论著・ ２０１０年ｌ２月第７卷第３６期 康菜特对小鼠肝癌细胞Ｈｅｐａｌ一６增殖 和凋亡的影响 武晋荣 ．赵和平 （１．山西医科大学，¨ｌ西太原０３０００１；２．山曲医科大学第一医院，山西太原０３０００１） 【摘要］目的：探讨不同浓度、不同作用时间康莱特（ＫＬＴ）注射液对小鼠肝癌细胞Ｈｅｐａｌ一６增殖和凋亡的影响。方法： 采用Ｍ１Ｔｒ比色法观察不同浓度ＫＬＴ对小鼠肝癌细胞Ｈｅｐａｌ一６增殖抑制作用。ＨＥ染色光镜下观察细胞结构的 改变。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：ＫＬＴ对小鼠肝癌细胞Ｈｅｐａｌ一６有明显的抑制效应，呈时间、浓度依赖 性（尸＜０．０１）。光镜下可见细胞形态趋向良性分化。流式细胞仪检测，ＫＬＴ作崩Ｈｅｐａｌ一６细胞４８ ｈ后，均出现凋亡 峰，凋亡率呈浓度依赖性（Ｐ＜０．０１）。结论：ＫＬＴ可通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡来抑制小鼠肝癌细胞Ｈｅｐａｌ一６ 的生长。 『关键词】康菜特；肝细胞癌；细胞增殖；细胞凋亡 【中图分类号］Ｒ７３５ 【文献标识码】Ａ 【文章编号］１６７３—７２１０（２０１０）１２（ｃ）一０１８—０３ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｋａｎｇｌａｉｔｅ ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｈｅｐａｔ０ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｈｅｐａ１．．６ ｃｅｌｌｓ ｗｕ Ｊｉｎｒｏｎｆ，ＺＨＡ０ Ｈｅｐｉｎｆ （１．Ｓｈａｎｘｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ ０３０００１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｘｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ ０３０００１，Ｃｈｉｎａ） 【Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｋａｎｇｌａｉｔｅ ｆＫＬＴ）ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ＭＴＴ ａｓｓａｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＫＬＴ ｏｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｈｅｐａｔｏｅｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ．Ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｆｔｅｒ ＨＥ ｓｔａｉｎｉｎｇ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ ａｓｓａｙｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｙ．Ｒｅｓｕｌｒｔｓ：ＫＬＴ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ａｎ ｏｂｖｉｏｕｓ ｔｉｍｅ—ａｎｄ—ｄｏｓｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎ— ｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ Ｈｅｐａ１—６ ｃｅｌｌｓ（ ０．Ｏ１），ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｔｒｅｎｄ ｂｅｎｉｇｎ．Ａｆｔｅｒ ４８ ｈ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｂｙ ＫＬＴ，ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａｎ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｐｅａｋ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒａｔｅ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ａｎ ｏｂｖｉｏｕｓ ｄｏｓｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ Ｈｅｐａｌ－６ ｃｅｌｌｓ（尸ｌ＜０．Ｏ １）．Ｃｏｎ－ ｃｌｕｓｉｏｎ：ＫＬＴ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｄｕｃｅ ａｎ ｏｂｖｉｏｕｓ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｎ ｍｏｕｓｅ Ｈｅｐａｌ一６ ｃｅｌｌｓ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｋａｎｇｌａｉｔｅ；Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ；Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ 康莱特（ＫＬＴ）注射液是从传统中药薏苡仁中提取的新 【作者简介】武晋荣（１９８２一），女，２００８级山西医科大学在读硕卜研究生； 研究方向：老年医学肿瘤学。 型双相广谱中药抗肿瘤药物，临床上多用其静脉乳剂，研究 表明＿１－２］，ＫＬＴ具有阻滞肿瘤细胞有丝，抑制肿瘤细胞增 殖，诱导肿瘤细胞凋亡，影响癌基因表达，抑制肿瘤新生血 ［通讯作者】赵和平（】９５４一），男，教授，大学本科；研究方向：老年医学刖， 瘤学。 管生成，渊节细胞冈子水平以及逆转多药耐药等作用，而且 能明 改善患者的生存质量口 。目前ＫＬＴ对小鼠肝癌细胞 ［３］ＭｃＫｅｏｗｎ ＳＴＷ，Ｈｙｌａｎｄ ＰＩ ，Ｌｏｃｋｅ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｓｃａｔｔｅｒ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｒｅｇｉｏｎａｌｌｙ ｄｅｆｔｎｅｄ ０ｒａｌ ｉｆｂｒｏｂｌａｓｔｓ ．Ｅｕｒ Ｊ Ｏｒａｌ Ｓｃｉ，２００３，¨ｌ：４２—５０． ｈｅｐａｔｏｅｙｔｅ ａｎｄ ｋｅｒａｔｉｎｏｅｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｂｕｃｃａｌ～ｍｕｃｏｓａ— ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｎｏｒｍａｌ－ｓｋｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ［Ｊ１．Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ Ｓｃｉ，２００２，３０：１０８—１ １５． ｆ４】王琨，许彦枝，朱嚎噱．人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞生物学活性 的研究『Ｊ］．牙体牙髓牙周病学杂志，２００８，ｌ８（６）：４０—７０． ［５】郭甫坤，吴曙光．白介素一ｌ信号转导研究进 ＩＪ］．国外医学：分子生物 学分册．２００１，１３…：１３ ｌ５． ｆ６１ Ｚｉｎｉ Ｎ，Ｌｉｓｉｇｎｏｌｉ Ｇ，Ｓｏｌｉｍａｎｄｏ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｉｔ ｌ—ｂｅｔａ ａｎｄ ＴＮＦ—ａｌｐｈａ ｉｎｄｕｃｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｎｕｃｌｅａｒ ｐ０ｌｙｐｈｅ。ｐｈｏｉｎ０ｓｉｔｉｄｅ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ ｓｉｍｉｌａｒ ｔｏ ｔｈａｔ—ｅｕｒｒｌｎｇ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ： ｆ ８】Ｐｕｔｎｉｎｓ ＥＥ，Ｓａｎａｉｅ ＡＲ，Ｗｕ Ｑ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ＣＤ一１４ ａｎｄ ｔｏｌｌ—ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ２ ａｎｄ ４［Ｊ１＿Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ，２００２，７０（１２）：６５４１—６５４８． ｆ９］Ｄａｂｅｌｓｔｅｅｎ Ｓ，Ｗａｎｄａｌｌ ＨＨ，Ｇｒｏｎ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｋｅｒａｔｉｎｏｅｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｌａ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ【ＪＪ．Ｅｕｒ Ｊ Ｏｒａｌ Ｓｃｉ， １９９７，１０５（６）：５９３－５９８． 【１０］Ｍａｃｋｅｎｚｉｅ ＩＣ，Ｇａｏ ＺＲ．Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇｉｎｇｉｖａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ａｆｔ ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｅａｌ ａｎｄ ｉｍｍｕｎ０ｃｙｔ０ｃｈｅｍｉｃａ１ ｓｔｕｄｙ［Ｊ１．Ｈｉｓｔｏｅｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２００３，１ ２０（３）：２４３—２５０， ［７１ Ｏｋａｚａｋｉ Ｍ，Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ Ｋ，Ｕｃｈｉｄａ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｅｌｅｖａｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ １ ８巾国医药导报ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ ｒｅｔｉｎｏｉｅ ａｃｉｄ［ＪＪ．Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ，２００１，７２（４）：４４５—４５３． （收稿日期：２０１０—１１－０８） ２０１０年ｌ２月第７卷第３６期 ・论著・ Ｈｅｐａｌ一６抗肿瘤作用的机制还缺少全面的研究。本实验旨在分 析康莱特是否是通过抑制Ｈｅｐａｌ一６细胞增殖、诱导Ｈｅｐａｌ一６ 细胞凋亡来发挥抑瘤作用，为其在临床应用巾提供进一步的 理论依据。 １材料与方法 １．１实验材料 ２结果 ２．１ ＫＬＴ对Ｈｅｐａｌ一６细胞生长的抑制效应 Ｈｅｐａｌ一６细胞在ＫＬＴ不同剂量、时间作用后．Ｍ Ｉ］ｒ法观 察细胞生长情况结果尔：随着ＫＬＴ剂量的逐渐增加、作用时 间逐渐延长，其细胞生长抑制率逐渐增加。各给药组与Ａ组 比较，差异均有统计学意义（均Ｐ＜０．０１）；各给药组组间比较 示：与Ｂ组比较，Ｃ组与Ｂ组（尸＞０．０５），Ｄ组与Ｂ组（Ｐ＜０．０１）； 与Ｄ组比较，Ｅ组与Ｄ组（尸＞０．０５），Ｆ组与Ｄ组（Ｐ＜０．Ｏ１）。提 １．１．１药物与试剂康莱特注射液（１００ ｍｌ／瓶，浙江康莱特药 业有限公司，国药准字：Ｚ１０９７００９１）；ＤＭＥＭ培养液为Ｉｎｖｉｔ— ｒｏｇｅｎ公司产品，小牛血清、胰蛋白酶及噻唑兰（ＭＴＴ）均购自 武汉博士德生物工程有限公司；青霉素、链霉素为ＨｙＣｌｏｎｅ 示，ＫＬＴ对Ｈｅｐａｌ一６细胞的抑制作用呈剂量、时间依赖关系： 并且ＫＬＴ以１０、３０、５０ ｍｌ／Ｌ作用时，细胞抑制率显著，因此． 公司产品。二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）：天津市化学试剂公司。 １．１．２主要仪器ｚｓ一２板式酶标仪（中国航天工业总公司），ＳＷ— ＣＪ—ＦＤ型超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司），流式细 胞仪，ＣＯ 细胞培养箱，普通台式离心机。 １．２细胞培养 小鼠Ｈｅｐａｌ一６肝癌细胞株购于中国农科院细胞库，以含 体积分数为１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培养基，在３７℃、５％ＣＯ 、 饱和湿度条件下常规培养。隔天换液一次，３～４ ｄ传代一次。 取对数生长期细胞制备单细胞悬液进行不同的实验。 １．３ ＭＴＴ法检测细胞抑制情况 取对数生长期细胞稀释为１ｘｌ０￣ｍｌ密度每孑Ｌ ２００ ＬＬｌ移 入９６孑Ｌ培养板中。加入ＫＬＴ组Ｂ（１０ ｍｌ／Ｌ）、Ｃ（２０ ｍｌ／Ｌ）、 Ｄ（３０ ｍＵＬ）、Ｅ（４０ ｍｌ／Ｌ）、Ｆ（５０ ｍｌ／Ｌ）的１０％胎牛血清ＤＭＥＭ 培养液。另设Ａ组（空白对照组，１０％胎牛血清ＤＭＥＭ培养 液）。分别培养２４、４８、７２ ｈ，实验终止４ ｈ前加入Ｍ１Ｔｒ液 （５ ｍ￣ｍ１）２０ ｔｘｌ。弃上清，加入ＤＭＳＯ １５０ ｔｚｌ，振荡１０ ｍｉｎ使 结晶溶解，用酶标仪（波长４９０ ｎｍ）测定吸光度（ＯＤ）值，重复 ３次取平均值。药物对细胞生长的抑制率：抑制率（ＩＣ）＝（空 白对照组ＯＤ均值一用药组ＯＤ均值）／空白对照组ＯＤ均值× １００％。 １．４光镜观察细胞形态学改变传代试验 取对数生长期细胞稀释为１ｘｌ０５／ｍｌ密度每孔１ ｍｌ接种 于放有盖玻片的６孔板中，细胞贴壁后，随机分为四组，分别 加入ＫＬＴ（Ｂ、Ｄ、Ｆ），并设Ａ组作为对照（每孔总液量均为 ２ ｍ１），培养４８ ｈ后取出覆盖有细胞的盖玻片，ＰＢＳ洗３次， 浸入４０ ｇ，Ｌ多聚甲醛中同定１５ ｍｉｎ，ＰＢＳ洗２次，常规苏木 精一伊红染色，光镜下观察细胞结构变化。 １．５流式细胞术测定细胞凋亡率 取对数生长期细胞消化成单细胞悬液置６孔培养板．培 养２４ ｈ后弃上清，加入ＫＬＴ（Ｂ、Ｄ、Ｆ），每种浓度设平行４孔 （即每种浓度重复４次），并设Ａ组作为对照，继续培养４８ ｈ 后，加入０．２５％的胰酶１ ｍｌ将细胞消化，置入离心管中，离心 （１ ０００ ｒ／ｍｉｎ，５ ｍｉｎ），弃上清；ＰＢＳ洗２次，离心、弃上清，加 ７０％无水乙醇２ ｍｌ固定，振荡混匀，离心，弃上清，过３００目 筛子，ＰＢＳ洗３次，加入１ ｍｌ ＰＩ工作液，４ｃＣ避光染色３０ ｍｉｎ。 流式细胞仪分析 １．６统计学方法 采用ＳＰＳＳ １６．０软件进行分析，计量资料数据以均数４－标 准差（ ±ｓ）表示，采用单因素方差分析及ＬＳＤ—ｔ检验．Ｐ＜０．０５ 表示差异有统计学意义。 后续实验用此三种浓度进行。见图１。 图１ 细胞增殖抑制率《％） Ｆｉｇ．１ Ｃｅｌｌ Ｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ（％） ２．２ ＫＬＴ对Ｈｅｐａｌ－６细胞形态及传代试验的影响 光镜永，Ｈｅｐａｌ一６胞质呈粉红色，胞核呈深蓝色。Ａ组细 胞形态呈多边形或三角形，伪足多、长，满视野瘤巨细胞及 核相。随着给药浓度增加，细胞伪足渐回缩，细胞形态 变小、圆，细胞轮廓清晰度增强，排列松散或聚集成团，细胞 相渐减少，瘤巨细胞渐减少。传代试验表明，Ａ组细胞 生长快，增殖旺盛，３～４ ｄ传代一次，随着给药浓度增 加，传代能力逐渐下降且失去传代能力，出现悬浮现象。上 述现象表明，细胞形态及传代试验与药物浓度呈依赖性．见 图２ 豳麓 图２不同浓度ＫＬＴ作用Ｈｅｐａｌ一６细胞形态结构观察（ＨＥ，ｘ２００） （Ａ：对照组；Ｂ、Ｄ、Ｆ：依次为ＫＬＴ １０、３０、５０ ｍｌ／Ｌ组） Ｆｉｇ．２ Ｔｈｅ ｅｆｆｅ￣ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅｓ ｏｆ ＫＬＴ ｏｎ ｓｈａｐｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｈｅｐａｌ－６ ｃｅｌｌｓ （Ａ：Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ；Ｂ，Ｄ，Ｆ：Ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ＫＬＴ １０，３０，５０ ｍｌ／Ｌ） ２．３ ＫＬＴ对Ｈｅｐａｌ一６细胞凋亡的影响 不同剂量ＫＬＴ作用Ｈｅｐａｌ一６肝癌细胞４８ ｈ后．均在 ＧｄＧ 期前出现一个亚二倍体峰，且该峰随着ＫＬＴ作用浓度 ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ巾国医药导报１ ９ ・论著・ ２ １ —— ２０１０年１２月第７卷第３６期 Ａ 法观察．结果表明，ＫＬＴ能够有效抑制肝癌Ｈｅｐａｌ一６细胞增 殖，抑制率呈明显的时间、浓度依赖性，且１０、３０、５０ ｍｌ／Ｌ抑 制作用明显。 苏伟贤等罔将不同浓度的ＫＬＴ作用于人ＳＧＣ一７９０１胃癌 细胞，研究发现随着药物浓度增加．胃癌细胞核浆比例显著 缩小，细胞恶性程度降低，细胞分化趋向良性；本研究细胞爬 片ＨＥ染色示，发现给药后Ｈｅｐａｌ一６肝癌细胞伪足回缩．细 ｔ。０ｌ Ｊ ３｝ —Ｊ■ ０ 蝴６口。躺胞变小、变圆，核相减少，出现悬浮现象，传代能力减弱， 且呈浓度依赖性。进一步提示Ｋ１ Ｔ可能在一定程度上能够 张 图３不同浓度ＫＬＴ作用Ｈｅｐａｌ一６细胞４８ ｈ的细胞凋亡率 Ｆｉｇ．３ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅ ｏｆ ＫＬＴ ｏｎ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ Ｈｅｐａｌ－６ ｃｅｌｌｓ （Ａ：对照组；Ｂ～Ｆ：依次为ＫＬＴ １０、３０、５０ ｍｌ／１ 组。１：凋亡峰；２：ＧｄＧｌ期 细胞；３： Ｍ期细胞；２—３：Ｓ期细胞） （Ａ：Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ；Ｂ－Ｆ：Ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ＫＬＴ １ ０、３０、５０ ｍｌ／［ ．１：Ｔｈｅ ｐｅａｋ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；２：ＧｇＧｉ ｃｅｌｌｓ；３：Ｃ Ｍ ｃｅｌｌｓ；２—３：Ｓ ｃｅｌｌｓ） 的增高而升高（图３）。经ＫＬＴ（Ｂ、Ｄ、Ｆ）作用４８ ｈ后，细胞凋 亡率分别为（７．８６￣０．４０）％、（１２．３４＿＋１．０９）％和（２８．６７￣０．８５）％， 而对照组仅为（２．８８￣０．３０）％，各药物组与对照组比较、各药 物组间比较，差异均有统计学意义（均Ｐ＜０．０１）。 ３讨论 原发性肝癌系全球发病率和死亡率均较高的恶性肿瘤 之一，且近年来发病率有上升趋势［ｚ３。目前临床治疗肝癌仍以 手术、放疗、化疗为主，但７０％～８０％的患者就诊时已失去手 术最佳时期。临床常用的西药化疗物虽有很强的癌细胞杀伤 性，但药物的毒副作用使体质较差的患者难以耐受，极大地 降低了患者的生存质量。因此，临床上寻求一种既能抑制肝 癌的生长，又无明显的毒副作用、提高患者生存质量的药物 迫在眉睫。 恶性肿瘤包括肝癌在内．共同生物学特征是细胞的失控 增长，即细胞凋亡与细胞增殖失衡。因此，抑制肿瘤细胞增殖 和诱导肿瘤细胞凋亡已成为目前肿瘤综合治疗的重要途径 之一 。ＫＬＴ注射液是从传统中药薏苡仁中提取的新型双相广 谱中药制剂．具有多靶点治疗、提高晚期癌症患者的生存质 量和毒副作用小等优点．目前临床已应用于ｔｉｅｄ，细胞肺癌问、 胃癌阎、大肠癌 等恶性肿瘤的综合治疗中。本研究通过ＭＴＴ ２０田国医药导报ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ 诱导肿瘤细胞向正常细胞分化。 细胞凋亡是指为维持内环境稳定而出现的一种南多种 凋亡相关基凶控制的细胞自主的有序死亡．受细胞内源性 基冈、酶类和信号转导途径的。研究认为，细胞凋亡功 能的抑制将导致肿瘤的发生㈣。因此，以选择性诱导肿瘤细 胞凋亡已成为肿瘤治疗的重要策略之一… 。本研究采用流 式细胞术发现ＫＬＴ可以诱导Ｈｅｐａｌ一６肝癌细胞株发生凋 亡，且凋亡峰随着ＫＬＴ作用浓度的增高而升高，细胞增殖受 到抑制，提示ＫＬＴ抗肿瘤作用可能通过其促凋亡机制来实 现。 【参考文献］ 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ｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｊ１＿Ｂｌｏｏｄ，２００７，１ １０（１０）：３７２９—３７３４． ［１２１ Ｇｈｏｓｈ ＡＫ，Ｖａｒｇａ Ｊ．Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｎｄ ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｐ３００ ｉｎ ｉｆｂｒｏｂｌａｓｔ ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｆｉｂｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００７，２１３（３）： ６６３－６７１． （收稿日期：２０１０—１０—２０）
