衰，故旦慧；日中人气 长，长而胜邪，故安;夕则人气始衰，邪气始生，故 加;夜半人气入藏，邪气独居于身，故甚也。”以上 指出，白昼为阳，夜晚为阴，从白昼到夜晚的 过程就是阳消阴长的过程，而从夜晚到白昼的过 程则是阳长阴消的过程，人体之阴阳也随之产生 相应的变化，因此人的血压也遵循着这种规律。 血压的高低主要由阳气主宰，上午为“阳中之 阳”，血压在阳气的鼓动下逐渐达到峰值，而夜半 之前属“阴中之阴”，为一日之内阴气渐盛之时， 阳气收敛而入阴，阳气鼓动无力，故血压下降[15]。 而高血压患者人体阴阳失衡，阴虚不制阳，肝阳上 亢，导致夜间血压下降不够，从而出现血压昼夜节 律异常。因此，在治疗上要抓住阴虚为本、痰浊为 标的发病机制，以调整阴阳为主要治则。大黄麻 黄方中大黄味苦、性寒，入胃、大肠、肝、脾经，能泻 下攻积，导湿热从大便出，活血逐瘀，推陈出新，降 气利尿，用于火热亢盛、迫血上溢；甘草味甘、性 平，可补气健脾，清热解毒，调和药性，为缓急之 剂，与大黄配伍，相辅相成，泻中寓补，通中寓守， 共奏清热燥湿、益气活血之功。血压的升高往往 由气机升降失调引起，而麻黄外宣毛窍，下助利 尿，阳气得宣，腠理开而汗出，则气机条达协调平 衡，血液运行无阻，血压也就自然易于恢复。仙鹤 草为收涩之品，既可收元气之耗散，又能敛虚火之 浮越，兼补虚、熄风、祛痰、敛火诸功，故有止眩 之效。

本研究结果显示，经大黄麻黄方干预后的大

鼠，02:00、08:00、14:00、20:00四个时间点收缩 压及血浆PRA、Ang II、ACE水平均低于正常对照 组同期，比较差异均有统计学意义（P <〇.〇5)。 对2组相关指标生物节律特征分析显示，经大黄 麻黄方干预后的收缩压平均值明显下降，但峰值 时间不同，峰值相位有明显位移，大黄麻黄方组峰

结果表明，大黄麻黄方对收缩压、PRA、ACE、Ang n不同时间的生物学特征值有明显的影响，从而 说明大黄麻黄方对血压及血压的昼夜节律具有影 响。研究显示，大黄、仙鹤草有明确的降低血压作 用[7_8’16]。麻黄可以双向调节血压[9]。大黄能抑 制去氧肾上腺素及组胺诱导的血管收缩反应;大 黄还是钙离子拮抗剂，能够阻止钙离子进入细胞， 从而使血管松弛，阻力减小，血压降低;大黄中含 有大黄素、大黄蒽醌衍生物，其中大黄素有利尿、 排尿的效果，大黄蒽醌衍生物对高血压发病过程 中血管紧张素转化酶有抑制作用，从而降低血 压[6]。甘草有类激素样作用，可抑制激素对自身 受体的下调作用，增强和延长激素疗效，其含有的 甘草酸影响肾上腺素的敏感性[17]，是否对血压及 RASS系统产生影响，还有待于进一步研究。目前，高血压的治疗原则要求不仅要降低血 压，更应关注24 h的血压是否获得平稳控制，清 晨血压是否相应降低，血压变异是否降低，谷峰比 值是否高于50%，并发症的发生是否减少等。本 实验显示，大黄麻黄方能够降低大鼠血压、改善 RASS系统功能，维持血压昼夜节律，有关机制有 待进一步深入研究证实。

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(收稿日期：2016 -05 -11) (本文编辑:曹志娟）

(上接1682页）

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(收稿日期:2016 -09 -27)(本文编辑:董军杰）

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